不同种葡萄果皮中酚类物质的分离及其生物活性研究

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1、 摘 要本 研究以四 个不同 成熟期的 毛葡萄 ( 吻u i n g u a n g u l a r i s , R e h d ) 商一 2 4 ( S h a n g - 2 4 ) . 山 葡萄( V a m a r e n s is R u p r ) 通化一 3 ( T o n g h u a - 3 ) 及欧亚种赤霞珠( C a b e m e t S a u v i g n o n ) 为实验试样, 利用S e p h a d e x L H - 2 0 柱层析方法分段分离纯化各试样葡萄果皮酚类化 合物, 得到实验条件下 8 个组分的分离样;建立清除超氧阴离子 ( O : 一)能

2、力、 清 除轻自由 基 ( H O “ )能力、鳌合二价铁离子 ( F e e 十 )能力和制氧化性低密度脂蛋白( o x - L D L )能力四个生物活性指标检测各组分分离样的生物活性;分析不同成熟状态、不同种间及不同生物活性指标中各葡萄试样果皮中酚类物质分离样的活性差异。取得的主要结果如下:( 1 )不同成熟期葡萄果皮酚类物质生物活性存在显著差异。高成熟阶段葡萄果皮酚类物质生物活性远远高于低成熟阶段的生物活性,毛葡萄商一 2 4 在N期时葡萄果 皮酚类物质生物活性达最大值, 山葡萄通化一 3 在I I I 期时达最大值, 赤霞珠在N期大最大值。( 2 ) 不同种间葡萄果皮酚类物质生物活性

3、也存在明显差异。 毛葡萄商一 2 4 葡萄果皮酚类物质生物活性是同期欧亚种赤霞珠的数倍。例如,在N期,商一 2 4 9 号组分分 离样清除O : 一 能力是同期同组分赤霞珠分离样的3 倍; 8 号组分分离样清除H O 能 力是赤霞珠的5 倍; 7 号组分鳌合F e e 十 能力是赤霞珠的6 倍; 8 号组分抑制o x - L D L能力与是赤霞珠持平。通化一 3 与赤霞珠在清除O : 一能力和抑制 o x - L D L能力上差异 显著, 但在清除H O 能力和鳌合F e e 十 能力上无显著差异。毛葡萄商一 2 4 与山葡萄通 化一 3之间在清除 H O 能力和鳌合 F e Z + 能力上有

4、显著差异, 清除 。 : 一能力和抑制o x - L D L能力上两者差异性不显著。 最后得出, 毛葡萄商一 2 4 葡萄果皮酚类物质有最强的生物活性,山葡萄通化一 3 次之,欧亚种赤霞珠最低。( 3 ) 在8 个组分的分离样中, 试样葡萄果皮酚类物质生物活性的高低呈现峰状, 6 . 7 . 8 . 9 四个组分分离样处于较高活性的峰值范围。( 4 )同一组分的葡萄果皮酚类物质分离样在不同活性指标中活性高低有不同形式的表现。 某一组分的分离样在一种指标中有很强的活性, 而在另一指标中表现弱的或较弱的活性。例如N期毛葡萄商- 2 4 9号组分在清除 O : 一能力表现最强的活性 ( 9 4 .

5、7 ) , 而清除 H O 能力上表现很弱的活性 ( 1 2 .9 ) , 鳌合 F e + 能力表现较弱的活性 ( 5 5 . 5 ) ,抑制 o x - L D L能力是较强 ( 6 9 .5 ) 。说明葡萄酚类物质生物活性与结构之 间有着特定的关系。( 5 ) 本实验条件下得出 最高生物活性的葡萄酚类物质分离样是: 清除O : 一 能力上是N期毛葡萄商一 2 4的9 号组分分离样;清除H O 能力上是N期毛葡萄商一 2 4 的8 号 组分 分离 样; 鳌合F e e 十 能 力上是N期毛葡 萄商 一 2 4 的7 号 组分分离 样; 抑制。 x - L D L 能力上是山葡萄I I I

6、期通化一 3 的8 号组分分离样。关键词: 葡萄果 皮酚类物质分离纯化生 物活性S t u d y o n S e p a r a t i o n a n d B i o l o g i c a l A c t i v i t i e s o f P h e n o l i c C o m p o u n d s i n D i f f e r e n t V a r i e t i e s G r a p e S k i n sAb s t r a c tT o d e v e l o p S e p h a d e x L H - 2 0 c h r o m a t o g r a p h

7、 y m e t h o d s e p a r a t e d a n d p u r i f i e d p h e n o l i c c o m p o u n d s o f g r a p e s k i n s i n S h a n g - 2 4 ( V q u i n g u a n g u l a r is r e h d ) , T o n g h u a - 3 ( V a m a r e n s is R u p r ) a n d C a b e rn e t S a u v i g n o n ( V v i n if e r a L ) ,a n d 8 f

8、r a c t i o n s o f 5 - 1 2 t u b e n u m b e r w a s c o l l e c t e d . T o e s t a b l i s h f o u r b i o a c t i v i t i e s in d e x e s 0 h e c a p a c i t y t o s c a v e n g e s u p e r o x i d e a n i o n r a d ic a l ( 0 : 一 ) ;s c a v e n g e h y d r o x y l r a d i c a l ( H O ) ;c h e

9、l a te f e r r o n s I I ( F e z + ) ; in h ib i t o x id i z e d l o w - d e n s i t y l i p o p r o t e i n ( o x - L D L ) ) d e t e r m i n e d t h e b i o a c t i v i t i e s o f e v e r y f r a c t i o n s .T h e d i ff e r e n c e a m o n g d i ff e r e n t m a t u r e s t a g e s , d i ff e

10、r e n t v a r i e t i e s , a n d d i ff e r e n t b i o a c t i v i t i e s i n d e x e s w e r e s t u d i e d . A t l a s t , t h e r e s u l t s a r e a s f o l l o w i n g :( 1 ) T h e s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e w a s f o u n d b e t w e e n f o u r m a t u r e s t a g e s .T h e

11、 b i o a c t iv i t i e s i n h i g h m a t u r e s t a g e i s f a r h i g h e r t h a n i n l o w n a t u r e s t a g e , a n d t h e h i g h e s t b i o a c t i v it y w a s f o u n d a t f o rt h m a t u r e s t a g e i n S h a n g - 2 4 ,i n T o n g h u a - 3 a t t h i r d s t a g e , a n d i n

12、 C a b e rn e t S a u v i g n o n a t f o rt h s t a g e( 2 ) T h e s i g n i f i c a n t d i ff e r e n c e w a s a l s o f o u n d a m o n g d i ff e r e n t v a r i e t i e s . C o m p a r e d w i t h C a b e rn e t S a u v i g n o n , t h e b i o a c t i v i t i e s o f p h e n o l i c f r a c t

13、 i o n s f r o m S h a n g - 2 4 w e r e q u i t e h i g h . A t f o rt h m a t u r e s t a g e ,t h e c a p a c it y t o s c a v e n g i n g O z o f N O . 9 f r a c t i o n s f r o m S h a n g - 2 4 w a s 3 f o l d C a b e r n e t S a u v i g n o n s ; s c a v e n g i n g H Oo f N O . 8 f r a c t i

14、 o n s f r o m S h a n g - 2 4 w a s a b o u t 5 f o l d C a b e rn e t S a u v i g n o n s ; c h e l a t in g F e 2 + o f N O .7 f r a c t io n s f r o m S h a n g - 2 4 w a s a b o u t 6 f o l d C a b e rne t S a u v i g n o n s ; a n d i n h i b i t i n g o x - L D L o f N O . 8 f r a c t i o n s

15、 f r o m S h a n g - 2 4 w a s t h e s a m e l e v e l a s C a b e rn e t S a u v i g n o n s . T h e r e s u l t s s h o w e d b i o a c t i v i t i e s o f S h a n g - 2 4 g r a p e s k i n s p h e n o l i c c o m p o u n d s w e r e t h e h i g h e s t , T o n g h u a - 3 w e r e h i g h , a n d

16、C a b e r n e t S a u v i g n o n w e r e t h e l o w e s t .( 3 ) T h e b i o a c t i v i t i v e i n t e n s i t y o f p h e n o l i c c o m p o u n d s i n e v e r y v a r i e t y g r a p e s s k i n s a p p e a r s a p e a k , f o u r f r a c t i o n s ( N O .6 ,N O .7 ,N O . 8 ,N O .9 ) w e r e h i g h e r p e a k r a n g e s .( 4 ) T h e b i o a c t i v i t i v e i n t e n s i t y f r o m t h e s a m e f r a c t i o n s h a d n o i d e n t i

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