离子色谱法测定全血样品中的胆碱

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1、Application Notes C_IC-43离子色谱法测定全血样品中的胆碱王海波 赛默飞世尔科技（中国）有限公司关键词：胆碱；离子色谱；全血样品 Key words：Choline; ion chromatography; blood引言 胆碱是一种水溶性B族维生素，在水溶液中以四价铵阳离子形式存在，是 正常代谢不可缺少的物质。准确分析全血样品中的胆碱，对于代谢等生物领域 具有很重要的作用，是新型反应急性冠脉综合症的指标，在医学领域意义重 大。同时胆碱（Choline）作为一种营养食品添加剂，具有促进大脑的发育、改 善大脑的代谢、促进神经系统的信息传递、增强视力、改善钙的代谢等功能1。国

2、标中检测胆碱的方法有GB/T 5413.20-1997婴幼儿配方食品和乳粉 胆碱的测定2，该方法采用酶水解，分光光度法进行测定，成本高效率低。 近年来文献报道食品中胆碱的测定方法为液相色谱法3和离子色谱法4-6，液相 色谱法一般采用蒸发光散射检测器进行检测，而此检测器非常用检测器，该 方法不易推广。离子色谱电导检测器检测灵敏度高，选择性好，易推广，在 食品检测方面应用较多，但是应用于全血样品中胆碱的检测鲜有报道。血样 不同于常规的食品样品，不易分散。实验室采用曲那通-X100对血样进行分散 处理后，采用盐酸水解，离子色谱进行检测。方法简单易行，准确可靠，实 验结果满足检测的要求。样品前处理方法

3、准确称取约2 g全血样品（真空采样，保存于4 冰箱中可保持30天）于50 mL具塞玻璃锥形瓶中，加入 27.5 mL 1.0%的曲拉通-X100溶液，超声15 min，再加 入1.5 mL盐酸，加盖，混匀。将锥形瓶放入70 水浴 3小时，每小时摇一次。将水解产物冷却至室温，用水 冲洗锥形瓶，所得溶液过滤至容量瓶中，将滤液定容至 100 mL，此滤液可以在4 下保存三天。分析前用水继续 稀释此滤液10倍后，过0.22 m尼龙滤膜。同时准备试剂 空白。结果和讨论前处理条件的选择血样不同于粉末的食品样品，凝固后很难在水溶液中 均匀分散，会大大的影响提取效率。实验室采用了0.5 % 曲拉通X-100溶

4、液（一种表面活性剂）对血样进行分散， 并且采用超声提取以提高提取率。实验室考察了超声时 间（15 min、30 min、45 min、60 min）对提取效率的影 响，从图1可以明显的看出，当超声时间达到15 min后， 提取率就没有明显的变化，因此实验室选择15 min作为超 声时间。测试条件仪器和试剂ICS-3000离子色谱系统（美国Dionex公司），电导 检测器；自动进样器及Chromeleon色谱数据处理工作 站；MiliQ-Element纯水机（法国Millipore）；KQ-500E型 超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；电热恒温水 浴锅（北京长安科学仪器厂）；0.22 m尼

5、龙滤膜。胆碱酒石酸氢盐（纯度98.0%，日本TCI试剂） ； MiliQ-Element超纯水；盐酸（优级纯，北京化工厂）；曲 拉通X-100（化学纯，西陇化工股份有限公司）；甲烷磺 酸（色谱纯，sigma公司）。文中所用血样为鸡血样品。色谱条件色谱柱：IonPac CS12分析柱 （250 mm4 mm）和IonPac CG12保护柱（50 mm4 mm）；淋洗液：甲烷磺酸（16 mmol/L）；抑制器：CSRS 300 4 mm ，外接水抑制模式。进样体积：100 L。0102030405060120130140150160result(mg/kg)time(min)图1 超声时间对血样检

6、测结果的影响同时也考察了水解溶液中盐酸的用量，选择某血 样，研究采用不同的盐酸溶液配是否会影响血样的水解 效率，不同的盐酸配比条件采用实验室建立的方法进行 检测，所得结果见表1。方法1盐酸用量越大，所得滤液酸度较高，若直接 进样会使阳离子交换官能团发生质子化，色谱峰严重变 形，因此必须再稀释5倍后再进样。而采用方法2和方法 3进行前处理，所得滤液酸度就适合直接进样分析，且已 经满足了水解的效果。方法3稀释倍数增大一倍，样液 中胆碱的含量也能达到检出限的要求，且溶液更容易过 滤，可以进一步提高工作效率，所以实验室采用了方法3 的盐酸用量进行前处理。色谱柱的选择在常用的阳离子色谱柱中，IonPac

7、 CS17色谱柱同 样可以分析血样中的胆碱，淋洗液浓度为6 mM的甲烷磺 酸，对于IonPac CS17色谱柱分析奶粉中的胆碱色谱峰 对称性更好，所用淋洗液浓度低。但钠离子、铵离子和 钾离子的分离度不好，并且IonPac CS17更容易发生阳 离子交换官能团的质子化现象，与IonPac CS12A色谱柱 相比，前处理后的溶液需要多稀释5倍后进样。可能会 影响含量较低的血样的定量。所以实验室采用了IonPac CS12A作为检测用色谱柱，等度淋洗。对于分离效果较 好的新的色谱柱来说，淋洗液的浓度不超过20 mmol/L 均能满足分离的要求。由于血样中成分较为复杂，钾含 量较高，如果淋洗液浓度太高

8、，钾离子拖尾现象比较严 重，所以最终采用了16 mmol/L作为淋洗液条件。线性范围和检出限考虑到血样中的胆碱含量并不是很高，所以对 0.02、0.5、1.0、2.0 mg/L的范围进行了线性的考察，线 性相关系数为0.999，完全能满足定量的要求。以3倍噪音峰高为检出限，10倍噪音峰高为定量限，按照前处理 方法的稀释倍数，胆碱的检出限为10.0 mg/kg，定量限为 30.0 mg/kg。实际样品分析，加标回收和精密度本文选择胆碱含量较低的两个血样进行了测定并做 了加标回收实验（n=6），结果见表2。实际血样在该 检测条件下，目标化合物胆碱的周围无杂峰，能准确定 量，色谱分离图见图2。同时参

9、照GB/T 5413.20-1997 婴幼儿配方食品和乳粉 胆碱的测定的方法对血样进 行检测，检测结果无显著性差异。2表1不同的盐酸配比下胆碱的检测结果序号盐酸配比实际样品含量（mg/kg）12 g血样+30 mL盐酸溶液，最终定容至500 mL15922 g血样+6 mL盐酸溶液，最终定容至500 mL16232 g血样+6 mL盐酸溶液，最终定容至1000 mL158表2样品测定结果以及加标回收试验（n=6）样品名称样品本底含量 mg/kg加标量 mg/kg加标回收率 %精密度 %加标量 mg/kg加标回收率 %精密度 %血样150.55095.74.5100110.32.6血样295.4

10、100101.23.6200105.6 3.20.05.010.015.020.025.0-1.02.04.06.08.010.012.014.016.0 Smin123 - ?45?0.010.025.0-0.201.002.00Smin1 - 5.6702 - 7.1173 - ?4 - 15.5005 - 19.873图2 实际样品的色谱分离图结论本方法采用盐酸酸解，使全血样品中的胆碱释放出 来，前处理方法对胆碱提取效率高。处理后的样品溶液 使用IonPac CS12A色谱柱分析，抑制电导检测，胆碱色 谱峰型良好，检测灵敏度高，且可以同时测定其他5种常 见阳离子。参考文献1. Buchm

11、an AL, Ament ME, Jenden DJ, et al. Choline deficiency during parenteral nutrition in humansJ. Nutr Clin Pract,2003,18(5):353-358;2. GB/T 5413.20-1997婴幼儿配方食品和乳粉 胆 碱的测定;3. 李媛媛，关树文，王伟，张庆波等.食品科 学.高效液相色谱法测定婴幼儿配方乳粉中的胆 碱.2009.34(10):263-265;4. 李媛媛，薛静，李刚等；食品科技；离子色谱 法测定婴幼儿乳粉中胆碱的含量；2008,3(12)： 267-270；5. 雒丽丽，

12、王海波，刘汉霞等；分析测试学报；离 子色谱法测定乳制品及蜂王浆中的乙酰胆碱； 2011, 30(6)674-677；6. 贾宏新，李文杰，何小明；中国卫生检验杂志； 离子色谱法同时测定食品中胆碱和4中矿物质元 素的含量；2009,19(5)：977-978.www.thermoS2013 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved. ISO is a trademark of the International Standards Organization. All other trademarks are the property of

13、 Thermo Fisher Scientific Inc. and its subsidiaries. This information is presented as an example of the capabilities of Thermo Fisher Scientific Inc. products. It is not intended to encourage use of these products in any manners that might infringe the intellectual property rights of others. Specifi

14、cations, terms and pricing are subject to change. Not all products are available in all countries. Please consult your local sales representative for details.上海 上海浦东 新金桥路 27 号 6 号楼成都 成都市武侯区临江西路 1 号 锦江国际大厦 1406北京 北京东城区安定门东大街 28 号 雍和大厦西楼 F 楼 7 层沈阳 沈阳市沈河区惠工街 10 号 卓越大厦 3109 室广州 广州市东风中路 410-412 号 时代地产中心 3001-04 室西安 西安市高新区科技路 38 号 林凯国际大厦 1006-08 单元服务热线 800 810 5118 400 650 5118AN_C_GC-7AN_C_IC-43