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1、CpGCpG-ODN-ODN的免疫刺激作用的免疫刺激作用 陈军浩 南京大学医学院附属鼓楼医院CPG概念n为非甲基化的胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸 重复序列，即CpG 基序。n一种免疫佐剂n作用靶点TLR9n细胞免疫，体液免疫Th1免疫应答n慢性乙型肝炎患者细胞免疫低下nHBV免疫耐受，持续感染n肿瘤微小残留病的清除CPG提高PBMC中Th1细胞Th1占淋巴细胞百分比CPG提高PBMC中Th1 、Tc1 细胞百分率*：与对照组比较，P0.05 CPG刺激BPMC分泌细胞因子*：与对照组比较，P0.05 CPG诱导PBMC杀伤靶细胞n收集CPG活化的PBMCn细胞毒性实验：效应细胞为CPG活化的 PBMC
2、；靶细胞为CFSE预染的K562细胞。 对照组效应细胞为未经CPG活化的PBMC。n效：靶20：1，混合培养2h。流式细胞术检测靶细胞死亡率。CPG诱导PBMC杀伤靶细胞CFSE染色靶细胞n浓度为5mol/ L 的CFSE （2羧基 荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯）工作液n取对数生长期的靶细胞浓度108/ Ln细胞悬液与等体积CFSE 工作液混合n37 孵育10 min。n离心洗涤两次后n悬浮细胞备用CFSE染色靶细胞实验结果CpG活化PBMC对K562细胞的杀伤作用 (N=5)CPG活化PBMC 16.855.14 %对照组 8.622.83 %*：与对照组比较，P0.05 CIK细胞杀伤靶细胞
3、CIK细胞杀伤靶细胞研究背景通过主动免疫、过继特异性免疫、过继非特异性免疫等方式，清除慢性乙肝患者体内残存的HBV，达到治疗效果。研究背景B淋巴细胞具有抗原递呈细胞的性质，同时具有CpG-ODN受体：TLR-9。本研究探讨CpG-ODN诱导B淋巴细胞成为高效APC，使之具有类似于树突状细胞功能的可行性。TOLL受体TOLL受体在血细胞中的表达活化B细胞负载核心抗原n磁珠分选B淋巴细胞nCPG活化B淋巴细胞n核心抗原肽:FLPSDFFPSV-FITCn流式细胞仪、荧光显微镜检测抗原负载状况磁珠分选B细胞分选前B细胞 7.89% 分选后B细胞 89.6% 活化B细胞负载抗原肽活化B细胞负载核心抗原
4、荧荧光显显微镜观镜观 察B细细胞负载负载 HBcAg18-27肽肽 APC与T细胞作用机制CPG对B细胞抗原递呈相关分子的 作用研究nCpG2006、2216由上海生物工程技术服务有限公司合成，全硫代化修饰n对照组为含10%FCS的RPMI1640 外周血PBMC，细胞量107/孔， 37、5%CO2、48小时n实验组加入CpG2006或CpG2216， 终浓度均为1umol/mL，余同上CpG提高淋巴细胞CD69表达T淋巴细胞 B淋巴细胞CD69表达率（%）*：与对照组比较，P0.05 B细胞CD80、CD86表达对照组加CPG-ODN组加CPG-ODN组CpG提高B细胞表面CD80、 CD
5、86的表达 CD80 CD86CD80、CD86表达率（%）*：与对照组比较，P0.05 B细胞MHC-、MHC-表达对照组加CPG-ODN组CpG提高B细胞表面MHC-、 MHC-的表达MHC- MHC-MHC表达量（MFI）*：与对照组比较，P0.05 活化B细胞诱导CTLn负载了抗原的活化B细胞与淋巴细胞混合培养(含IL-2的RPMI1640培养液).n收集细胞,以五聚体技术检测HBV特异性CTL.n实验组特异性CTL为0.500.19%，对照组为0.200.10%。 特异性CTL诱导Pro5TM MHC Pentamers检测对照组和实验组HBcAg18-27抗原特异 性CTL（Q2-1区）。前者为对照组（未加APC），后者为实验组（加 APC）。结论nCpG能够活化B细胞，对T细胞无明显的作用nCpG能够提高B细胞表面抗原递呈相关分子的表达nCPG诱导PBMC产生高水平的IFN-nCPG诱导淋巴细胞向Th1、Tc1分化nCPG增强PBMC对K562细胞的杀伤作用n通过B细胞介导, CPG可诱导特异性CTL
