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1、0ICS65.020.30 B44中中 国国 实实 验验 动动 物物 学学 会会 团团 体体 标标 准准T/CALAS x-201x实验动物实验动物 幽门螺旋杆菌银染色方法幽门螺旋杆菌银染色方法Laboratory animal -Silver staining method for Helieobaeter Pylori（征求意见稿）201x-xx-xx发布201x-xx-xx实施中国实验动物学会 发布0前言本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则编写。本标准附录 A 为资料性附录。本标准由中国实验动物学会归口。本标准由全国实验动物标准化技术委员会（SAC/TC281）技术审查。本
2、标准由中国实验动物学会实验动物标准化专业委员会提出并组织起草。本标准主要起草单位：浙江大学动物科学学院、浙江省医学科学院。本标准主要起草人：吴旧生、刘月环。1实验动物实验动物 幽门螺旋杆菌银染色方法幽门螺旋杆菌银染色方法1范围本标准规定了实验动物组织切片中幽门螺旋杆菌的银染色方法。本标准适用于实验动物组织中幽门螺旋杆菌的病理检测。2基本原理幽门螺旋杆菌菌体含有特定蛋白和多糖物质， 在一定温度硝酸银溶液作用下能够吸附银离子，再经过还原剂使弯曲菌显示金属银。也可称为嗜银性胃幽门螺旋杆菌。银染色使银颗粒沉淀于细菌上，结果显示细胞核和幽门螺杆菌着棕黑色，胞质和黏液着浅黄色。3 主要试剂a) 醋酸缓冲液
3、（PH3.6）b) 1%硝酸银液c) 对苯二酚液d) 明胶液e) 2%硝酸银液f) 显影液以上试剂的配制见附录A。4 实验方法4.1 切片经二甲苯 5min*2、无水乙醇 5min*2、95乙醇 5min*2、85乙醇 5min、70乙醇 5min 完成脱蜡。脱蜡后自来水洗 5min。4.2 醋酸盐缓冲液冲洗切片 2 次，每次 1min。4.3 1%硝酸银水溶液（预热达 60）处理切片 60min，在烤箱中进行。4.4 于显影液中（60烤箱）3min，镜下控制，如果没达到要求，还可继续延长时间，直到合适为止。4.5 取出切片，用 60热水洗，缓冲液洗切片。4.6 切片再经 70%乙醇 、80%
4、乙醇、90%乙醇各 1min；经 95乙醇 1min，换液重复一次；无水乙醇 2min，换液重复一次快速脱水，后用二甲苯透明 5min，换液重复一次。4.7 根据盖玻片规格和载玻片上组织多少，滴加适量中性树胶，封片。5 操作要求25.1 所有用于本法中的浸染液，均须预热 60。5.2 如显影时间过长，切片颜色过深，切片呈深黑色，可用 1%亚铁氰化钾处理切片。6 结果判定螺旋杆菌位于胃腺上皮或腺腔内表面，呈棕黄至棕黑色，散在分布。3附录 A主要试剂的配制（资料性附录）A.1 醋酸缓冲液（PH3.6）醋酸钠1.64g醋酸2.5ml蒸馏水200ml（增至）A.2 1%硝酸银液硝酸银1g醋酸盐缓冲液（PH3.6）100ml（增至）A.3 对苯二酚液对苯二酚(hydroquinone)300mg醋酸盐缓冲液（PH3.6）10ml（增至）A.4 明胶液明胶5g醋酸盐缓冲液（PH3.6）100ml（增至）明胶加入缓冲液后,用热水液促其溶解,或者放入 37培养箱中过夜。A.5 2%硝酸银液硝酸银2g醋酸盐缓冲液（PH3.6）100ml（增至）A.6 显影液对苯二酚液6ml5%明胶液30ml2%硝酸银液6ml-
