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1、专 题 整 合提取DNA利用的是DNA、RNA、蛋白质质和脂质质的理化性质质的差异。具体地说说，DNA与其他物质质在不同浓浓度的NaCl溶液中溶解度不同，再通过过冷酒精进进一步去除其他杂质杂质 。另外DNA对对高温和洗涤剂涤剂 的耐受性较较高，不易被破坏。鉴鉴定时时可采用二苯胺试剂试剂 沸水浴加热热呈蓝蓝色来判断DNA的存在。DNA与蛋白质的提取 提取与分离蛋白质质是根据蛋白质质的分子形状和大小，所带电带电 荷的性质质和多少，溶解度、吸附性质质以及对对其他分子的亲亲和力等理化性质质，将不同种类类的蛋白质质分离开。凝胶色谱谱法可以将相对对分子质质量不同的蛋白质质有效分离。DNA与蛋白质质的提取技
2、术术比较较电电泳法可将带带有不同电电荷的蛋白质质分离。DNA血红红蛋白材料选选取鸡鸡血细细胞等DNA含量相对对较较高的生物组织组织哺乳动动物的成熟红细红细 胞细细胞破碎加蒸馏馏水、加洗涤剂涤剂 和食盐搅盐搅 拌、研磨加蒸馏馏水和甲苯充分搅搅拌去除 杂杂 质质用不同浓浓度的NaCl溶液处处 理 用酒精溶液处处理 用蛋白酶处处理透析处处理 纯纯化处处理鉴鉴 定加入二苯胺，沸水浴SDS聚丙烯酰烯酰 胺凝 胶电电泳法测测定蛋白质质 的相对对分子质质量PCR技术与凝胶色谱法的比较 PCR凝胶色谱谱法过过程变变性：90 以上高温解旋复性：50 左右引物与单单链结链结 合延伸：72 合成子链链凝胶色谱谱柱的
3、制作装填：凝胶装填均匀，无气泡纯纯化酶需要热稳热稳 定性高的TaqDNA聚合酶不需要酶温度高温常温DNA粗提取与鉴定中不同试剂的用途及原理比较 试剂试剂质质量浓浓度用途原理 NaC l溶液2 mol/L溶解DNADNA在NaCl溶液中的溶解度随溶液 浓浓度的变变化而改变变，溶解度在质质量 浓浓度为为2 mol/L时时最大、在质质量浓浓度 为为0.14 mol/L时时最小0.14mol/L析出DNA2 mol/L鉴鉴定 时时的溶剂剂酒精95%(体积积分数)除去杂杂质质以提纯纯 DNADNA不溶于酒精，但是细细胞中的某些 物质则质则 可以溶于酒精二苯胺/鉴鉴定剂剂DNA遇二苯胺(沸水浴)会变蓝变蓝
4、 色柠柠檬酸钠钠0.03 g/mL抗凝剂剂除去血液中的钙钙离子，防止血液凝固【典例1】 下表是关于DNA粗提取与鉴鉴定实验实验 中所使用的材料、操作及其作用的表述，正确的是( )。试剂试剂操作作用A柠柠檬酸钠钠与鸡鸡血混合溶解细细胞中DNAB蒸馏馏水与鸡鸡血细细胞混合保持细细胞形状C蒸馏馏水加入到溶解有DNA的NaCl溶液中析出DNA丝丝状物D 冷却的酒精加入到过滤过滤 后含DNA的NaCl溶液中产产生特定的颜颜色反应应解析 在DNA的粗提取与鉴定实验中，柠檬酸钠可以防止血液凝固；鸡血中加入蒸馏水可以使细胞膜和核膜破裂；DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，在质量浓度为0.14 mol/
5、L NaCl溶液中溶解度最低，有利于DNA析出；DNA不溶于酒精，可以获得较纯的DNA；DNA遇二苯胺(水浴加热)产生蓝色反应。答案 C(1)为为避免外源DNA等因素的污污染，PCR实验实验 中使用的微量离心管、枪头枪头 、缓缓冲液以及蒸馏馏水等在使用前必须进须进 行高压灭压灭 菌。(2)在微量离心管中添加反应应成分时时，每吸取一种试剂试剂 后，移液器上的枪头枪头 必须须更换换。(3)所有的成分都加入后，盖严严离心管的盖子，用手指轻轻弹击轻轻弹击 管的侧侧壁，混匀后离心处处理，使反应应液集中在离心管底部。PCR技术操作注意事项 (4)PCR实验实验 中应应注意各种反应应成分的用量，用量不当、漏
6、加成分、PCR程序设设置不当等，均有可能导导致DNA片段扩扩增的失败败。(5)PCR扩扩增的是位于两种引物之间间的DNA片段，合理设计设计 引物是PCR成功的关键键。【典例2】 PCR实验验中使用的微量离心管、缓缓冲溶液以及蒸馏馏水使用前必须进须进 行的关键键步骤骤是( )。A反复洗涤涤 B用酒精擦洗C高压灭压灭 菌 D在20 储储存解析 为了避免外源DNA等因素的污染，PCR实验中使用的微量离心管、枪头、缓冲液以及蒸馏水等在使用前必须进行高压灭菌。PCR所用的缓冲液和酶应分装成小份，并在20 储存。使用前，将所需的试剂从冰箱内拿出，放在冰块上缓慢融化。答案 C 【例1】 (2011广东理综，
7、5)下列关于猪血红红蛋白提纯纯的描述，不正确的是( )。A洗涤红细涤红细 胞时时，使用生理盐盐水可防止红细红细 胞破裂B猪成熟红细红细 胞中缺少细细胞器和细细胞核，提纯时杂纯时杂 蛋白较较少C血红红蛋白的颜颜色可用于凝胶色谱谱法分离过过程的监测监测D在凝胶色谱谱法分离过过程中，血红红蛋白比分子量较较小的杂杂蛋白移动动慢解析 猪成熟红细胞中缺少细胞器和细胞核，提纯时杂蛋白较少，是提纯血红蛋白的理想材料。提纯血红蛋白分四步：红细胞的洗涤、血红蛋白的释放、分离血红蛋白溶液、透析，其中洗涤红细胞时，要用生理盐水反复洗涤，既要将红细胞洗涤干净，又要不破坏红细胞，然后再用蒸馏水和甲苯使红细胞破裂，释放出血
8、红蛋白。分离提纯血红蛋白时用凝胶色谱法，是根据相对分子质量的大小来分离蛋白质，相对分子质量大的蛋白质移动速度较快；血红蛋白的颜色可用于观察红色区带的移动情况，并据此判断分离效果。故D不正确。答案 D【例2】 (江苏高考)下列叙述中错误错误 的是( )。A改变变NaCl溶液的浓浓度只能使DNA溶解而不能使其析出B在沸水浴中，DNA遇二苯胺试剂试剂 会呈现蓝现蓝 色C用电电泳法可分离带电带电 性质质、分子大小和形状不同的蛋白质质D用透析法可去除蛋白质样质样 品中的小分子物质质解析 提取DNA的原理，是DNA在不同浓度NaCl溶液中的溶解度不同。DNA在质量浓度为0.14 mol/L的NaCl溶液中溶解度最小，因此如果将NaCl浓度调至质量浓度为0.14 mol/L会使DNA溶解度变小而呈析出状态。答案 A考情分析：本专题内容包括DNA粗提取与鉴定、多聚酶链式反应扩增DNA、血红蛋白的提取与分离等，高考对本专题内容的考查多集中于DNA粗提取原理、DNA鉴定、PCR技术原理及其与体内DNA复制的比较，血红蛋白的提取与分离、凝胶色谱法等题目难度相对较大。
