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1、玉林师范学院本科生毕业论文千斤拔对离体坐骨神经腓肠肌收缩特性的影响Flemingia Philippinensis Merr. et Rolfe Impact on Vitro Sciatic Gastrocnemius Shrinkage Characteristics院 系 生命科学与技术学院 专 业 制药工程（生物制药方向）学 生 班 级 2011 级 姓 名学 号 201110403146 指导教师单位 生命科学与技术学院 指导教师姓名指导教师职称 教授 千斤拔对离体坐骨神经腓肠肌收缩特性的影响制药工程 2011 级制药 11 班 指导老师 摘要摘要目的：目的：探讨千斤拔水提液(Fle
2、mingia philippinensis Merr. et Rolfe Decoction)对青蛙离体坐骨神经腓肠肌收缩特性的影响。方法方法：将解剖剥制的坐骨神经腓肠肌标本分别用浓度为0.7%的生理盐水、0.125g/mL、0.25g/mL、0.5g/mL的千斤拔水提液浸润，用RM6240生物信号采集仪测定每一浓度浸润前、浸润5分钟、浸润10分钟、浸润15分钟各时间点的腓肠肌收缩的阈强度（每一时间点分别测定5次）和完整单收缩曲线(每一时间点测定25次）的收缩速率、舒张速率、收缩幅度以及潜伏期等指标。结果结果：在浸润处理短时间下，腓肠肌收缩阈强度随着千斤拔水提液浓度的增加而升高，但小于用药前水
3、平（P0.05 )。表明当千斤拔水提液浓度较低且处理时间较短时, 坐骨神经腓肠肌的阈强度降低(P0.05 ), 即兴奋性降低, 甚至低于用药前水平。据记录以及统计学分析据记录以及统计学分析表表 1 1 千斤拔对青蛙坐骨神经腓肠肌阈强度（千斤拔对青蛙坐骨神经腓肠肌阈强度（/v/v）的影响（）的影响（xs）TableTable 1 1 FlemingiaFlemingia philippinensisphilippinensis Merr.Merr. etet RolfeRolfe impactimpact onon frogfrog sciaticsciatic gastrocnemiusgas
4、trocnemius thresholdthreshold intensityintensity (/v)(/v) （xs）与阴性对照组相比：*P0.05 )；中、高浓度时腓肠肌的收缩幅度下降显著，差异有极显著意义(P0.05）；组低、中浓度时潜伏期降低，差异有极显著统计学意义（P0.05）；其余各组各浓度腓肠肌潜伏期变化幅度较大，差异均有极显著统计学意义（P0.05）；组腓肠肌的潜伏期降低幅度较大，差异有显著统计学意义（P0.05）。通过对实验数据的对比分析，表明青蛙坐骨神经腓肠肌的潜伏期受浸润溶液中千斤拔浓度的影响。青蛙坐骨神经腓肠肌的潜伏期随着千斤拔浓度的增加先降低后升高，但整体呈现一个
5、降低的趋势。表表 5 5 千斤拔对青蛙坐骨神经腓肠肌潜伏期（千斤拔对青蛙坐骨神经腓肠肌潜伏期（/ms/ms）的影响（）的影响（xs）TableTable 5 5 FlemingiaFlemingia philippinensisphilippinensis Merr.Merr. etet RolfeRolfe impactimpact onon frogfrog sciaticsciaticgastrocnemiusgastrocnemius incubationincubation (/ms)(/ms) （xs）与阴性对照组相比：*P0.05，*P 0.01；与阳性对照组相比：P0.05，P
6、 0.015.讨论讨论5.1 千斤拔水提液活性物质对青蛙离体坐骨神经腓肠肌收缩特性的影响近年来，对千斤拔的研究已经取得了初步的进展，涉及其化学成分、药理 作用、提取工艺等多个方面，研究水平日趋深入，研究领域不断扩大。研究表分组组组组阴性对照组（0.7%g/ml）12.1500.85711.3831.11612.4731.582低浓度（0.25g/ml）8.8130.216*9.1850.254*11.000.300*中浓度（0.5g/ml）9.9670.189*10.7240.161*11.020.526*高浓度 （1g/ml） 11.460.361*11.3150.10312.7160.12
7、5*西洋参对照组 （0.7%g/ml） 12.1161.51611.3381.44611.7330.517*14明，千斤拔含多种黄酮类化合物，已确定结构有：蔓性千斤拔素 （flemiphilippinin）C、D。此外还含 5，7，3，4-四羟基-6，8-双异戊烯基 异黄酮（5，7，3，4-tetrahydroxy-6,8-diprenylisoflavone），千斤拔素 （flemichin）D，羽扇豆醇（lupeol），-谷甾醇（-sitosterol）以及碳原子数 为 22-30 的正烷酸。千斤拔具有补气血，助阳道等药理作用，但黄酮类是否为 千斤拔药理作用的活性物质基础还有待进一步研究。
8、另外，毛俐等14也发现千斤拔所含微量元素中钙离子含量最多。在正常生 理条件的基础之上, 人为在神经肌肉接头处加入非毒剂量 Ca2+之后, 由于进入 神经肌肉接头处的 Ca2+增多, 就会使更多的 SNARE 复合物与 Syt 蛋白在 Ca2+ 介导下结合, 形成更多融合孔使更多神经递质释放, 从而使得腓肠肌收缩曲线 振幅增大。证明 Ca2+可以加强神经的兴奋性, 即其可以促进神经递质的释放。 神经肌肉接头处, 相当于中枢的突触小体, 二者的作用机制相同, 故可以依此 来代替中枢突触小体进行实验21。所以探讨千斤拔对骨骼肌收缩作用将会对研 究中枢神经兴奋传递，神经肌肉兴奋机制具有相当重要的意义。
9、本实验使用水煎法提取千斤拔的生药成分，选用骨骼肌收缩实验的研究，证明千斤拔水提液对骨骼肌收缩特性的影响效果，由千斤拔成分富含钙离子等神经兴奋成分为研究切入点，千斤拔水提液对神经肌肉的作用可能与钙离子的作用有类似，千斤拔水提液可以在适合浓度下促进神经递质的释放，但在千斤拔的高浓度和长时间浸润过程中也可能受到其他成分的合力影响，使得神经肌肉的兴奋同化更强或者异化抑制。5.2 千斤拔水提液对青蛙离体坐骨神经腓肠肌收缩能力的影响骨骼肌收缩实验结果表明，千斤拔水提液对增强骨骼肌兴奋性、收缩幅度，收缩速率、舒张速率有明显作用，低生药浓度时，对骨骼肌各收缩指标有增强作用，但超过一定的浓度和时间，千斤拔对骨骼
10、肌的收缩也起到了明显的抑制作用。然而千斤拔对骨骼肌潜伏期的影响并不明显，说明千斤拔并没有影响到终板处递质的释放以及兴奋向肌肉深处的传导这一过程，即未影响神经肌肉兴奋信号传递的速度，但该结果及其机制还需要进一步的验证。孙洪兆等20对钙离子研究显示，低钙溶液极显著性的增强了蟾蜍离体腓肠肌的收缩能力, 而高钙溶液极显著性的抑制了蟾蜍离体腓肠肌的收缩。本实验宏观地研究了生药千斤拔水提液对神经肌肉的影响，说明千斤拔可能与钙离子一样，影响神经肌肉接头的细胞膜电位，影响神经传导以及影响钙离子通过离子通道在突触小体的15传递释放机制。可见本实验方案通过测定坐骨神经腓肠肌标本的收缩情况, 可以宏观地反映千斤拔水
11、提液影响神经递质释放的机制。实验结果中，高浓度千斤拔溶液抑制了离体腓肠肌的收缩, 其原因可能是千斤拔水提液使得细胞外液钙离子浓度的增加并通过某种途径导致肌细胞内肌质网钙离子释放的量减少从而导致肌肉收缩能力的下降。而低浓度的千斤拔溶液促进了离体腓肠肌的收缩；其原因可能是由于腓肠肌暂时缺失中枢对钙离子调节而导致千斤拔溶液中的钙离子进行了短暂受体竞争，所以也可用此解释实验结果中短时间内低浓度千斤拔溶液有兴奋作用的效果。综上所述，该研究显示，日常生活中利用千斤拔进行保健作用或者作为食用材料时，应避免千斤拔用量过大或者长时间煎熬，避免对健康造成影响。至于低浓度千斤拔对离体骨骼肌兴奋作用和高浓度千斤拔对离
12、体骨骼肌抑制作用的微观分子机制, 本研究尚未涉及, 有待继续研究，做进一步的考证，千斤拔对腓肠肌产生作用的真正的具体的活性物质和机理还有待进一步的研究确定，并应对其进行质量标准控制，为对千斤拔生理研究提供更可靠的依据。 5.3 千斤拔药理作用的研究展望千斤拔成分复杂，目前，千斤拔药理作用的具体活性物质和机理尚不十分明确，还有待进一步研究确定，并对其进行质量标准控制。本次研究只是初步探讨了千斤拔水提液对青蛙离体坐骨神经腓肠肌的影响，影响效果明显，但是起影响作用的具体活性物质和分子机理有待进一步研究确定。千斤拔所含的异黄酮类、酚类、鞣质、糖类、甾醇、生物碱和氨基酸类等药理药效研究还很少，因此，值得
13、对其开发利用并进行深入的研究。此外，以期找到其发挥作用的确切活性物质，这就要求我们对其要有更深入的了解，对它的研究方法，更深层次开发等都要求我们对其展开进一步的调查和研究。16致谢致谢光阴似箭，日月如梭，时间流逝得很快，转眼间，大学生活即将过去，本人从进入生命科学与技术学院制药工程专业（生物制药方向）学习以来，我要向所有给予我关怀、教诲、支持和帮助的人致以我最诚挚的感谢！在此首先要感谢我的导师王教授。王老师不但学识渊博,而且工作严谨负责。王老师虽然平时工作繁多，但她还是经常抽空耐心指导我完成实验，并时常询问我的专业学习情况。在我做毕业论文设计的过程中，从查阅资料到开题报告草案的确定和修改，中期
14、检查，后期试验阶段，毕业论文的起稿和修改等整个过程她都给予了我悉心的指导。其次要感谢在本次论文的实验与写作期间，帮助过我的黎老师、苏老师、梁老师等等，通过他们提供的设备、器材、17实验药品等，我此次的论文实验才能顺利地完成。春风化雨，感谢师恩，愿和蔼可亲的老师们在研究的方向开拓更高更新的领域。再者，我还要感谢、师兄师姐们，是他们一步步地带领着我，让我从一无所知到能熟练掌握实验操作。还有本实验室实验组的各位成员（王娟、潘言、麦小杰、梁芳、杨明、陶娟同学）及制药 12 班的李楠、郑玲等帮助过我的同学，正是因为有了他们的相伴和帮助，繁重的实验任务才得以顺利完成，在此我深表感谢！最后感谢学院，给我提供
15、这样一个良好而广阔的学习平台，引导我树立了积极向上、乐观的人生态度，培养我踏实严谨的做事风格，让我能够放飞理想。我会在以后的人生道路上，不断地完善自己，提高自己，努力实现个人的自身价值和社会价值，回报母校，回报社会。参考文献参考文献1陈鹏,翁剑斌，殷虎，等.千斤拔属植物提取工艺及药理作用研究进展J. 陕西中医，2013,34（2)：247-249.2蔡毅，梁雁，李小云，等.广西3种千斤拔的生药学鉴定J.华西药学杂 志2012，27（5）：493-495.3饶伟文,黄建楷,温志芳,等.千斤拔的品种调查与质量研究J.中草药, 1999, 30(3)：219-221.4冯世鑫,马小军,柯芳.影响蔓性千斤拔种子萌发的因子研究初报J.广 西医学, 2006, 28(6)：810-8111.5陈敏,罗思齐,陈钧鸿.蔓性千斤拔化学成分的研究J.药学学报,1990, 26(1)：42-481.6刘建华，高丽欣，高玉琼，等.千斤拔挥发性成分的研究J.中成药, 2003, 25(6)：485-4871.187管艳红，曾君，张丽霞.千斤拔制剂研究概况及在傣医中的应用J.中 国民族医药杂志,2008-10-15.8 陈帅 ，王慧竹超声波辅助提取千斤拔中总黄酮的工艺研究J安徽
