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1、慢性乙型肝炎病毒新标识慢性乙型肝炎病毒新标识： 乙型肝炎乙型肝炎病毒核心抗体定量的临床病毒核心抗体定量的临床意义与应用意义与应用 厦门大学公共卫生学院 分子疫苗学和分子诊断学国家重点实验室 国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心 夏宁邵 主要内容 1 背景背景介绍介绍 2 Anti-HBc定量检测试剂定量检测试剂 HBV感染自然史过程中感染自然史过程中qAnti-HBc水平水平 3 治疗前治疗前qAnti-HBc水平预测治疗水平预测治疗应答应答 4 qAnti-HBc水平水平:HBV引起肝脏疾病的特异性指标引起肝脏疾病的特异性指标 5 qAnti-HBc水平指示肝组织炎症状态水平指示肝组织炎
2、症状态 6 主要内容 1 背景背景介绍介绍 2 Anti-HBc定量检测试剂定量检测试剂 HBV感染自然史过程中感染自然史过程中qAnti-HBc水平水平 3 治疗前治疗前qAnti-HBc水平预测治疗水平预测治疗应答应答 4 qAnti-HBc水平水平:HBV引起肝脏疾病的特异性指标引起肝脏疾病的特异性指标 5 qAnti-HBc水平指示肝组织炎症状态水平指示肝组织炎症状态 6 HBsAgHBV DNAHBeAgViral genotypeViral MutationAnti- HBcAnti- HBeAnti- HBsViral polymorphismsViral production
3、Host response1.1 临床常用的HBV相关诊断靶标 RPHA (反向血凝法）反向血凝法） 5-10ng/ml RIA (放免法）放免法） 0.5-1ng/ml EIA (酶免法）酶免法） 0.2-1ng/ml LIA (发光法）发光法） 0.05-0.2ng/ml HBsAg诊断试剂的发展 HBsAg定量 近年来，近年来，HBsAg定量的意义逐渐被揭示并在临床广泛应用定量的意义逐渐被揭示并在临床广泛应用 EASL guideline 2012 HBsAg定量指导PEG-IFN治疗 Stopping rule: PEG-IFN治疗第治疗第12周周HBsAg水平无下降并且水平无下降并且
4、HBV DNA下下 降降20,000 IU/mL时考虑停止治疗时考虑停止治疗 反映宿主免疫应答强弱的临床指标反映宿主免疫应答强弱的临床指标，用用 于慢乙肝感染者的管理及指导临床治疗于慢乙肝感染者的管理及指导临床治疗 ? NEJM, 2005 Anti-HBc定性检测在临定性检测在临床上使用已超过床上使用已超过35年年 Anti-HBc是既往和现症是既往和现症感染的标志感染的标志 在低流行区用于血液筛在低流行区用于血液筛查查 由于方法学的限制，由于方法学的限制，Anti-HBc定量水平的临定量水平的临床意义一直没有被揭示床意义一直没有被揭示 1.2 Anti-HBc 主要内容 1 背景背景介绍介
5、绍 2 Anti-HBc定量检测试剂定量检测试剂 HBV感染自然史过程中感染自然史过程中qAnti-HBc水平水平 3 治疗前治疗前qAnti-HBc水平预测治疗水平预测治疗应答应答 4 qAnti-HBc水平水平:HBV引起肝脏疾病的特异性指标引起肝脏疾病的特异性指标 5 qAnti-HBc水平指示肝组织炎症状态水平指示肝组织炎症状态 6 2.1 Anti-HBc定量试剂：高度均一的重组HBcAg全长颗粒的获得 cAg-HRP 高度稳定的重组核心抗原， 标记后仍然维持良好的颗粒抗原 性。是实现双抗原夹心法检测 HBcAb的关键基础。 cAg 1mg/ml CpC CpD Clin. Vacc
6、ine Immunol. Mar. 2010, p. 464-469 2.2 Anti-HBc定量试剂：双抗原夹心法Anti-HBc检测试剂 间接法间接法 夹心法夹心法 竞争法竞争法 灵敏度较低 重现性不佳 不适合定量检 测 灵敏度提高 重现性提高 可用于定量检 测 灵敏度/特异性 更佳 特异性更高 适合定量检测 1、雅培Axysm 2、罗氏Elecsys 1、雅培Architect (暂无定量检测模式） 最适合抗体定量检测 2.3 Anti-HBc定量方法重复性评价 -2.0-1.5-1.0-0.5-1.0-0.50.00.5Log10 Con.Log10 OD 20个独立测试：高值 cv0
7、.99 1234512345Log10 IU/mL (2nd test)Log10 IU/mL(1st test) 100份临床标本两次独立定量 一致性R20.99，平均定量偏差为 9.310%(以log10计为1.21.5%) Y=0.989X R20.99 主要内容 1 背景背景介绍介绍 2 Anti-HBc定量检测试剂定量检测试剂 HBV感染自然史过程中感染自然史过程中qAnti-HBc水平水平 3 治疗前治疗前qAnti-HBc水平预测治疗水平预测治疗应答应答 4 qAnti-HBc水平水平:HBV引起肝脏疾病的特异性指标引起肝脏疾病的特异性指标 5 qAnti-HBc水平指示肝组织炎
8、症状态水平指示肝组织炎症状态 6 -1.00.01.02.03.04.05.06.0p=4.5 76 42 445.1 9435.9 5.00 (2.57-9.73) =4.5 370 61 4127.6 1477.9 4.41 (2.79-6.99) 29000 IU/mL HBc-Low group: pretreatment -HBc 4.65B aseline qA nti-H B c 4.65B aseline qA nti-H B c 4.65B aseline qA nti-H B c50102030405060SRVR7.7%(1 /1 3 )18.2%(2 /1 1 )21.
9、2%(1 4 /6 6 )41.9%(1 3 /3 1 )52.6%(1 0 /1 9 )9.1%(1 /1 1 )15.2%(1 0 /6 6 )32.3%(1 0 /3 1 )47.4%(9 /1 9 )基线不同Anti-HBc水平病人对干扰素治疗应答情况 Theranostics. 2015 Jan 1;5(3):218-26 H B V D NA decline (log10 IU/m L)0 w e e k1 2 w e e k2 4 w e e k4 8 w e e k7 2 w e e k-6 .0 0-5 .0 0-4 .0 0-3 .0 0-2 .0 0-1 .0 00 .0
10、 01 .0 0O n-treatm entO ff-treatm entH Bc-H ighH B c-Lowp=0.003p=0.003p=0.018p0.001基线Anti-HBc高的病人HBV DNA受到更强的抑制， ALT复常率显著较高 Theranostics. 2015 Jan 1;5(3):218-26 基线Anti-HBc定量联合HBV DNA/HBsAg 预测长效干扰素治疗应答 另一个另一个231例慢乙肝病人长效干扰素治疗队列中例慢乙肝病人长效干扰素治疗队列中 Gut. 2016 Feb;65(2):313-20 主要内容 1 背景背景介绍介绍 2 Anti-HBc定量检测
11、试剂定量检测试剂 HBV感染自然史过程中感染自然史过程中qAnti-HBc水平水平 3 治疗前治疗前qAnti-HBc水平预测治疗水平预测治疗应答应答 4 qAnti-HBc水平水平:HBV引起肝脏疾病的特异性指标引起肝脏疾病的特异性指标 5 qAnti-HBc水平指示肝组织炎症状态水平指示肝组织炎症状态 6 HBV感染 肝脏疾病 其它因素导致的肝脏损伤 代谢失调 药物 其它肝炎病毒 肝炎肝炎 5. qAnti-HBc水平:HBV引起肝脏疾病的特异性指标 意大利Pisa大学Ferruccio Bonino教授合作研究 目前尚缺少HBV引起肝脏疾病的特异性指标 HBV诊断标志物诊断标志物 临床意
12、义临床意义 Anti-HBs 免疫 Anti-HBc 暴露 HBsAg 感染 HBV DNA, HBeAg 复制 Anti-HBc-IgM, HBV DNA qAnti-HBc ? 疾病 HBV 相关诊断标志物相关诊断标志物 HBsAg Carriers N. of cases N. of sera Age median (range) Male/ Female ALT U/L median (range) HBsAg Log10 IU/ml median (range) HBV-DNA Log10 IU/ml median (range) HBeAg阳性 10 10 38.92 (21.45
13、-71.04) 8/2 77.5 (26.0-346) 4.99 (3.71-5.49) 7.83/ (0-8.26) HBeAg阴性非活 动性HBV携带 25 25 53.78 (31.15-79.41) 17/8 18.0 (10-60) 1.72 (-1.7-3.22) 1.82 (0-3.21) HBeAg阴性， HDV感染 10 10 34.03/ (13.65-59.86) 9/1 104.5 (70-207) 4.17 (4.07-4.53) 1.58 (0-1.98) HBeAg阴性 慢乙肝患者 66 167 54.18 (32.62-83.52) 45/21 73.0 (7.
14、0-1243.0) 3.51 (-0.38-4.7) 5.08 (0-8.13) 研究队列研究队列 PLoS One. 2015 Jun 26;10(6) A nti-H B c (log10 IU /m L)ICITe A g (+ ) C H Be A g (-) C H BS V R EO FH D VH C C 1st dH C C ES0123456p 0.001p 0.001p =0.19p =0.01p =0.51qAnti-HBc 水平分布水平分布 G ro u pTotal-A nti-H B c (log1 0 IU/m L)abcd1.02.03.04.05.06.018
15、6 2IU /m L112 2IU /m L4841 7IU /m L446 7IU /m Lp0.001p0.001p=0.002p=0.19p=0.02p0.001G ro u pA nti-H B c-IgM (S /C O )abcd0.010.11101000 .0 60 .0 5 50 .4 70 .0 7p0.001p0.001p=0.17p=0.049p=0.96p0.0010.13a: 非活动性携带者，免疫耐受，HDV感染 b: 慢乙肝患者 c：PEG-IFN治疗持续应答慢乙肝患者 d：NA治疗持续应答慢乙肝患者 PLoS One. 2015 Jun 26;10(6) 非 活
16、 动 性 携 带 者免 疫 耐 受慢 性 乙 型 肝 炎 患 者治 疗 后 持 续 应 答 患 者丁 型 肝 炎 感 染 者肝 癌100% - S p ecificity%S en sitivity%020406080100020406080100Total-Anti-H BcA nti-H B c-IgMAUC Cut off sensitivity specificity Total- Anti-HBc 0.947 12000 81.2% 94.4% Anti-HBc- IgM 0.915 0.2 77.3% 97.2% 100% - S p ecificity%S en sitivity%020406080100020406080100Total-Anti-H BcA nti-H B c-IgMROC分析区分慢乙
