《绿色木霉的筛选与产纤维素酶发酵条件优化及部分酶学性质研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《绿色木霉的筛选与产纤维素酶发酵条件优化及部分酶学性质研究（67页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、达到2 7 .3 U / m g 蛋白。对纯化到的内切葡聚糖酶的基本酶学性质进行了研究。S D S - P A G E显示该酶为单亚基单体蛋白， 并测得其相对分子量为5 9 .2 K D 。 等电聚焦法测得该酶的P I 为6 .2左右，动力学方法测得该酶对最适底物C MC的 K m值为4 . 8 6 x 1 0 - 2 g / m l e 该 酶 的 最 适p H 为5 .0在p H 4 - 6 有 较 强 的 稳 定 性; 最 适 反 应 温 度 为5 0，有一定的热稳定性，6 5 下能长时间保持较高活性。测定不同价态金属离 子 对酶活 性的 影响， 在离 子浓 度为1 m m o l /
2、L 的 条 件下， C u 2 1 , M n 2 + , C 犷 十 对酶 活 有明 显 促 进 作 用， 其中C u e 的 促 进 作 用 最 强， 使 酶 活 增 加5 0 % 左 右 ; 而H g 2 , A C , C d 2 + , K , B a 2 + 对 该 酶 有 不同 程 度的 抑 制 作 用， 孵 育3 0 m in , H g 2 + 几 乎 使酶丧失了全部活性关键词:绿色木霉 纤维素酶 筛选 发酵 内切葡聚糖酶 分离纯化 酶学性质I s o l a t i o n a n d o p t i mi z a t i o n o f i t s c e l l u l
3、 a s ef e r me n t a t i o n o f T r i c h o d e r m a v i r i d e , a n d e n z y ma t i cp r o p e r t y s t u d y o f p a r t i a l c e l l u l a s e c o mp o n e n tMa j o r : B i o c h e m i s t ry a n d Mo l e c u l a r B i o l o g yGr a d u a t e Xi a o Ge I n s t r u c t o r L i u Ke wuAb s
4、t r a c tMi c r o b e w i t h c e l l u la s e a c t i v i t y w a s f o u n d i n s o i l s a m p l e c o l l e c t e d f r o m J i n y a n , L e s h a n , S i c h u a n . B y p r i m a r y a n d s u b t l e s c r e e n i n g , a m i l d e w w it h r e l a t i v e l y h i g hc e l lu l o s e a c t
5、i v i t y w a s i s o l a t e d , a n d id e n t i f ie d T r i c h o d e r m a v ir i d e b y m o r p h o l o g y .T h e i s o la t e d s a m p l e w a s f e r m e n t e d i n l i q u i d s t a t e a f t e r i s o l a t i o n , a n d i t sf e r me n t a t i o n c o n d i t i o n s w e r e o p t i m
6、 i z e d b y t h e a u t h o r . T h e o p t i m i z a t i o n r e s u l tt h r o u g h e x p e r i me n t i s d e s c r i b e d a s b e l o w : 0 . 7 5 % C MC - N a o f t o t a l m e d i u m v o l u m ea s t h e c a r b o n s o u r c e , 0 . 4 % ( N H ,t ) Z S O 4 a s t h e n i t r o g e n s o u r
7、c e , 2 0 % t r i a n g l e fl a s k b u l k f o r m e d i u m v o lu m e , 5 % i n o c u l a t i n g v o l u m e , i n i t i a l i z i n g m e d i u m p H t o 4 , 3 0 0C , 1 8 0 r e v m in t o f e r m e n t f o r 9 6 h o u r s . T h e l e a v e n s u t i l i t i e s u p o n v a ri o u s s u b s t r
8、 a t e s o fd i ff e r e n t t y p e s o f c e l l u l o s e w e r e s t u d ie d , c o m i n g w i t h t h e c o n c l u s i o n t h a t i t h asl o w e r a c t i v i t y o n h i g h e r c rys t a l l i z e d n a t i v e c e l l u l o s e s u c h as a b s o r b e n t c a rt o n w h i l eit k e e p
9、s r e l a t i v e l y h i g h s e n s i t i v i t y o n l o w e r c ry s t a l l i z e d a m o r p h o u s c e l l u l o s e s u c h as c e l l u lo s e r a m i f i c a t i o n . T h e a c t i v i t y o f t h e m a i n c o m p o n e n t , e n d o - 1 ,4 - p - g l u c a n a s e ,w a s e n h a n c e d
10、 . a n d i t s坷d r o l y s a b l e e f f i c i e n c y u p o n C MC r e a c h e d 1 . 5 4 8 U / m 1l e a v e n .Th e nf u rt h e r p u r i f i c a t i o n o f C MC a s e c o m p o n e n t i n c e l l u l asewa s ma d e .T h e l e a v e n w a s c o n c e n t r a t e d b y t r a n s p ir a t i o n u n
11、 d e r 5 0 0C a ft e r r e m o v e t h e t h a l l i a n ds o m e i m p u r i t i e s t h r o u g h c e n t r if u g i n g , th e n c o a r s e e n z y m a t i c c o m p o n e n t w a si s o l a t e d f o l l o w e d b y s a l t i n g o u t w i t h 2 08 0 % a m m o n i u m s u l f a t e . A s i n g
12、le e n z y m ec o m p o n e n t w i th C MC a s e a c t i v ity w a s p u r i f i e d b y a p r o c e d u r e i n c l u d i n gi o n - e x c h a n g e c h r o m a t o g r a p h y w i t h D E A E S e p h a r o s e F F , g e l c h r o m a t o g r a p h y w i t hS e p h a c r y l S - 2 0 0 , a n d d i
13、s p l a y e d o n e s i n g le b a n d o n P A G E . T h e p u r i f i e d e n z y m es h o w s r e l a t i v e l y h i g h a c t i v i ty o n C MC, w h i l e o t h e r c r y s t a l l i n e c e l l u l o s e s u c h asc o t t o n f i b e r a n d A v i c e l i s n o t a t t a c k e d t o a s i g n i
14、 f i c a n t e x t e n t . T h e p u r i f i c a t i o nm u lt i p le w as 4 3 . 8 , a n d t h e s p e c i f i c a c t i v i t y w a s 2 3 . 7 u n i t / m g p r o t e i n w i t h C MC asi t s s u b s t r a t eB a s i c e n z y m a t i cc h a r a c t e r i s t i c o f o b t a i n e d C MC a s e was一
15、s t u d i e d . A r e l a t i v em o le c u l a r w e i g h t o f 5 9 . 2 K D w as d e t e c t e d b y S D S - P A G E d e m o n s t r a t i n g o n e s i n g l e s t r a i n s h o w s t h a t t h e p r o t e i n i s c o m p o s e d o f o n e s u b u n i t o f p e p t id e s t r a i n . T h ep r o t
16、 e i n s P I i s 6 . 2 c o n f i r m e d b y i s o e l e c t r o f o c u s i n g , a n d k i n e t i c s m e t h o d s h o w s i t s K m o f o p t im a l s u b s t r a t e C M C i s 4 .8 6 X 1 0 - 2 g / m l . T h e o p t im a l p H c o n d it i o n i s 5 .0 , a n d i t i s r e la t iv e l y s t a b l e w i t h in p H 4 - 6 . T h e o p t i m a l t e m p e r a t u r e i s 5 0 ,C a n d i t h a sr e l a t i v e l y g o o d s t a b i l i t y u n d e r 6 5 C . A B l u e n c e s o n e
