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1、国土与自然资源研究年第期绿茶中黄酮类化合物的分离及鉴定胡忠勤申杨雪冬初良胜申刘香环【摘要】本文叙述了以福建绿茶为原料提取、分离黄酮类化合物的方法经聚酞胺层析和紫外光谱及物理性质鉴定出绿茶中黄酮化合物的几种成分对其化学性质进行了研究。【关健词】绿茶色素黄酮类化合物榭皮素山奈素金丝桃试悦,勿衍绿茶由茶树茶科、茶属多年生小灌木的叶子加工而成,近年来有茶色素可抑制肿瘤、降血压的报道,茶色素的主要成分黄酮类化合物、蹂质、三菇皂贰等,我们主要对绿茶色素中的黄酮类化合物进行了研究,通过紫外光谱、红外光谱、气相 色谱和黄酮化合物的物理性质鉴定绿茶中含棚皮素,金丝桃贰“,据报金 丝桃贰具有降压作用,山奈素。对绿
2、茶中黄酮的可溶性几项性质进行了探讨。实验材料与方法实验材料绿茶为市售,产地福建。试剂,无水乙醇,乙醇,聚酸胺,活性炭,氨水,丙酮,乙酸乙酉旨,甲醇,乙醚等。仪器回流装置,薄膜蒸发器,薄层层析装置,紫外分析仪,一紫外分光光度一红外光谱仪、一气相色谱仪、熔点仪。绿茶色素的提取计绿茶水浴上 回流乙醇倾出再加乙醇静置乙醇液再回流弃 沉 淀上清液经薄膜浓缩至上清液取出蒸发器减压回收乙醇冷却用等量的乙酸乙酉旨分一巧次萃取回收乙酸乙醋时收集大量黄棕色沉淀东北林业大学,哈尔滨国土与自然资源研究年第期烘干茶色素采用种不同溶剂乙醇,水,乙醚,石油醚,乙酸乙酪在相同条件下浸提绿茶,浸提情况见表。表种溶剂浸提效果比较
3、溶剂乙醇乙醚石油醚乙酸乙醋溶剂体积原料质量加热温度加热时 可溶性提取物颜色微热麒稀麟卜稀易溶黄色粘状易溶黄色油状无绿无绿易溶黄色溶液注乙醚、石油醚中的绿色可能是街醇、类胡萝卜 紊、叶绿素等聚酞胺层析分离黄酮类化合物 聚酸胺层析取聚酞胺薄膜一块,距底部处点样,样间距离。将各黄酮样品溶乙醇中,点样料,样点直径。在苯、丙酮、甲醇体积比为展层剂中展层,以、洗脱。水洗脱部分浓缩后在析出粗晶,重结晶,得黄酮。洗脱部分,浓缩后用一重结晶,得黄酮。洗脱部分浓缩后,经乙醇重结晶得黄酮工。纸层析比移值见表,可见除用乙醇作溶剂外,水也可以作溶剂,水来源充足,价格低廉,对黄酮的性质和质量不产生影响,废弃时对环境不造成
4、污染。水作溶剂的最佳配比为乙醇为溶剂时最佳配比为。表种黄酮晶体纸层析比移值次数式抓。式平均注以叔丁醇抹醋酸冰为系统为展开剂,采用国产新华号滤纸为载体结果与讨论采用紫外光谱、红外光谱、气相色谱和种黄酮晶体的熔点对其化学成分进行了推测。种黄酮晶体的物理性质见表。紫外光谱特征大多数黄酮类化合物的紫外光谱有两个主要的吸收畸峰组成,其中之一出现在一范围内带,另一个在一范围内带见图。一般来说带吸收可以认为从一环苯酸系统引起的,而带则是一环肉桂酸系统引起的。国土与自然资源研究年第期表种黄酮晶体的物理性质黄酮状态熔点黄色针状结晶黄色针状结晶淡黄色针状结晶文献值川川川文献值川川黄酮在一之间吸收,而黄酮醇则在一的
5、范围吸收,这样第一吸收带的位置指,七所检别的黄酮类化合物的类型。谱 带苯酞肉桂 酸黄酮类化合物母核土一,一和一轻基的 甲基化和贰化在减频位移中的结果,带工的位移是特别的。这些位移的程度从在一轻基取代上是位移带,到一轻基取代上的的位移。一脱氧黄酮一轻基取代位移为后变为一。分子中其它位置上同样的取代对紫外光谱影响很小。种黄酮晶体的紫外光谱特征入图黄酮类化合物的紫外光谱特征黄酮表黄酮晶体的紫外光谱特征黔衣黔性枷皮素黄酮黄酮山奈素一一葡萄糖贰黄酮,、,一川,与榭皮素一致,川,注一可能是、或位,葡萄糖位置未确定 从表光谱数据得黄酮、黄酮与棚皮素一致。黄酮的黔黯 值与文献 【中山奈素一一葡萄糖贰接近。黄酮
6、工的结构鉴定用对紫外光谱的影响来检查黄酮的一或一轻基。加酸于已含有的黄酮甲醇溶液中,使与邻位二轻基配合物分解,若带工或带仍然有所移 动以甲醇光谱为基准说明黄酮体有游离一或一经基。一般一轻基 黄酮 的光谱与黔相似,加人而出现几重吸收带的情况下,原来的带国土与自然资源研究年第期向该带长波长方向表现位移。可能的化学反应为瞬一。一糯犷叻】 巡功火夕一、引皿由此推测黄酮可能的结构是 手品、 占,一五经基黄酮懈皮素漂。一宽峰,一刀。,二多烯类占环苯环。红外光谱特征也间接地证明了黄酮的结构与懈皮素一致。黄酮的结构鉴定黄酮的酸催化水解黄酮加,在一,水浴中加温后,用离子交换树脂一一型处理,乙醚萃取,回收乙醚后用
7、乙醇重结晶,得黄色针状结晶,薄层层析值、数据与黄酮完全一致。水层浓缩,用一一溶剂系统,硅胶薄板层析,结果同一半乳糖一致。浓缩液化后进行检测,检出半乳糖,。一文献值金丝桃试黄酮可能的结构榭皮素一一一卜一半乳糖试金丝桃贰黄酮的结构鉴定黄酮的酸催化水解黄酮在中一水解后,同前法处理,从乙醚中得淡黄色针状结晶。检出葡萄糖巧,。黄酮按常规法乙酞化得同样颜色更浅的浅黄色晶体,一。黄酮由紫外光谱特征可认为结构式是了一、一 一葡萄糖位置不能确定可能是、或从酸催化水解和乙酞化数据判断接近紫云英贰山奈素一一葡萄糖贰,值国土与自然资源研究年第期一与紫云英贰相同。对于黄酮中葡萄糖的位置尚有解析不明之处,有待于进一步鉴定
8、。种黄酮晶体的化学性质含糖量的测定粗提物称取试样,同前法在酸性溶液中加热水解,然后用碱中和至中性,得总糖水解溶液,采 用斐林试剂热滴定法,进行糖的定量滴定,根据下式计算总糖的百分含量。、,、一葡萄糖浓度样品稀释倍数 忌糖阴臼分言量一一一二二二二二二万二二一一下了二一一一一一一一一一川为 吸取侧足髦升数样品里式中空白所耗葡萄糖毫升数样品溶液所耗葡萄糖毫升数。次测定总含糖量平均值为。黄酮类化合物的颜色反应取一定量的黄酮溶于水,分别与,盐酸介质加金属镁或锌,在碱性介质中加人钠汞齐、硼酸一柠檬酸、醋酸镁、和浓。表黄酮类化合物与各试剂作用颜色试剂一一一硼酸一柠檬酸醋酸镁声浓颜色棕绿色橙红黄绿黄黄黄黄黑棕
9、色注表示有莹光文献与表所列结果。说明提取物是黄酮类化合物无疑。黄酮类化合物对热的稳定性将提取物溶于的水中,水溶液分为份,分别加热温度为、,冷却后用一紫外分光光度计测其吸收曲线。在上述几种温度下测定 曲线最大吸收峰均在左右与黄酮工、混合物的水溶液最大吸收峰一致,说明此提取物具有很好的稳定性。黄酮类化合物对光的稳定性取提取物份溶于的水中,其中一份用紫外线照射,另外两份一份放在室内光照,另一份放在室内暗处天后测其吸收曲线。在条件下,条曲线基本上是重叠的护左右。说明该提取物对日光和紫外光照射室温是稳定的。黄酮类化合物的效应以柠檬酸一磷酸氢二钠作缓冲液,配制含黄酮的乙醇和水溶液,实验结果表明值对黄酮乙醇
10、溶液和水溶液有较大的影响。黄酮水溶液在时为亮黄色,时溶液逐转变为红色,在时虽然黄色未变,但有沉淀。而且随着值增加,黄酮水溶液又向短波方向位移,下降。在左右时,和为最大。黄酮乙醇溶液在时为黄色,时有沉淀,时逐步变红。而且随值增加,又不变、为,左右时札最高,见图,结论绿茶中的黄酮类化合物为黄色晶体,提取工艺简单易操作。理想的浸提溶剂是乙无乙醇溶液图黄酮乙醇溶液和水溶液不同下月变化国土与自然资源研究年第期醇或水,原料与溶剂的最佳重量比为水做溶剂时为乙醇为溶剂时为。通过聚酞胺层析分离出种黄酮类化合物晶体,通过紫外光谱、纸层析和薄层层析确定种黄酮类化合物 晶体分别为榭皮素、金丝桃贰和山奈素一一葡萄糖贰。该黄酮类化合物耐光性、耐热性均较强在值为左右最大,一时为黄酮本身的颜色。对分离的黄酮解析不明,如能做质谱或核磁测试,分析结果会更有说服力。参考文献中国科学院上海药物研究所植物化学研究室。黄酮体化学鉴定手册。北京科学出版社,张志良等植物生物化学技术和方法农业出版社韩永臻等从黄雍种皮中提取黑棕色色素及其性质的研究工英哈本等编黄酮类化合物北京科学出版社,中国科学院上海药物研究所编中草药有效成份提取与分离上海上海科学技术出版社,李景道等长白山牛皮茶化学成分研究。中草药,日上田博之等编沈天从译最新植物化学北京科学出版社,复旦大学编生物化学实验北京科学出版社
