《光照对大豆叶片苯丙氨酸裂解酶(pal)基因表达及异黄酮合成的调节》由会员分享，可在线阅读，更多相关《光照对大豆叶片苯丙氨酸裂解酶(pal)基因表达及异黄酮合成的调节（7页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、光照对大豆叶片苯丙氨酸裂解酶 （!“#） 基因表达 及异黄酮合成的调节!谢灵玲赵武玲沈黎明（中国农业大学生物学院农业部植物生理生化重点开放实验室北京!“#$）摘要异黄酮是大豆体内特别是种子中积累的一类重要的次生代谢产物， 它具有特殊的生物效能。本实验在不同水平 （%4-/+,9-.) 67.)#/?AB0;= AC; A 1C7D ? /+DCEA0E =;F0GACH +;EAI/E;= AFF7+7AE;G /0 =HI;A0 DA0E （?#(4-*CC/）;=D;F/AH /0 =;G=，A0G JAB; A E ? /+DCEA0E ?70FE/0=K LJ; AFF7+7AE/0?
2、 /=?AB0;= /0 =HI;A0 ;AB;= FA0 I; /0G7F;G IH /1JEK 57C ;MD;C/+;0E= A/+;G AE EJ; =HI;A0 DJ;0HAA0/0; A+0/A2HA=;（)*）1;0; ;MDC;=/0 70G;C G/?;C;0E /1JE F0G/E/0=K -E NA= ?70G EJAE ;MDC;=/0 ? !“# /0 /1JE NA= J/1J;C EJA0 EJAE /0 GACO0;=K LJ; ;?;FE= NJ/FJ G;D;0G 0 G/?;C2 ;0E BAC/;E/;= NA= +C; =;0=/E/B; E /1JE
3、 /0 EJ; BAC/;EH NJ/FJ JA= N;C F0E;0E= ? ?AB0;= /0 =;G=K %;G /1JE （%） ，:7; /1JE （:）A0G PQ /1JE （PQ）/0FC;A=;G )* +%，A0G PQ NA= EJ; +=E ;?;FE/B; /1JEK 6/EJ EJ; ;01AE/0 ? EC;AE+;0E E/+;，EJ; +% ?C !“# A0G AFE/B/EH ? EJ; ;0RH+; /0FC;A=;GK LJ; /=?AB0;= AFF7+7AE/0 =JN;G E G;F/0; N/EJ EJ; PQ E/+;K LJ/= DAEE;
4、C0 NA= 0E F0=/=E;0E N/EJ EJAE AE EJ; ;B; ? +% ;0RH+;K =)7 -3:48HI;A0，-=?AB0;，*/1JE，)J;0HAA0/0; A+0/A2HA=;（)*）异黄酮 （/=?AB0;） 在大豆体内分布很广， 叶片中主要含有游离态甙 大豆甙 （S） 、 甲氧基大豆甙 （T*） 和染料木甙 （T） 及其丙二酰基结合体 丙二酰大豆甙 （9TS） 、 丙二酰甲基大豆甙 （9T*） 和丙二酰染料木甙 （9TT） （孙君明和丁安林， !#U） 。异黄酮具有重要的生物效应， 如异黄酮对动物肿瘤细胞繁殖具有明显的抑制作用 （VNACG， !#W） ；
5、 提高异黄酮!本课题属于国家自然科学基金资助项目 （W#XY2“!U!） 作者简介： 谢灵玲， 女， !# 年毕业于中国农业大学生物学院生物化学与分子生物学专业， 获理学硕士学位。师从 于沈黎明教授和赵武玲副教授。 收稿日期： !#2“#2Z!接受日期： Z“2“!2!U责任编辑： 王春茂植物学通报Z“，? （） ： $W $#! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! !“#$%-； ?%/5， ()(） ； 作为植物和微生物之间的信号分
6、子 （?“=， ()(） 等。异黄酮的生物代谢是许多植物体内次生物质代谢的特征之一。合成这些物质的前体是苯丙氨酸和丙二酰辅酶 A， 经苯丙氨酸裂解酶 （BA?） ， 香豆酸辅酶 A 连接酶 （CD?） ， 苯基苯乙烯酮合成酶 （D7E） ， 苯基苯乙烯酮异构酶 （D7F） ， 异黄酮合成酶 （F1E） 等酶催化， 经过羟基化， 甲氧基化和烷基化过程形成不同的异黄酮 （G,%8%/， (； !“6# 等， (C； !,6HI%$6, 和7%8$5,“9;2? ;06 A*687（0=）透光率 B5;09=*88;043 （C）透过光强 B5;09=*8836 2*178 （!=-2 =D E 9
7、D (）红光 （.36 2*178）FF“(GFH%(IE!蓝光 （J2K3 2*178）!“(GF%E“!/!/0探针来源欧芹 !“# 质粒穿刺培养物 （98; 4K28K53） 由德国 LI;725-4M 教授惠赠。 载体为 NJ/ 质粒， 酶切位点为 $%;725-4M， (P!） 。经扩增， 酶切和标记作为探针。苯丙氨酸裂解酶基因大小为 E!“ N。!12实验方法!/2/!光照处理光暗处理： 自然条件下生长良好的大豆分别放置于光照培养箱中， 在 持续白光 （约 ( G“!=-2 =D E 9D (） 和全暗 （“!=-2 =D E 9D (） 条件下处理 E! 7， 收获植株幼嫩叶片于
8、液氮中保存备用。单色光处理： 自然条件下生长良好的大豆分别放置于光照培养箱中， 在持续红光和蓝光及紫外光 （Q32*01 ;06 O38348*-0 M*8 方法。!/2/0总 34 提取 （小量法）参照 #;69A-587 等 （(P） 方法。!/2/5分子杂交 6(*7$%(*参照 O*1 OTR );32*01 ;06 O38348*-0 M*8 方法。!/2/89: 酶活性测定粗酶提取： 参照 M-0M-2 和 ,-00 （(PF(） ； UKM35 （(PFG） 以及薛应龙 （(PG） 的方法。取待测的大豆样品的同一部位的真叶鲜重 ( 1， 加少量石英砂及 ! =2 提取缓冲液在冰浴
9、中研磨匀浆， (“ “ S ! V下离心 %“ =*0。上清加硫酸铵至 !C饱和度， !V平衡 (G =*0，! V下 HG“ S 离心 (G =*0。上清加硫酸铵至 H“C饱和度， ! V平衡 (G=*0， HG“ S 离心 (G =*0。弃上清， 沉淀用 ! =2 提取缓冲液复溶得粗酶液， ! V保存， 待测 活性。蛋白含量测定： 使用考马斯亮蓝+WEG“ 法， 用牛血清白蛋白作为标准 （J5;6?-56， (PHF） 。酶活性测定： 参照 U*=35=;00 和 ;725-4M （(PHG） 方法。本实验以每小时在 EP“ 0=处 “I“( XO 变化为 ( 个酶活性单位。由于不同处理的
10、酶活背景值并不相同， 各处理不便G 期谢灵玲等：不同光照条件下大豆异黄酮合成过程中 YR) 基因的表达!G图 !不同光照条件对大豆叶片 “#$ 基因 %77)%- 公司。样品根据标准样品的出峰时间定性， 根据标准样品峰面积定量。X“$5 型号： $5I2#； 紫外检测器： “HI2#P； 分析条件： 5.4反相分离柱； 进样量： .S!:； 流动相： 含 (T乙酸的 /ST甲醇水溶液； 流速： . %:J%7=； 柱温： +( U； 检测波长： !(+ =%； 检测种类： 大豆甙 （H） ， 甲氧基大豆甙 （V$） ， 染料木甙 （V） ， 丙二酰大豆甙 （ZVH） ， 丙二酰甲氧基大豆甙 （
11、ZV$） ， 丙二酰染料木甙 （ZVV） ， 大豆甙原 （H） 。异黄酮含量 Q H V$ V ZVH+2植物学通报.3 卷! “#$ ! %8 ./$ 37 ?A; E53:5 51G;B （ F 83FF;D;76 6D;J; 37 88?5;1 :5;5/4.5: S V CX “MMK, _51*7/5*1X 2;*25*1X ;12 /.5*A!0+:?487*25 4813+;/57Y ;1/*/3=5A *789*;* ? =*) 46A4B45“;“7 C- )*+D- C736$:0%“9 1$30%92 $ N05506 O( N4/5M6$9B P( )*+Q- N“:/
12、52 1K6“ ? )= P$7754B K93“$% $0“K93“$% $0“K93“$% A09/4%“7A7 ? =)G W$66“7 Z ( b4S46; W C( O46; C O Y( )*)- ;0%3“_ 8 =* ? =GG V4“A W(H07303%06 Y(Y“6B c( )*F- %0X “7$ bK3 O4%: H( PK4% b b( e934S0 .( )*Q- 7“A15“ 年 )Q 月。据中国科学院引文数据库 )*+ 年数据统计，生物多样性 期刊为 “被引频次最高的中国科技期刊前 DQQ 名” 之一， 并且在中国生物类科技期刊影响因子排行表中 名列第 G。
13、据中国科技信息研究所数据统计，生物多样性 期刊在中国生物类科技期刊影响因子排行表 中名列第 ,。 刊登的主要内容： )） 开展生物多样性基础和应用研究的学术论文、 简报、 技术方法和综述； =） 国家和 地方的重要或重大生态工程对生物多样性保护、 可持续利用的理论分析及评估； ） 介绍中国在保护和持 续利用生物多样性方面所制定、 在地区或世界范围内有较大影响的政策、 法规等。 本刊承诺对生物多样性学科领域有创新性的基础及应用研究的研究报告、 高质量的综述予以优先 发表， 优秀论文在半年内发表， 对于代表学科前沿、 得到审者及专家高度评价的优秀论文， 还将给予作者 减收甚至免收版面费的特殊优惠。
14、 生物多样性 国内外公开发行， 现为季刊， 每季度中月 =) 日出版， 大 ), 开本， *, 页， 每期定价 )G-QQ 元， 全年 G 期共 D,-QQ 元。邮发代号： += g +D+， 全国各地邮局均可订阅。漏订者可直接汇款至编辑部补 订。本刊 )*G ? =QQQ 年各年度合订本均为 =Q-QQ 元h套 （含邮资） ， 需订阅者请直接从邮局汇款至编辑部 订阅。请在汇款单上注明订户详细地址及需订内容。地址：（)QQQ*） 北京香山南辛村 =Q 号， 中科院植物 所院内 生物多样性 编辑部。电话：（Q)Q） ,=D*)G),)F，0JA4“5： M“$;“Si94-$607362， 49-9%D 期谢灵玲等：不同光照条件下大豆异黄酮合成过程中 ZI 基因的表达GG*
