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1、河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归一承诺本学位论文在导师( 或指导小组) 的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名为单位河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应法律责任。研究生签名：多听导师签章：花纤本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名；o
2、叶导师签章；葛解 o 晦d 其bE t目录中文摘要1英文摘要4研究论文紫杉醇联合D C 疫苗对小鼠宫颈癌移植瘤影响的试验研究前言7日l 吾。7材料与方法7结果1 1附图1 5附表2 0讨论2 2结论2 4参考文献2 5综述肿瘤微环境影响肿瘤治疗的研究进展一2 7致谢3 2个人简历3 3中文摘要紫杉醇联合D C 疫苗对小鼠宫颈癌移植癌 影响的实验研究摘要目的：采用紫杉醇和D C 疫苗联合作用于小鼠宫颈癌移植瘤，观察小鼠肿瘤组织微环境里面的I L 6 这一免疫抑制因子与肿瘤微环境的细胞因子V E G F 发生的变化，对应用紫杉醇化疗药物后能否增强D C 疫苗抗肿瘤效应进行了研究和探讨。方法：1 建
3、立荷瘤小鼠模型：取宫颈癌U 1 4 细胞，在其处于对数生长期时，通过计数板计数，将浓度调整至1 1 0 6 个0 2 m l ，将0 2 毫升细胞接种到C 5 7 B L 6 小鼠身体的背部或者腹部皮下，完成接种以后的第七天展开实验。2 制作D C 疫苗：取宫颈癌U 1 4 细胞，通过照射丫射线将它们灭活，而后予以反复的冻融，从而获得肿瘤细胞抗原。颈椎脱位法处死未荷瘤小鼠，无菌环境下提取小鼠身上股骨，获得骨髓细胞，在r m I L 4 以及r m G M C S F 诱导下进行培养，这样就能够获得小鼠骨髓来源的树突状细胞，再将树突状细胞与肿瘤抗原共同培养，获得D C 疫苗，流式细胞仪鉴定D C
4、 表型。3 实验描述：对荷瘤小鼠予以随机分组，一共划分成4 组，一组由1 0只组成：对照组有1 0 只，将0 2 m l 的生理盐水腹腔内注射，每天注射一次，每只要注射0 2 m l ，持续1 4 天；D C 疫苗组1 0 只，将D C 疫苗于荷瘤小鼠的肿瘤局部注射一次，一周后重复注射一次；紫杉醇组1 0 只，每只腹腔内注射紫杉醇0 2 m l ，持续注射1 4 天，每天注射一次；D C 疫苗和紫杉醇联合组1 0 只，将紫杉醇0 2m l 于荷瘤小鼠腹腔注射，一日一次，连用3 天，将D C 疫苗于肿瘤局部注射一次，一周后重复。称量瘤重，计算抑瘤率。4 免疫组化S P 法：用麦克奥迪医学图像分析
5、软件对组化结果行定量分析，用平均光密度值( O D 值) 检测小鼠瘤组织中V E G F 、几6 的表达情况。中文摘要5 分析相关的数据：采用多样本均数比较的方差分析及两两比较的S N K 检验，数据分析采用S P S S1 3 0 统计软件完成，以P Q ，0 5 ) w e 姹f o u n di nt h ec o m p a r i s o nb e t w e e np a c l i t a x e lg r o u pa n dc o m b i n e dt r e a t m e n tg r o u p ；n os t a t i s t i c a ld i f f e
6、r e n c e ( P O 0 5 ) w e r ef o u n di nt h ec o m p a r i s o nb e t w e e nD Cv a c c i n eg r o u pa n dc o n t r o lg r o u p TC o n c l u s i o n s ：lT h i se x p e r i m e n to b s e r v e dt h a tt h eU 1 4c e i l sn u m b e rlxi o o 双1 3 1 0 匠e t h e 厕e c t i o nt oC 5 7 B L 6m i c eC a l l
7、g e n e r a t et u m o r s ，i sd i f f i c u l tt o ，o rl e s st h a nt h i sa m o u n td on o tf o r mI x l I B o r 。2p a c l i t a x e li nt h et t t m o r - b e a r i n gm i c ec a l ld o w n r e g u l a t et h ee x p r e s s i o no fi m m u n o s u p p r e s s i v ec y t o k i n eI L - 6a n dc e
8、 l lf a c t o rV E G F ，a n dr e l i e v et h ei m m u n o s u p p r e s s i o ni nt u l q q o rm i c r o e n v i r o n m e n t 英文摘要3F i r s tw i t hp a c l i t a x e li nt u m o r - b e a r i n gm i c e ，a n dt h e ni n j e c t i o no fD Cv a c c i n ei nt h el o c a lt u m o rc a r ls i g n i f i
9、c a n t l yd o w n r e g t t l a t et h ee x p r e s s i o no fi m m u n o s u p p r e s s i v ec y t o k i n eI L - 6a n dc e l lf a c t o rV E G F ，t h e r e b ye n h a n c i n gt h es e n s i t i v i t yo f t h eh o s to nt h eD Cv a c c i n ea n di n i t i a t i n gi n i t i a t i v ea n t i - t
10、 u m o ri m m u n i t y K e yW o r d s ：p a c l i t a x e l ；d e n d r i t i cc e l lv a c c i n e ；c e r v i c a lc a n c e r ；i n t e d e u k i n - 6 ( I L 一6 ) ；v a s c u l a re n d o t h e l i a lg r o w t hf a c t o r ( V E G F )7研究论文紫杉醇联合I ) C 疫苗对小鼠宫颈癌移植瘤影响的 实验研究前言据统计，每年全球新发的宫颈癌患者为5 0 万 1 1 ，其
11、中8 0 的人口在发展中国家，主要的原因在于发展中国家没有建立完善的宫颈癌筛查机制，宫颈癌成为发展中国家妇女死亡的主要原因，死亡率仅次于乳腺癌，居第二位。宫颈癌传统治疗方法包括手术治疗，化疗与放疗。这些方法都有不足之处。近年来，肿瘤的生物治疗发展为一种新的治疗方法，比较有代表性的是D C 疫苗，也就是树突状细胞疫苗，给肿瘤患者带来希望。但由于肿瘤微环境中存在免疫抑制因素，使得生物治疗的效果不尽人意。肿瘤微环境中大量的免疫抑制因子和细胞生长因子，如I L 6 ，V E G F 2 - 3 ，这些因子的产生在一定程度上削弱了D C 的功能，它们抑制D C 的分化、成熟、降低其抗原识别能力，进一步导
12、致D C 不能发挥正常抗肿瘤作用【4 】。怎样降低或者消除肿瘤微环境中免疫抑制因素，促进D C 的成熟，增强D C 的免疫识别和抗原提呈能力，从而打破机体对自身肿瘤抗原的耐受，成为肿瘤生物治疗目前需解决的问题。研究证实 5 】，化疗药可通过抑制肿瘤微环境中的免疫抑制性细胞或细胞因子而降低免疫抑制，本实验采用紫杉醇联合D C 疫苗作用于小鼠宫颈癌移植瘤，观察其对小鼠瘤组织中免疫抑制因子I L 一6 及细胞因子V E G F的影响，探讨使用化疗药物紫杉醇后是否可增强D C 疫苗的抗肿瘤免疫效应。材料与方法1 材料1 1 细胞U 1 4 宫颈癌细胞株，生产厂家：中国医学科学院基础医学研究所基础医学细
13、胞中心，资源编号：3 1 1 1 C 0 0 0 1 C C C 0 0 0 2 3 8 。1 2 实验动物的选择研究论文实验小鼠6 0 只，购于河北医科大学动物实验室，合格证号为1 2 0 2 1 7 3 ，均为雌性健康小鼠，4 6 周龄，体重2 0 9 左右。S P F ( s p e c i f i c p a t h o g e nf r e e )条件饲养，应用前观察l 周。1 3 实验用药注射用紫杉醇：3 0 m t g 支，扬子江制药有限公司，批准文号：国药准字H 2 0 0 5 3 0 0 1 。I 4 实验试剂美国G I B C O 公司生产的R P M l l 6 4 0
14、培养基和D M E M 培养基；R N D公司生产的重组小鼠白细胞介素一4 ( r m l L 一4 ) 、重组小鼠粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子( r m G M - C S F ) ；B D 公司生产的两种抗体，分别是C D 8 6 与C D l1 C ；H y c l o n e 公司生产的胎牛血清；武汉博士德有限公司生产的兔抗鼠I L 6 多克隆抗体、兔抗鼠V E G F 多克隆抗体。1 5 实验仪器日本Y a m a t o 公司生产的C 0 2 细胞培养箱；德国H E R A E U S 公司生产的高速离心机；日本三洋公司生产的高压蒸汽消毒器；B D 公司生产的流式细胞仪；德国H e
15、 t t i c h 公司生产的8 0 * ( 2 超低温冰柜；天津泰斯特仪器厂生产的水浴箱2 0 1 。0 ；上海光华仪器厂生产制造的电热干燥箱D G B 2 0 ；厦门麦克奥迪仪器有限公司生产的M o t i cM e d6 0 图象分析系统。1 6 药品与试剂的配置1 6 1 配置P B S ：称取N a 2 H P 0 4 1 2 I - 1 2 03 5 8 克，K H 2 P 0 40 2 4 克，K C l0 2克，N a C l8 9 ，量取三蒸水：1 0 0 0 毫升，加1 0 MN a O H2 0 0 v a ，混匀，高压灭菌，放在四摄氏度的冰箱中以备使用。1 6 2 紫杉醇溶液的配置：用4 8 m l 生理盐水溶解3 0 m g 紫杉醇，配成终浓度为0 6 2 5 m g m l ，分装，放4 “ C 冰箱备用。1 6 3 冻存液的配
