《全氟辛烷磺酸对大鼠海马细胞内钙离子浓度的影响论文》由会员分享，可在线阅读，更多相关《全氟辛烷磺酸对大鼠海马细胞内钙离子浓度的影响论文（42页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、中国医科大学研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。论文作者签名：牡日期：中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属中国医科大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使
2、用论文工作成果时署名单位为中国医科大学，且导师为通讯作者，通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容( 保密内容除外) ，以采用影印、缩印或其他手段保存论文。论文作者签名：指导教师签名：日期：中文论著摘要全氟辛烷磺酸对大鼠海马细胞内钙离子浓度的影响目的全氟辛烷磺酸是全氟碳化物中的重要化合物之一。主要用于纺织品和皮革制品表面处理剂的主要活性成分，广泛应用于纸制品、杀虫剂、涂料和洗涤剂等民用和工业产品生产领域。P F O S 在自然环境和生物体内具不分解性和高蓄积性。环境调查结果表明，全球范
3、围内各类水体以及包括北极在内的所有野生动物血液中都存在P F O S 污染。人群调查资料显示，全球范围内各国家人体血液中均检测出较高水平的P F O S 污染。毒理学实验证实了P F O S 对实验动物具有发育毒性、免疫毒性、生殖毒性和潜在致癌性。但目前关于P F O S 材料引起的神经毒性评价资料还很少。本研究从脑与血清中P F o S 浓度与中枢神经损伤的相关性、P F O S 对中枢神经神经元 C a ” i 的影响等方面，探讨P F O S 对中枢神经系统的可能影响机制，进而为P F O S 的安全性评价提供科学依据。材料与方法1 、动物染毒方案( 1 ) P F O S - 饲料配制
4、：配制2 T w e e n8 0 溶液，按照设计剂量加入全氟辛烷磺酸钾( P F O S K ) 配制P F O S 溶液。霍恩法计算P F O S 溶液经消化道L D 。将溶液按照设计剂量加入大鼠粉碎型饲料中，烘干待用。( 2 ) 动物分组及染毒：雄性W i s t a r 大鼠5 0 只，体重1 8 0 2 2 0 9 ，适应性喂养7 天后按体重随机分为5 组，每组1 0 只。动物室温度1 8 一2 3 ，相对湿度4 5 - 5 5。实验组P F O S 染毒剂量分别为2 、8 、3 2 、1 2 8n a g k f l ( f e e d ) ，对照组给予2 T w e e n 一8
5、 0 处理后干饲料，实验组给予设计剂量的P F O S 处理饲料，自由进食水。连续染毒6 0 天。染毒结束后，腹腔注射0 4 ( w v ) 戊巴比妥钠麻醉大鼠。取脑，剥离海马组织。取血清及剩余脑组织，一8 0 “ C 冷冻保存。2 、观察指标与检测方法( 1 ) 染毒大鼠体重及绝对饲料消耗量记录；( 2 ) 染毒大鼠超声刺激记录；( 3 ) 血清及脑组织样品中P F O S 浓度的测定一固相萃取一高效液相色谱质谱联机法( H P L C M S - U l S ) ；( 4 ) 海马细胞内钙离子浓度测定一F u r a - 2 A m 荧光探针法；( 5 ) 脑皮质、海马、小脑细胞病理学观察
6、一尼氏染色法；3 、统计分析全部数据分析处理均采用S P S S ( 1 3 0 ) 统计软件。实验结果用趸s 表示。各试验组与对照组数据之间比较：数据经正态性检验，符合正态分布的采用单因素方差分析，不符合的采用秩和检验。试验结果1 、各试验组染毒大鼠体重及绝对饲料消耗量在相同染毒天数内，大鼠体重增加数量随染毒剂量的增加而减少。染毒6 0 天结束时，3 2 、1 2 8m g k g 。1 ( f e e d ) g t 大鼠体重显著低于8m g k g “ 1 ( f e e d ) i l lQ O 0 5 ) ，染毒结束前3 0 天内1 2 8m g k g “ 1 ( f e e d
7、) 组大鼠每增加1 0 0 9 体重的绝对食物消耗量显著低于对照组( p O 0 5 ) 。3 、各试验组血清及脑组织样品中P F O S 浓度的测定8m g k g 。( f e e d ) 染毒组的血清和脑中P F O S 浓度均显著高于对照组( p O 0 5 ) 。4 、海马细胞内钙离子浓度P F O S2 、8 、3 2 、1 2 8m g k 9 1 ( f e e d ) 染毒组海马细胞 c a 2 + 】i 分别为22 2 2 2 7 士9 6 7 n m 0 1 L 1 、2 4 4 2 9 - 士9 0 7n m 0 1 L 1 、3 8 1 6 9 - a ：9 6 1n
8、 m 0 1 L 1 和5 2 8 2 7 士1 5 5 1n m o l 。L - 1 ，与对照组【( 1 4 1 3 仳2 7 0 ) n m o l L 1 】比较具有显著性差异( 尸o 0 1 ) ，并且海马细胞 ca _ 1 i 与P F O S 染毒剂量成正相关( ，：o 9 2 9 ，p O 0 5 ) 3 、1 1 1 ec o n c e n t r a t i o n so f P F O Si ns e r u ma n db r a i nP F O Sc o n c e n t r a t i o ni ns e l - u ma n db r a i ni n8m
9、g k 矿( f e e d ) a n dh i g h e rd o s et r e a t e dg r o u p sw e r es i g n i f i c a n t l yh i g h e rt h a nt h a ti n t h ec o n t r o lg r o u p ( 刚0 1 ) ，a n dt h e r eW a sas i g n i f i c a n tp o s i t i v ec o r r e l a t i o nb e t w e e n8m g k g 。1 ( f e e d ) a n dh i g h e rd o s e
10、t r e a t e dg r o u p si ns e n l n la n db r a i n ( 产O 9 4 4 ，p o 0 5 ) ，染毒结束前3 0 天内1 2 8m g k 9 4 ( f e e d ) 组大鼠每增加l O O g 体重的绝对食物消耗量显著低于对照组( p o 0 5 ) 。表2 ，各剂量组大鼠超声刺激下的惊厥记录( 三) 各剂量组大鼠脑及血清中P F O S 含量1 、P F o S 色谱特征本分析条件下，P F O S 标准溶液、脑组织样品、血清样品中P F O S 保留时间均为7 4 2 2 r a i n 。标准溶液中P F O S 浓度与色谱峰
11、面积之间的相关系数为r - - 0 9 9 8 7 0 ，具有显著的正相关关系( P 0 0 1 ) 。P F O S 样品加标平均回收率为9 9 5 0 ，变异系数为1 8 1 。样品中P F O S 最低检测浓度下限均为1 0 g L 。2 、大鼠脑及血清中P F O S 含量8m g k 9 4 ( f b e d ) 及更高染毒组的血清和脑中P F O S 浓度均显著高于对照组( p o 0 1 ) ，并与染毒剂量之间呈现正相关关系。2m g k 9 1 ( f c e d ) 组血清中P F O S 浓度显著高于对照组( p o 0 5 ) 。P F O S8m g k g 。1 (
12、 f e e d ) 染毒组的血清和脑中P F O S 浓度与2m g k g - l ( f e e d ) 染毒组水平之间无统计学差异( p o 0 5 ) 。P F O S a e r u m ( 1 x l F m l ) = 1 7 1 3 5 + 1 0 4 0 x D o s e ( m 占k 9 1 ( f e e d ) ) r = 0 9 4 4 t P 锄O lC O l l t283 21 2 8 D o s e ( m g k g 一1 ( f e e d ) )图l ，各剂量组大鼠血清中P F O S 浓度注：舢P ( o O l t 与对照组比较；b p o ，0
13、 5 ，与对照组比较；c ；P 如0 1 。与2m g k g , f e e d 组比较；d P 0 0 1 ，与8 r a g k g f e e d 组比较1 4鲫如加蚰O3 53 0奄2 5j2 04 喜1 5 臣1 05OP F O S b r a i n ( I t 舻1 8 6 7 + 0 1 5 8 xc o n tD o 曼( m g k 8 9 。1 ( f e 1 2 8图2 ，各剂量组大鼠脑中P F O S 浓度注：a ：p o 0 1 ，与对照组比较；b ：p 如，0 5 ，与对照组比较；c ：p o 0 1 ，与2r n g k g 。f e e d 组比较；d #
14、t r o 0 1 ，与8 m e C k g f e c d 组比较( 四) 脑中细胞内钙离子浓度1 、海马细胞荧光染色照片海马单细胞悬液中，加入F u r a - 2 A M 探针与细胞内游离钙离子结合呈现绿色荧光。( 图3 )图3 ，海马细胞F u r a - 2 A M 负载照片注：箭头所指为F u r a - 2 A M 与细胞内游离钙离子结合细胞2 、神经元 c a 2 1 i 测定图谱海马神经元细胞加入T r i t o nX - 1 0 0 后细胞内荧光强度升高而细胞外荧光强度1 5降低，当加入E D T A 后荧光强度发生相反的变化的情况。( 图4 )f r i t o nX
15、 - l O OE I D T A图4 ，海马细胞荧光强度在相应加入T r i t o nX 1 0 0 和E D T A 前后的变化注：箭头亓) 表示加入相应试剂时间点3 、细胞内钙浓度P F O S2 、8 、3 2 、1 2 8m g k 百1 ( f e e d ) 染毒组海马细胞 c a l i 分别为2 2 2 2 7 + 9 6 7 n m 0 1 L I 、2 4 4 2 9 士9 0 7n m o l L 1 、3 8 1 6 9 a ：9 6 1n m o l L 1 和5 2 8 2 7 4 - 1 5 5 1n m o l L 1 ，与对照组【( 1 4 1 3 0 -
16、 J ：2 7 0 ) n m o l L 1 】比较具有显著性差异( P o 0 1 ) ，并且海马细胞 c a l i 与P F O S 染毒剂量成正相关( r - - O 9 2 9 ，P O 0 5 ) ( 图5 ) C a 2 q i ( a m o l L 1 2 2 1 45 3 3 + 26 1 $ x P F O S d m z ( m g - k f f l ( f e e 由) f r 卸9 2 9 , p 蝴O S )图5 ，P F O S 剂量和【C a l i 剂量效应关系注：a ：p o O I ，与对照组比较；b ；p ( 0 O l ，与2r l l g k K l ( 缸d ) 组比较；c ；P ( o O l
