《临床标本检验》由会员分享，可在线阅读，更多相关《临床标本检验（50页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、临床标本的细菌学检验基本要求l认真核对：l了解诊断：l联系临床：正确采集和处理标本l无菌操作：对无菌或有菌标本不同处理l盛放容器：无菌容器l采集时间、部位：l送检时间、方法：及时送检、低温或保温保存l安全防护：l及时检验和报告：选择合适的培基养和培养方法增菌血平板SSMAC/ EMB巧克力 培养基SNANYESA备注血液 骨髓+可同时做厌氧、需氧培 养，做菌计尿液+做菌计、需要时做厌氧粪/肛拭+弧菌培养选用碱性蛋白 胨水和TCBS培养基痰/咽拭+直接涂片镜检脓液 分泌物+直接涂片镜检、可同时 做厌氧、需氧培养 生殖道 标本+可直接涂片镜检眼耳口鼻 标本+直接涂片镜检体液+直接涂片镜检，可同时
2、做厌氧、需氧培养 血液和骨髓l采血时间与次数：采集血培养都应该在使 用在使用抗生素之前进行；对间歇性寒战 ，应该估计寒战或体温高峰时间。 l采血部位：肘静脉或肘动脉l骨髓采集：l增菌培养：培养基中加入SPS检测方法和报告l普通培养：分别做厌氧和需氧培养l阳性表现：均匀浑浊，革兰阴性菌浑浊有绿色，肺炎链球菌表面有菌膜有绿色荧光，铜绿假单胞菌下面沉淀，链球菌溶血，溶血性链球菌浑浊有胶胨，葡萄球菌灰白色菌膜，枯草芽孢杆菌l涂片革兰染色镜检，直接药敏、分离培养l报告临床l阴性结果7天报告检测方法和报告l特殊培养脑膜炎奈瑟菌培养：37加5-10%CO2伤寒或其它沙门菌：接种葡萄糖胆汁肉汤或胆盐肉汤草绿色
3、链球菌：胰酶酪蛋白大豆肉汤，同时做需要、 CO2和厌氧培养L型细菌：高渗液体培养基，“油煎蛋”菌落厌氧培养：真菌培养：临床意义l确诊菌血症和败血症l金黄色葡萄球菌见疖、痈、脓肿引起的败血症l革兰阴性菌见尿路、胆道、胃肠道引起的败血症l草绿色链球菌引起亚急性心内膜炎l铜绿、金葡引起烧伤后败血症尿液的处理l标本采集：一般培养采用清洁中段尿。采样前，用肥皂 水或清水清洗外阴，排出尿液前段需丢弃，中 段和后段尿液10-20ml盛装于无菌的容器。肾盂尿采集法膀胱穿刺尿采集法结核菌涂片或培养用24小时尿取沉淀。检测方法和报告l直接镜检-离心沉淀涂片革兰染色-淋球菌镜检l假丝酵母镜检l结核分枝杆菌镜检检测方
4、法和报告l分离培养-普通培养：-淋球菌培养：-厌氧菌培养：-真菌培养：检测方法和报告l菌落计数倾注平皿法： 尿液稀释成1：10、1：100、1：1000， 取此液1ml放入直径9cm灭菌平皿内，同时加入已熔化并 冷至50的培养基与尿混合，待凝固后置35 培养。定量接种环涂抹法：使用 1ul的定量接种环沾满尿液， 在分离培养基分离培养。生长的菌落数乘以 1000，等于 每毫升尿中的菌数。 l 报告：革兰阴性菌105cfu/ml，革兰阳性菌104cfu/ml有临床意义阴性报告为“48h培养无菌生长”l患者徐某，男，26岁，因烧伤入住 某院烧伤病房等待植皮手术。期间 ，患者烧伤创面有蓝绿色有甜腥气
5、味的粘稠分泌物渗出，随后患者出 现41高热、呼吸急促、血压下降 、昏迷。临床诊断为败血症休克， 立即给予广谱抗生素抗菌治疗与对 症支持治疗，同时采集血标本送检 验科微生物室检验并要求做药敏试 验。请问，该患者可能为哪种细菌 感染？血培养将会出现什么现象？ 该如何进一步鉴定？l患者周某，男，65岁，结肠癌术后化疗三日后出现高 热，常规应用抗生素治疗无效，遂临床采集血标本送 检验科微生物室，要求血培养鉴定病原菌及药敏试验 。微生物室工作人员血标本经18h培养后，出现均匀混 浊，酚红指示剂变色。请问该病人可能是什么细菌感 染？如何进一步鉴定？l患者李某，女，57岁，术后留置导尿3d后出现 发热（38
6、以上）、尿痛、排尿困难，查体有 下腹触痛与肾区叩痛，临床初步判断为肾盂肾 炎，病房要求检验科派人协助采集尿液标本送 检。请问如何正确采集标本，并如何进行检验 ？粪便标本l自然排便法：挑取脓血、黏液的粪便2-3g于无 菌的纸盒中，或放置于增菌液中送检l直肠肛拭子法：直接送检或放入运送培养基中 送检检测方法直接镜检：针对特殊细菌，如霍乱弧菌、结核、真菌等-霍乱弧菌：鱼群样排列的革兰阴性菌，动力阳性-葡萄球菌：金葡菌引起的假膜性肠炎-结核分枝杆菌：-艰难梭菌：革兰阳性粗大杆菌，无荚膜、有芽孢-空肠弯曲杆菌：细小、弧形、S形或螺旋形革兰阴性检测方法分离培养-沙门菌及志贺菌：增菌培养或直接接种于SS和M
7、AC、 CB，3718-24h培养，挑取可疑菌落接种KIA/MIU，进 一步做生化和血清凝集试验-霍乱弧菌：碱性蛋白胨水37增菌6h，挑取菌膜接 种TCBS平板， 37培养16-20h，挑选可疑菌落氧化酶 阳性，多价“O”诊断血清凝集试验-大肠杆菌培养：挑取脓血、黏液的粪便接种于MAC或 EMB， 37培养18-24h，挑取可疑菌落接种KIA/MIU， 进一步做生化和血清凝集试验-金黄色葡萄球菌培养：接种于高盐甘露醇琼脂， 37培养18-24小时-副溶血弧菌培养：增菌后接种与弧菌选择性培养基 与SS培养基。 检测方法l分离培养-小肠耶尔森培养：接种NYE、MAC及SS，22-25及37 培养，
8、挑取可疑菌落接种KIA/MIU，进一步做生化鉴定 。-空肠弯曲杆菌：接种弯曲菌培养基，43微需氧培养 24-72h-艰难梭菌培养：取黄色伪膜状粪便，接种于CCFA平板 ，37厌氧培养48h，挑取可疑菌落检测毒素临床意义l检测引起腹泻、食物中毒的肠道菌致病菌l检测肠道正常菌群，预防菌群失调l患者杨某，女，24岁，2日前到某海滨城市旅 游，并在街边小店食入大量海鲜。回家后出现 腹痛、腹泻、呕吐、低热到医院就诊。临床采 集粪便标本送检验科微生物室。标本性状为糊 状，常规接种SS平板与CB平板，培养18h后发 现SS平板上除乳糖阳性菌落外有扁平、无色透 明、蜡滴状小菌落生长，CB平板上未见乳糖阴 性菌
9、落生长。请问患者可能是何种细菌感染？ 如何进一步鉴定？l患者张某，男，24岁，因餐后2h出现恶性、呕 吐、发热伴腹泻入院治疗，临床初步判断为食 物中毒。采集粪便标本后送检验科微生物室检 查。粪便性状为糊状。微生物室工作人员收到 标本后直接接种于SS与MAC培养基分离培养， 24小时后仅见乳糖阳性菌落生长，请问是何原 因？该如何进一步进行检验？l某位病人因肺炎住院，经抗生素治疗7天后出 现腹痛、腹泻、发热等症状。病房留粪便标本 送检验科微生物室检查。观察粪便性状呈粘液 血便，带有条状伪膜。微生物室工作人员收到 标本后直接接种于SS与MAC培养基分离培养， 24小时后仅见乳糖阳性菌落生长，请问是何
10、原 因？该如何进一步进行检验？呼吸道标本l标本采集：咽拭子采集法：自然咯痰法：小儿取痰法：气管镜采集法：胃内采痰法：气管穿刺法：检测方法l显微镜检查直接镜检：观察痰液质量染色镜检：观察细菌或分枝杆菌分离培养l培养前处理：均质化：净化：l普通培养：接种于BA，10%CO237培养18-24 小时，挑取可疑菌落涂片、染色，进一步做生 化鉴定。l结核杆菌培养：分离培养l厌氧菌培养：接种两个BA，同时做厌氧与需氧 培养l真菌培养：接种SA，37或22培养48小时l白喉棒状杆菌：接种亚碲酸盐培养基上， 37培养48小时，典型菌落做生化、毒力试验l百日咳鲍特菌：接种BG培养基，37培养2-5 天，挑取可疑
11、菌落涂片、血清学试验临床意义l呼吸道标本有正常菌群l用于检测呼吸系统，鼻咽部的感染。l与临床联系，找到病原菌。l患者王某，男，63岁，入院后经气管插管手术 48h后出现发热、咳嗽、咯痰，X线检查显示有 较新炎症病灶，初步判断为肺部感染。取病人 痰液标本送检验科微生物室检验。病人痰液呈 砖红色似果酱样，粘稠。请问该病人可能是何 种病原菌感染？将如何鉴定？l某医院检验科微生物室收到一痰液标本，色黄 、粘稠。该检验科工作人员收到标本登记后， 将其用40g/L NaOH消化处理后，进行抗酸染色 ，镜检未见抗酸阳性杆菌，遂发出初步报告： “标本经抗酸后未见结核分枝杆菌”。请 问该工作人员的做法是否存在问
12、题？如果是你 将如何进行检验？脑脊液l标本采集医师以最严格的无菌技术做腰椎穿刺。气温 较低时，应保温送检或床边接种后，立即孵育 检验方法l显微镜检查： -脑脊液外观：结核性膜炎常为毛玻璃样。其它细菌引起化脓性脑膜炎，脑脊液都明显浑浊。-涂片镜检：混浊或脓样脑脊液可直接涂片,革兰染 色，镜检。无色透明的脑脊液,应以3000r/min离心 10-15分钟,取沉淀物涂片,革兰染色镜检，根据染色 反应及形态特征，可初步提出感染细菌的种类。检测方法l显微镜检查：革兰阴性双球菌革兰阳性双球菌革兰阴性小杆菌革兰阳性小杆菌分离培养l用接种环挑取混浊脑脊液或离心沉淀物，分别 接种于BA或CA平皿上，置355%C
13、O2环境中培 养18-24小时，检视有无细菌生长。根据菌落 特点及染色后镜检的特征，初步判断细菌种类 ，并进一步做生化鉴定及血清学检查加以鉴定 ，并作出报告。 临床意义l细菌性脑膜炎的病原学诊断l鉴别诊断病毒性脑膜炎l治疗疗效评估脓液及创伤分泌物l标本采集封闭性脓肿：注射器抽取开放性脓肿：烧伤创面：检验方法l涂片：革兰染色镜检放线菌挑取硫磺颗粒镜检检验方法l分离培养-普通细菌培养：分别接种于BA或EMB平皿上，置 37培养18-24小时，检视有无细菌生长。根据菌落 特点及染色镜检特征，初步判断细菌种类，并进一 步做生化鉴定-厌氧培养：接种BA，或增菌后8020分钟加热后 移种BA， 37培养1
14、8-24小时，挑取可疑菌落染色 镜检，并进一步做生化试验、动物试验。临床意义l检测细菌性创伤感染l检测气性坏疽l检测烧伤的创面感染l患者黄某，男，48岁，为北方某林区管理员， 在一次例行林区巡视时发现有大量老鼠死亡， 回家2日后出现发热、头痛、淋巴结肿大伴疼 痛，立即到当地县城医院就诊，后转送市中心 医院ICU隔离病房。对患者淋巴结穿刺液涂片 染色镜检，查见革兰阴性两端浓染的短小杆菌 。请问该患者可能为何种细菌感染？如何进一 步进行检验？l患者赵某，女，63岁，患有糖尿病，晚期伴毛 细血管病变。一日因足部不慎被玻璃划伤到社 区医院进行了常规伤口处理，但伤口经久不愈 ，并出现化脓性感染。遂到社区
15、医院复诊，医 生进行了伤口清洗处理，并给予口服抗生素治 疗。两周后伤口仍不愈合，并出现发黑、发臭 ，有黑色脓血渗出，又到某三级医院治疗。临 床采集了伤口附近坏死组织，并送检验科微生 物室检验，请判断可能是由何种细菌感染，并 说明该如何进行检验。生殖道标本l标本采集医师采集，女性采集尿道口、阴道、子宫颈 或直肠的（怀疑淋球菌感染）男性采集尿道口 分泌物及前列腺等分泌物标本。用棉花拭子采 集标本，收集于无菌试管内送检。 检验方法l显微镜检查一般细菌及淋病奈瑟氏菌涂片检查：制成涂片 ，干后进行革兰氏染色，镜检发现有革兰氏阳 性或阴性细菌，即可根据形态做出报告。 梅毒螺旋体做暗视野或镀银染色检查假丝酵
16、母：检验方法l分离培养一般细菌及淋病奈瑟氏菌培养：一般情况下 可用BA，35孵育。若培养淋病奈瑟氏菌则应 增加1个CA，置510% CO2环境孵育。厌氧培养支原体培养：临床意义l诊断泌尿生殖系统炎症l性病的诊断眼、耳、口腔标本l标本采集-采取标本时,耳,鼻,咽拭子会被皮肤或粘膜上 正常菌群污染,采取和分离时应注意。-采取眼分泌物时,应先用无菌生理盐水冲洗眼 部,然后用棉拭子拭干,再以无菌棉拭子采集。-沙眼衣原体用无菌小刀刮取穹隆部或眼结膜 上皮细胞。检验方法l显微镜检查一般细菌及淋病奈瑟氏菌涂片检查：制成涂片 ，干后进行革兰氏染色，镜检发现有革兰氏阴 性双球菌。沙眼衣原体：真菌检验方法l普通培养l真菌培养l其它临床意义l诊断细菌性眼炎、结膜炎、泪囊炎、角膜炎l新生儿眼炎
