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1、诊断学理论与实践2011年第10卷第3期编码3个对氧磷酶(paraoxonase, PON)的基因均位于7号染色体7q21.3q22.11。 其中，对氧磷酶1（PON1）由肝脏合成后分泌入血2-3，可水解对氧磷和对硫磷等有机磷酸盐及多种底物4。PON1有保护低密度脂蛋白（low density lipoprotein, LDL）免受氧化修饰的作用， 从而降低体内氧化型低密度脂蛋白（oxidant LDL, ox-LDL）的水平，并能破坏ox-LDL中的溶血磷脂。 因此，PON1具有抗动脉粥样硬化的作用5-9。本研究拟采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性 （polymerase chain r
2、eaction - restriction frag-ment length polymorphism technique，PCR-RFLP）方法， 对脑梗死 （cerebral infarction, CI） 患者血清PON1基因162A/G位点的单核苷酸多态性（singlenucleotide polymorphism, SNP）进行检测，并对SNP与CI间的关系进行探讨，为CI的预防和治疗提供依据。资料与方法一、资料1.研究对象：选取上海宝山区中心医院和上海交通大学医学院附属瑞金医院神经内科门诊、住院患者及健康体检查为研究对象。 选择126例CI患 论著 脑梗死与对氧磷酶 1 基因-16
3、2A/G 多态性的关系杨振华1，倪培华2a，傅毅2b，吴洁敏2a，应雅韵2a，王文惠1，堵一乔1（1.上海市宝山中心医院检验科，上海201900； 2.上海交通大学医学院附属瑞金医院a.检验系；b.神经科，上海200025）摘要目的：评估上海地区汉族脑梗死患者对氧磷酶1（PON1）对应基因的162A/G多态性与脑梗死（CI）间的关系。 方法：采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）方法，对126例CI患者（CI组）及131名同期体检者（对照组）的PON1基因162A/G多态性进行分析。 结果：PON1基因162A/G多态性AA型、AG型及GG型基因型在对照组和CI组中分别占2
4、2.14%、19.08%、58.78%和23.81%、37.30%、38.89%。A、G等位基因频率分布在对照组和CI组中分别为31.68%、68.32%和42.46%、57.54%。 经检验，PON1基因162A/G位点基因型和等位基因频率在2组人群中的分布差异均有统计学意义(P均0.05）；而CI组的三酰甘油（TG）、舒张压及血糖浓度明显高于对照组（P0.05）。CI组-162A/G位点AG型患者的收缩压、舒张压均明显高于对照组同基因型（P0.05），而HDL-C明显低于对照组同基因型 （P0.05）。CI组- 162A/G位点AA型患者的TG、收缩压和舒张压明显高于对照组同基因型（P0.
5、05）（见表3）。讨论人类PON1基因长约25.9 kb， 含9个外显子和8个内含子；PON1蛋白的相对分子质量约为43 ku，分子含有3条糖链，且属Ca2+依赖性糖蛋白，其与载脂蛋白ApoA1、载脂蛋白ApoJ结合，共同构成HDL12。在PON1的启动子序列中，确定有5个位点单核苷酸多态性与酶的表达有关系，即-107C/T、-126G/C、-162A/G、-831G/A和-908G/C13-16。这些多态性导致了启动子活性的差异，从而使其具有不同的基因表达水平和不同的PON1血清活性。 目前普遍认为，-107C/T多态性与PON1的表达有密表2CI组与对照组PON1 162A/G基因型及等位
6、基因频率比较组别基因型n(%)等位基因频率n(%) AAAGGGAG 对照组29(22.14)25(19.08)77(58.78)83(31.68)179(68.32) CI组30(23.81)47(37.30)49(38.89)107(42.46) 145(57.54)表3PON1 162A/G多态性位点基因型与临床资料的关系项目AA型AG型GG型 对照组CI组对照组CI组对照组CI组 TG(mmol/L)1.780.131.890.20a)1.840.221.900.231.530.102.190.16a) TC(mmol/L)4.800.184.900.144.800.254.960.1
7、84.690.095.180.14a) HDL-C(mmol/L)1.250.061.200.061.300.061.160.04a)1.260.041.180.04 LDL-C(mmol/L)3.030.142.850.113.150.243.050.162.710.083.170.13a) 收缩压(mm Hg)140.663.46143.572.94a)134.002.40145.212.48a)135.531.80149.292.73a) 舒张压(mm Hg)82.761.7687.632.48a)79.441.0985.171.29a)82.221.0086.551.73a) 血糖(m
8、mol/L)5.470.216.100.37a)5.610.336.220.43a)5.450.155.670.21a):CI组与对照组同基因型比较，P0.05M：DL2000 DNA标志；1：AA型，2：GG型，3：AG型图2PON1162A/G PCR-RFLP聚丙烯酰胺凝胶电泳结果GG型；AG型；AA型(箭头示多态性位点)图3PON1 162A/G多态性位点测序结果249J Diagn Concepts Pract 2011, Vol.10, No.3切关系17。Brophy等18发现，高加索人-107C/T多态性与人群PON1基因表达水平变异度有关， 在我国汉族人群中也发现-107C/
9、T的基因产物调节作用19。-162A/G多态性可能包含NF-1转录因子结合位点。 研究发现，一个IL-6反应元件与-162A/G多态性的3端同源。IL-6是致炎细胞因子，能减少HepG2细胞中的PON1表达和小鼠血浆中的PON1活性。目前， 国内外关于-162A/G位点多态性与心脑血管疾病间关系的研究较少。 本研究发现，PON1基因-162A/G位点基因型和等位基因频率在CI组与对照组中的分布差异均有统计学意义（P0.05），CI组的等位基因A与对照组比较，其OR值为1.5914，95%可信区间为1.10952.2828。本研究发现，PON1基因-162A/G多态性可能与CI发生有关，A等位基
10、因可能是CI的相对危险因素。PON1是HDL的组成部分， 在HDL的抗氧化、抗炎和防止动脉粥样硬化中起重要作用。 为明确PON基因家族与HDL相互作用的中间环节及其机制，今后还需进行更深入的研究。参考文献1Primo-Parmo SL, Sorenson RC, Teiber J, et al. The hu-man serum paraoxonase/arylesterase gene(PON1) is onemember of a multigene family J. Genomics,1996,33(3):498-507.2Mackness MI, Hallam SD, Peard T
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12、1 protein but is notregulated by oxidized lipidsJ. Arterioscler Thromb VascBiol,2001,21(4):542-547.4Draganov DI, La Du BN. Pharmacogenetics of paraoxo-nases: a brief review J. Naunyn Schmiedebergs ArchPharmacol,2004,369(1):78-88.5Mackness MI, Mackness B, Durrington PN, et al. Paraoxo-nase and corona
13、ry heart disease J. Curr Opin Lipidol,1998,9(4):319-324.6Gluba A, Pietrucha T, Banach M, et al. The role of poly-morphisms within paraoxonases(192 Gln/Arg in PON1and 311Ser/Cys in PON2) in the modulation of cardiovas-cular risk: a pilot study J. Angiology,2010,61 (2):157-165.7Dahabreh IJ, Kitsios GD
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