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1、!“ 卷# 期 #$“ 年 ! 月微生物学报 !“#$ %6,： ?,ABCD6(3E(C=作者简介： 王岳坤 （19/9 F ） ，男， 广东普宁人， 助理研究员， 硕士， 主要从事微生物分子生态学研究。23： ./8.9.8#00$1“!； :8;6,： 7G6=H?A1#/(C&;收稿日期：#$!8$.81#， 修回日期： #$“8$18$!红树林土壤细菌群落 !“# $%， 取样时间为 #$0 年 I 月。每种土样采自不同红树植物的土壤。它们是：!木榄；“木果楝；#桐花木；$红 树；%海漆；组） ， 组内各土样采样地点之间距离小于 0$;， 组间各土样采样点之间距离大于 1$;。!/!
2、/0主要试剂和引物： 试剂盒 V,W6+E MNO M+3*BJ-) M+,X,C6D, 购自美国 M+&;36 公司，MNO5+6;3=D O3C 抽提缓冲液， 按参考文献 #，0 的方法抽提土壤 J-)， 得到 J-) 粗提液 “$%? A$B*C7D ?CE+FCAG H6D 纯化土壤 !“#。!“#!$% ()!-， . I %? 缓冲液 （含 JB%;L MN% （.O*+O*+)(3 9 .） ， 电泳缓冲液为 . I /#Y， 变性梯度 51 : )1， %? 纯化物 )!- Z 2 I -+$K67B =WXXCA 5!-。电压 5， 24， 电泳 5(3， 银 染2。摄影后切
3、出.5 号样品 #、 0 两个条带， 放置于.(3!- 离心管。 !“1基因克隆和序列分析#从 !NNY 条带中回收 !“#： 加 .!- 洗脱缓 冲液 （(3*+)4 水浴 3； .5A,*67 离心 .*67， 取上清液)； 用试剂盒回收 !“#。“以纯化物为模板， 按 .(; 节所述方 法进行 %? 扩增并纯化 %? 产物。$将 %? 纯化 物用 /$H$?$ OJ!.LM/ CED+A 进行克隆， 得到文库 # 和文库 0。%从文库 # 中挑取 .; 个克隆子， 从文库0 挑出 个克隆子， 由上海生工生物工程技术服务 有限公司测序。 将含两端引物 （去除 NM% 夹） 的.2Q A!“
4、# ; 高 变区克隆子序列， 通过 “%0S 查找比对 （0 片段 %? 产物， 可以看到分离为若干条带， 但不同土壤样品的.2Q A!“# ; 片段 %? 产物出现的带型有一定差别（图 .、 图 5）。图 !$% XA$B*C7DV %? OA+KWEDV$*O6)(2)%“4 2-%+(2-1(种土样的 !NNY 图谱表现较大的差异， .5 号土样与(组其它土样的 !NNY 图谱也表现较大差异， 由此 可见红树品种是影响土壤细菌种群构成的另一重要因素。55微生物学报83 卷图 !“#$ %3.?A:-)8+“/“9? /3.8 -.“+B$） 的相似率达 0JJL， 可见 0% 号土样H1
5、DD10FH W 7EJHFV 0%4“+40/00 P)A:93“8 IBD0FJ5!JJEFEJ7%D W DH7HEJX*A+:39? P)A:93“8 IBE0FJ5!%7D0DD7JE W DFDH0JX*A+:39? P)A:93“8 IB10FJ5!71EG7H7%0 W DGHHDU 0X*A+:39? P)A:93“8 IBF01H5N7JFH%D7J0 W D1H0JJJ5)%*+40/ 以下， 否则 /)(? =00? ( 夏北成， RQJ5 S，TGCIUC S ; 分子生物学方法在微生物生态学中的应用; 中山大学学报 （自然科学版） ，!.)，% %0 (*; 精编分
6、子生物学实验指南; 颜子颖，王海林，译; 第一版; 北京： 科学出版社，!.)，(= /0? + D131H1,C X，TC$1NJ3J ，V531N131 Y，%0 (*; JECM5E1$ IC3CM3GJH，G4JE13GJH，1HI -QA4GJEJLGM1E MQ1$1M3C$GB13GJH JK K5HM3GJH1EEA IJNGH1H3-QCHJEPICL$1IGHL,1M3C$G1GH1M3GZ13CI4E5ILC;+,*!-. 分子克隆实验指南; 金冬雁，黎孟枫，等译; 第二版， 北京： 科学出版社，!.“? ) 龚子同， 张效补; 中国的红树林与酸性硫酸盐土; 土壤学报，!
7、./，%( （!） ： )“ .(? . Y5LCHQJE3B 8， 6JC,CE W ， 81MC N-1M3 JK M5E35$CPGHIC-CHICH3 435IGC4 JH 3QC CNC$LGHL -QAEJLCHC3GM ZGC JK ,1M3C$G1EIGZC$4G3A; 2 3(#0% #JGE MJNN5HG3A 1H1EA4G4 54GHL%667 JK !“# $% 6)* 6# 6)#+7 2， !()? ! #N1EE1 X，DGCE1HI 6，W5MQHC$ ，%0 (*; W5E2 1HI $QGBJ4-QC$C 4JGE,1M3C$G1EMJNN5HG3GC44
8、35IGCI,AICH135$GHLL$1IGCH3LCECECM3$J-QJ$C4G4：-E1H3PIC-CHICH3CH$GMQNCH31HI4C14JH1E4QGK34$CZC1ECI; +,* !-. !“? /;A B( /,.72-9 C05:72/,32 6D,4- /2,6940- C/0E8693D :CLGJH1E K1M3J$4 1HI N1HL$JZC 4-CMGC4 C$C KJ5HI 3J GHKE5CHMC 3QC 4JGE NGM$J,C MJNN5HG3A; TJ % #JNC MEJHC4 C$C 4Ca5CHMCI 1HI C1MQ 4Ca5CHMC 14
9、 MJN-1$CI G3Q 1EE H5MECJ3GIC 4Ca5CHMC4 GH 6CHW1H2 I131,14C; J43 MEJHCI 4Ca5CHMC4 C$C KJ5HI HJ3 GH 6CHW1H2 I131,14C; TQC4C $C45E34 45LLC43 3Q13 %667 KJEEJCI ,A MEJHC 3CMQHGa5C G4 1 -$1M3GM1,EC -$J3JMJE 3J $C4C1$MQ 3QC MJN-ECO MJNN5HG3A JK 4JGE NGM$J,C; G2: H0/E3：1HL$JZC 4JGE，!“# $% TCEbV1O： )“P).)P“.)/.“.；7PN1GE： QJHL25Gc4M531;CI5;MH:CMCGZCI I13C： 0)P!P00/0微生物学报/+ 卷
