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1、岛津国际贸易（上海）有限公司岛津国际贸易（上海）有限公司分析中心分析中心岛津高效液相色谱维护培训教材岛津高效液相色谱维护培训教材岛津企业管理（中国）有限公司分析中心日 常 维 护目的：维持仪器处于正常运作状态有效的降低仪器发生故障的频率延长仪器的使用寿命准备工作：使用&维护日志设备的耗材和备件维护工具盒试剂（甲醇、异丙醇、稀硝酸等）超声波清洗机液相系统维护流程图吸滤器吸滤器单向阀单向阀柱塞密封圈柱塞密封圈线路过滤器线路过滤器手动进样器手动进样器检测器检测器 色谱柱色谱柱一、输液系统输液系统日常维护部件排液阀吸滤头线性过滤器柱塞清洗流路密封圈保险丝主进口单向阀进口单向阀柱塞密封圈管 线 选 择管
2、 线 选 择?材料 不锈钢 特氟隆 (Teflon) 聚醚醚酮 (PEEK)?尺寸 0.1 mm I.D. x 1.6 mm O.D. 0.3 mm I.D. x 1.6 mm O.D. 0.5 mm I.D. x 1.6 mm O.D. 0.8 mm I.D. x 1.6 mm O.D.管 线 材 料管 线 材 料? 不锈钢不锈钢 (可用于所有连接可用于所有连接) 能承受几百能承受几百MPa 压力压力 酸性或高浓度盐环境中易腐蚀酸性或高浓度盐环境中易腐蚀 (尤其在尤其在pH小于小于2时时)? PEEK (可用于所有连接可用于所有连接) 能承受高达能承受高达 25MPa压力压力 可在整个可在整
3、个PH范围范围(pH 1-14)内使用内使用? Teflon (用于柱后阻尼管、反应管和排液管用于柱后阻尼管、反应管和排液管) 化学惰性大化学惰性大 仅能承受仅能承受 0.5MPa压力压力接 头接 头? 不锈钢接头不锈钢接头 / 垫圈垫圈主要用于输液泵、进样器的管路连接能承受主要用于输液泵、进样器的管路连接能承受 40MPa的压力的压力一旦固定，垫圈不可再动一旦固定，垫圈不可再动? PEEK接头接头主要用于色谱柱、检测器的管路连接易于安装能承受主要用于色谱柱、检测器的管路连接易于安装能承受 25MPa的压力的压力容易产生死体积容易产生死体积不锈钢接头垫圈PEEK接头死 体 积死 体 积产生原因
4、：由于管路连接不好产生的额外体积管线公螺母死体积好的连接差的连接死体积可能会引起分离度下降和重现性变差等问题吸 滤 器材料：不锈钢烧结(或陶瓷），孔径10um功能：防止较大固体不溶物进入液相色谱系统日常维护：定期使用异丙醇（或5稀硝酸）清洗故障：吸滤器堵塞现象：管路中不断有气泡生成措施：用异丙醇（或5稀硝酸）浸泡并进行超声波浴清洗，再用蒸馏水清洗至中性LC-20AT 输 液 泵串联式柱塞往复泵串联式柱塞往复泵选配件 支架压力传感器泵头主进口单向阀泵头固定座辅助进口单向阀主泵头 副泵头主泵头 副泵头单向阀LC-20AD 输 液 泵并联式微体积柱塞往复泵并联式微体积柱塞往复泵选配件支架进口单向阀出
5、口单向阀进液口泵头固 定座泵头泵头泵头泵头泵头单向阀单向阀压力传感器单向阀结构请不要分解阀心A和阀心B重新组装后性能不被保证，输液可能不稳定注意：单向阀故障处理故障 1：宝石球或球座受污导致密封不好表现：系统压力波动大措施：1）打开排液阀，以异丙醇为流动相输液2）拆下单向阀，放入异丙醇中，超声波浴清洗注意：超声波清洗时开口端向上放置。注意：超声波清洗时开口端向上放置。故障 2 ：宝石球粘附于垫片表现：泵无法吸液或排液，流路不通措施：1）用针筒抽出口单向阀，利用产生的负压使宝石球与垫片分开2）拆下单向阀，放入异丙醇或水中，用超声波浴清洗单向阀故障处理单向阀故障处理柱塞密封圈柱塞密封圈 LC-20
6、AD LC-20AB LC-10ADvp 部件号228-35146柱塞密封圈 LC-20AT LC-10ATvp 部件号：228-35145取下和安装 柱塞密封圈工具柱塞密封圈故障处理故障：密封圈磨损导致密封不良现象：系统压力波动大或漏液措施：更换密封圈注意： 拆卸泵头前，必须将柱塞杆复位（仪 器面板上的PSET界面）流动相泵头清洗管路柱塞杆密封圈线路过滤器故障：堵塞现象：系统压力偏高判断依据：关闭排液阀，断开出口管路，设定流速1mL/min，如压力0.5MPa，可以判定为线路过滤器堵塞。措施：以异丙醇(或5稀硝酸)为清洗剂，超声波浴清洗。再用水洗至中性。排液阀压力传感器线路过滤器流动相过滤器
7、的更换旧过滤器的取出新过滤器的安装如果清洗无法解决故障，需要更换线路过滤器。LC-20A系列泵 部件号：228-45574-91LC-10Avp系列泵 部件号：670-11518排 液 阀排 液 阀排液阀密封圈排液阀故障处理故障：排液阀密封圈密封不良或损伤现象：打开排液阀进行排气时，从装有排液阀的螺口处漏液措施：排液阀手柄按逆时针方向旋转取下，确认密封圈表面 情况。 ?如密封圈表面有损伤，请进行更换； ?如密封圈表面附有脏物，擦洗掉后重新安装好排液阀，再确 认是否仍存在漏液。混 合 器混合器不同体积的连接方法混合器故障处理常见故障：堵塞 混合器堵塞往往是由于混合器过滤组 件堵塞引起的。处理方法
8、： 按图中结构卸下过滤组件，5%稀硝酸 或其他溶剂超声波浴清洗或更换新的 组件标准或半微量混合器用 部件号：228-18872-93二、进样系统手动进样器手动进样器手动进样器手动进样器手动进样器操作注意事项手动进样器操作注意事项手动进样器操作注意事项手动进样器操作注意事项定子转子针头密封垫弹簧不锈钢套操作注意点：?进样请使用液相色谱专用平头进样针?进样时，进样针应插入针导管到底?清洗请使用专用进样口清洗器?样品溶液pH小于10, 常用密封垫的Vespel材 质（适用pH10）, 否则换Tefzel或PEEK材 质的密封垫（pH 0-14）?不使用手动进样器时将针头留在进样器内手动进样器维护要点
9、（1）将附件进样口清洗器进样口清洗器装在注射器上。（2）用注射液吸入清洗液 (试样溶液或者不含盐的流动相等)（3）在进样（INJECT）状态下，将进样口清洗器压接在针导管上，注入清洗液约1ml（4）使用缓冲溶液后，用纯化水清洗流路和针导管使用缓冲溶液后，用纯化水清洗流路和针导管（5）不能使用微型注射器清洗手动进样器不能使用微型注射器清洗手动进样器（6）请缓慢 推压注射器，以免引起清洗液反喷进样口清洗器手柄组件针导管 针管自动进样器Purge功能 仪器开机时，清除管路中可能存在的气泡； 清洗液改变时，替换清洗液； 建议时间设定为25min。Rinse 功能 样品进样过程中自动清洗针外壁，也可手动
10、进行额 外清洗。样品量 样品量应不少于样品瓶容积的1/3 ；1.5mL样品瓶底 部2mm处液体剩余量约150uL。自动进样器使用自动进样器清洗液选择反相 色谱模式： 50%甲醇/50%水，为避免发生沉 淀，应选择不含盐 的清洗液。若反相采用100有机相，采用100甲 醇作为清洗液。离子交换色谱模式： 100缓冲盐流动相，选择纯化水作为清洗液。正相色谱模式、GPC： 使用与流动相相同的溶剂作为清洗液。三、分离系统思 考 题现象：在分析样品过程中，系统压力不断升高。问题：如何确认压力升高的原因？如果确认是由色谱柱引起的压力升高，应如何处理？在实验过程中，如何避免这种情况出现？故障根源的确认：分段排
11、除法色谱柱常见故障分类色谱柱常见故障分类? 柱压过高不同色谱柱有差异不同系统有差异不同溶剂有差异? 柱效低? 重复性差? 回收率低甚至不出峰柱压过高柱压过高原因原因? 微粒堵塞微粒堵塞? 不可逆吸附不可逆吸附? 细菌生长细菌生长解决方法解决方法1.超声清洗色谱柱筛板2.微粒堵塞反冲色谱柱3. 不可逆吸附合适溶剂冲洗日常使用注意点日常使用注意点1. 过滤流动相和样品2. 恰当的样品前处理方法3. 使用保护柱4. 注意冲洗系统柱 效 低柱 效 低原因原因? 色谱柱被污染色谱柱被污染? 筛板堵塞筛板堵塞? 柱内死体积增加柱内死体积增加解决方法解决方法1.筛板堵塞反冲色谱柱/清洗筛板2. 柱内死体积增
12、加更换新柱 日常使用注意点日常使用注意点1. 使用合适的流动相（如合适的pH值范围：2-7.5）2. 防止机械震动和柱压急剧变化3. 妥善的保存色谱柱，并定期冲洗4. 关注色谱柱柱效变化重复性差重复性差原因原因? 色谱柱被污染色谱柱被污染? 流动相不合适造 成固定相损坏流动相不合适造 成固定相损坏? 样品溶剂不匹配 或者样品稳定性差样品溶剂不匹配 或者样品稳定性差解决方法解决方法1. 色谱柱被污染使用合适溶剂清洗色谱柱2. 流动相/溶剂不合适更换溶剂日常使用注意点日常使用注意点1. 使用合适的流动相2. 使用流动相溶解样品3. 考察样品稳定性（方法开发阶段）4. 定期清洗色谱柱例子：溶解样品的
13、溶剂选择不当例子：溶解样品的溶剂选择不当?建议使用流动相溶解样品，不要选择高溶解性的试剂甲醇 作为溶剂20 uLCaffeine乙醇 作为溶剂20 uLCaffeine乙醇 作为溶剂10 uLCaffeine?小贴士：方法开发 阶段，请选择合适的 进样量解决方法解决方法1. 样品吸附使用合适溶剂清洗色谱柱，并更换合适流动相2. 流动相/固定相不合适更换回收率低/不出峰回收率低/不出峰原因原因? “不可逆”吸附“不可逆”吸附? 流动相过弱或固 定相过强流动相过弱或固 定相过强? 非特异性吸附非特异性吸附日常使用注意点日常使用注意点1. 使用合适的流动相/固定相2. 采用恰当的样品前处理方法3.
14、定期清洗色谱柱色谱柱的使用注意点?购买新柱后请务必仔细阅读说明书，确认柱的使用条件以及清洗再生步骤。 按照说明书条件测试色谱柱柱效，保留所得色谱图，记录使用压力 ?定期检测柱压和柱效 ?不同流动相之间转换时应注意溶剂的互溶性 ?确认样品在流动相中有好的溶解度；进样前请使用0.45um或0.2um的一次性 滤膜过滤样品，或者进行其他前处理 ?为了延长色谱柱使用寿命，请使用保护柱。 ?定期用合适的溶剂（说明书推荐的溶剂）清洗或再生色谱柱 ?长期不用色谱柱时，应在彻底清洗后使用说明书中指明的溶剂保存柱子。 然后从仪器上卸下色谱柱，用堵头密封保存 ?定期用合适的流动相清洗保存的柱子，避免干涸四、检测系
15、统紫外检测器紫外检测器参比池样品池光线硅光电池板检测器基线异常基线噪音异常大 有气泡进入检测器流通池 检测器污染 灯老化出现漂移或不规则波动 系统污染，如色谱柱、管路、检测器和 流动相等等产生规则波动 室温变化（如空调出风口直吹检测器） 泵的脉动性能判断新的时候AB SMPL EN800100100REF EN900800150A:池子、透镜污染B:灯老化紫外检测器故障判断检测池清洗故障：样品池污染表现：样品池和参比池能量相差较大检查方法：设定250 nm波长，通甲醇或水，查看SMPL EN 和REF EN，如两者相差较大，则样品池污染措施：用针筒注入异丙醇，清洗样品池；如污染严重，拆开样品池
16、，将透镜等放入异丙醇中清洗。紫外灯的保养氘灯保证寿命为2000小时保证仪器的使用环境在分析前、柱平衡得差不多时，再打开检测器紫外灯；不要频繁的开关紫外灯，同样会损害紫外灯的寿命。一般间隔时间在三小时以上更换氘灯 判断氘灯能量：设定220nm波长，检查参比池能量，如能量低于800，需考虑更换氘灯。部件号：228-34016-02 SPD-10A/SPD-10Avp SPD-20A/AV用部件号：228-34016 SPD-M10Avp/SPD-M20A用氘灯的更换二极管阵列检测器维护光源使用时间检查D2 灯最长使用时间：2,000小时以内W灯最长使用时间：2,000小时以内D2达到额定寿命后，如果满足使用灵敏度要求，可继续使用W灯达到额定寿命后，必须进行更换。灯强度检查建议评判标准： D2:200-260nm或附近，最大强度 3.5V W：400-800nm附近，最大强度2.5V灯强度检查注意事项排除流通池中的气泡；用水、甲
