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1、名词解释名词解释 蛋白质部分蛋白质部分 1.1. 盐溶盐溶：低浓度的中性盐可以增加球状蛋白的溶解度，此现象称为盐溶。 2.2. 盐析盐析：当盐浓度增高时，如半饱和或饱和状态，蛋白质溶解度降低，从水溶液中沉淀出来。此现象称为盐析。 3.3. 透析透析：利用蛋白质大分子不能透过半透膜，而小分子杂质如无机盐、单糖等能透过半透膜的性质，使蛋白质与小分子杂质分开。 4.4. 超过滤超过滤：利用压力，强行使水和其他小分子杂质透过半透膜，而蛋白质被截留在膜上以达到分离目的的方法，对蛋白质溶液有分级作 用，且有浓缩和除盐作用，可分离不同分子量的蛋白质。 5.5.高效液相层析：高效液相层析： 6.6. 电泳：电
2、泳：指带电粒子在电场中向与其自身带相反电荷的电极移动的现象。 7.7.亲和层析：亲和层析：利用生物大分子物质能与相应的配基专一可逆结合的性质，如蛋白质分子能对配基专一性地结合或复合物，改变条件不能 解离，利用这种特性而设计的一种层析技术。 8.8. 离子交换层析离子交换层析：是一种用离子交换脂作为介质，即离子交换剂的层析法。 9.9.蛋白质一级结构：蛋白质一级结构：指多肽链上各种氨基酸的排列顺序，即氨基酸残基序列。 10.10.二面角二面角：由 C2-N, 单键旋转和 C22-C2 单键旋转角度决定的相邻二个肽平面在空间上的相对位置的夹角。 11.11.二级结构：二级结构：由多肽链主链骨架折叠
3、产生的由 H 键等次级键系得构象单元或局部空间结构。 主要是肽键本身的盘旋方式而不涉及侧链 的构象及其它链的关系。 12.12.超二级结构：超二级结构：由若干相邻的二级结构单元组合在一起，彼此相互作用，形成有规则的在空间上能辨认的二级结构组合体，充当三级结 构的构体。 13.13.结构域结构域：对于较大的蛋白质分子或亚基，多肽键在超二级结构的基础上组装或二个或俩个以上的相对独立的三维实体，再缔合成三级 结构，这种相对独立的三维实体既结构域。 14.14.贝塔转角：贝塔转角：由四个连续的 AA 残基组成，由第一个 AA 的 C=0 与第四个 AA 的 H-N 形成 H 键，两个 Ca 原子之间的
4、距离小于 0.5nm. 15.15.伽玛转角伽玛转角：伽玛转角由多肽链上 3 个连续的 AA 残基组成，主链骨架以 180 度返回折叠，第一个残基的 C=0 与第三个残基上的 N-H 形 成氢键。 16.16.欧米格环欧米格环：由不超过 16 个残基组成的肽段，环的首尾两个残基间的距离小于 0.1 nm ，以亲水残基为主，故总位于蛋白质分子表面， 该环与生物活性有关。 17.DNS-CL-EDMAN17.DNS-CL-EDMAN 法法：是将高灵敏度的 DNS 技术与能连续降解的 Edman 反应有机结合起来的一种测定氨基酸排列顺序的方法。 18.Bohr18.Bohr 效应效应：血红蛋白与氧气
5、的结合，受 PH 及二氧化碳浓度的影响，在周围组织低 PH 及高二氧化碳的情况下，血红蛋白与氧气的亲和 力下降，反之在肺部微血管中，二氧化碳被释放，氢离子浓度下降，PH 值升高，血红蛋白与氧气的亲和力下降，这种 PH 与二氧化碳浓度 对血红蛋白与氧气的结合及释放的效应称为 Bohr 效应。 1 1、 简述考马斯亮蓝法测定蛋白质含量的原理及该法的主要优缺点？简述考马斯亮蓝法测定蛋白质含量的原理及该法的主要优缺点？ 答：考马斯亮 G-250 在游离状态下是棕红色，当它与蛋白质通过疏水作用结合后，呈现蓝色，前者的最大吸收在 465nm，后者在 595nm，在一定的范围内，吸收度与蛋白质含量成正比。可
6、用于蛋白质的定量测定。该法反应十分迅速，仅 2 分钟左右蛋白质与考马 斯亮 G-250 即可达到稳定结合，反映比较灵敏，重复性也好，但 tris,EDTA,尿素等对测定有一定的干扰。 2 2、 根据分子大小不同分离纯化蛋白质的方法有哪些？举出三种方法简述其原理？根据分子大小不同分离纯化蛋白质的方法有哪些？举出三种方法简述其原理？ 答：透析，超过滤，密度梯度区带离心，凝胶过滤，高效液相层析。 透析：利用蛋白质大分子不能透过半透膜，而小分子杂质如无机盐、单糖等能透过半透膜的性质，使蛋白质与小分子杂质分开。 超过滤：利用压力，强行使水和其他小分子杂质透过半透膜，而蛋白质被截留在膜上以达到分离目的的方
7、法，对蛋白质溶液有分级 作用，且有浓缩和除盐作用，可分离不同分子量的蛋白质。 凝胶过滤法：当大小不同的蛋白质分子混合物流经凝胶层析柱时，必凝胶珠网孔达的蛋白质分子不能进入珠内网孔结构，而被排除 在凝胶珠外，随着缓冲液在凝胶珠之间的空隙向下移动，并最先流出柱外，比网孔小的蛋白质分子能够不同程度地进出凝胶珠网孔 内外，从而这些大小不同的蛋白质所经的路径不同，随着缓冲液向下移动，较大的蛋白质分子移动路程较短，先下来。较小的后下 来。 3 3、 根据溶解度差异分离纯化蛋白质的方法有哪些？举出三种方法简述其原理？根据溶解度差异分离纯化蛋白质的方法有哪些？举出三种方法简述其原理？ 答：盐溶，盐析，有机溶剂
8、法，蛋白质沉淀剂法，等电沉淀法。 盐溶：低浓度的中性盐可以增加球状蛋白的溶解度，此现象称为盐溶。主要是由于蛋白质分子吸附某种盐离子后代电层使蛋白质分 子彼此排斥，而蛋白质分子与水分子之间的相互作用却加强，因而溶解度增高。 盐析：当盐浓度增高时，如半饱和或饱和状态，蛋白质溶解度降低，从水溶液中沉淀出来。此现象称为盐析。主要是由于大量中性 盐的加入，盐离子与水这种偶极分子作用，使水分子的活度降低，原来溶液中的大部分甚至全部的自由水转变为盐离子的水化物， 导致蛋白质的水和程度减少，从而驱使蛋白质的溶解度降低。 蛋白质沉淀剂法：向无细胞抽提液加入沉淀剂，如醋酸铝，丹宁酸或离子型表面活性剂等，可以使一些
9、杂蛋白或粘多糖发生沉淀， 沉淀物可以用离心分离除去。 4 4、 根据电荷的差异分离纯化蛋白质的方法有哪些？简述其原理？根据电荷的差异分离纯化蛋白质的方法有哪些？简述其原理？ 答：电泳，离子交换层析。 电泳：指带电粒子在电场中向与其自身带相反电荷的电极移动的现象。由于蛋白质具有两电性质，当蛋白质溶液 PH 大于等电点时， 该蛋白质溶液带负电荷，在电场中向正极移动，反之则带正电荷，在电场中向负极移动。不同的带电颗粒在同一电场中的速度不同， 故可分离出不同的蛋白质。 离子交换层析：是一种用离子交换脂作为介质，即离子交换剂的层析法。阳离子交换树脂含有酸性基团，可以解离出 H，当溶液中 含有其他阳离子时
10、，他们可以交换而结合在树脂上。阴离子交换树脂含有碱性基团，可以解离出 OH，当溶液中含有其他阴离子时， 他们可以交换而结合在树脂上。由于蛋白质有两性性质，当蛋白质溶液 PH 大于等电点时，该蛋白带负电，可结合于阴离子交换剂上， 当蛋白质溶液 PH 小于等电点时，该蛋白带正电，可结合于阳离子交换剂上，即使带同电荷的蛋白质分子，由于所带的电荷不同，与 离子交换剂的亲和能力也不同，利用这种出差异可分离蛋白质。 5 5、 测定蛋白质分子量的方法有哪些？举出三种方法简述其原理？测定蛋白质分子量的方法有哪些？举出三种方法简述其原理？ 答：凝胶过滤法，凝胶薄板层析法，SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法，聚丙烯酰胺梯
11、度凝胶电泳法，渗透压法，超离心沉降速度法，沉 降平衡法，毛细管电泳法。 凝胶过滤法：当大小不同的蛋白质分子混合物流经凝胶层析柱时，必凝胶珠网孔达的蛋白质分子不能进入珠内网孔结构，而被排除 在凝胶珠外，随着缓冲液在凝胶珠之间的空隙向下移动，并最先流出柱外，比网孔小的蛋白质分子能够不同程度地进出凝胶珠网孔 内外，从而这些大小不同的蛋白质所经的路径不同，随着缓冲液向下移动，较大的蛋白质分子移动路程较短，先下来。较小的后下 来。后根据公式算出。 凝胶薄板层析法：薄板层析即在玻璃上涂上一层支持剂作固定相，用缓冲液作流动相，根据样品中各组分与固定相亲和力的不同使 物质得到分离的装置。当流动相溶液沿薄板点有
12、样品的一端向另一端流动时，全排组的大分子物质在板上迁移的速度最快，小分子 速度最慢。在同一块板上，可以用一系列不同分子量的标准蛋白质和未知蛋白质同时层析，后可用滤纸复印，用适当方法染色，显 示出层析位置。在一定有效分离范围内，球形蛋白质的相对迁移距离与分子量的对数作图是一条直线，有未知蛋白质的相对位移可 求出分子量。 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法：在含有琉基乙醇的 SDS 溶液中煮沸蛋白质，SDS 结合到蛋白质分子上，并使组成蛋白质分子的各条 链分开，SDS 复合物的特性能使其在凝胶电泳中的迁移不受蛋白质原有的电荷的影响，迁移率成为复合物长度的函数，而长度又与 分子量成正比，所以其关系是 6 6
13、、 高效液相色谱仪是依据什么原理设计出来的？它有哪些优点？高效液相色谱仪是依据什么原理设计出来的？它有哪些优点？ 答：采用大幅降低支持物的颗粒度，同时增加压力，以维持必要的流速而设计的层析方法。利用混合中各组分理化性质的差别，使 各组分以不同程度分布在固相和流动相中，流动相推动样品中各组分经固定相向前迁移使各组分迁移速度不同，而对物质进行分离 的方法。 优点：分离效率高，应用范围广，分析速度快，样品用量少，易于自动化等。 7 7、 以磺酸型阳离子交换柱为例，简述从混合氨基酸中分离各种氨基酸的原理？以磺酸型阳离子交换柱为例，简述从混合氨基酸中分离各种氨基酸的原理？ 答：离子交换树脂是人工合成的，
14、具有酸性基团或碱性基团，并具有网状结构的高聚物。 （1）先用 PH3.25 的柠檬酸钠缓冲液来平衡树脂。即将其处理成钠型。 （2）将氨基酸混合液调 PH 值至 2.2，即小于等电点，在低 PH 离子强度下，由于缓冲液 H 离子浓度大，H 离子解离被抑制，使氨基酸带正电荷。 （3）灌注：由于静电引力，带正电荷的氨基酸被树脂吸附，与树脂上的钠离子发生交换，将钠离子交换下来。 （4）洗脱：用 PH 逐渐增高的缓冲液洗脱。分离出游离氨基酸。 8、简述蛋白质一级结构测定的基本步骤？简述蛋白质一级结构测定的基本步骤？答：（1）分离提纯待分析的蛋白质样品。 （2）测定蛋白质的分子量（3）测定蛋白质分子中多肽
15、链数目。 （4）拆分蛋白质分子中的多 肽链。 （5）对每条肽链进行氨基酸组成分析。 （6）鉴定多肽链的 N-末端或 C-末端残基。 （7）多肽链部分裂解及肽片断的分离。 （8）测定各肽段的氨基酸顺序。 （9）建立完整多肽的氨基酸顺序。 （10）确定二硫键的位置。 9、蛋白质蛋白质 N-N-端分析的方法有哪些？举出三种方法简述其原理端分析的方法有哪些？举出三种方法简述其原理 答：2，4-二硝基氟苯法（DNP 法） ，二甲氨基萘磺酰氯法（DNS 法） ，Edman 降解法，DABIT/PITC 双偶合法，氨肽酶法。 10、测定蛋白质肽段氨基酸排列顺序的方法有哪些？举出两种方法简述其原理？测定蛋白质
16、肽段氨基酸排列顺序的方法有哪些？举出两种方法简述其原理？ 答：减数 Edman 降解法，DNSCLEdman 法，酶法，蛋白质自动顺序分析仪法。 DNSCLEdman 法：该法是将高灵敏度的 DNS 技术与能降解的 Edman 反应有机地结合起来的一种测序方法。将样品用水溶解后， 取少量样品用 DNSCL 法测氨基酸 N 端的氨基酸，在一定条件下反应后，抽取 N 端形成的 PHT氨基酸弃去，此时第二个氨基酸 变为 N 末端，将上述抽取后的肽段，再以 DNS 法测定 N 端氨基酸，剩下的溶液再按 Edman 法将此 N 端氨基酸脱除 ，反复测定。 1111、简述蛋白质含量（浓度）测定的方法？、简述蛋白质含量（浓度）测定的方法？1 1、凯氏定氮法：每一种蛋白质都有其恒定的含氮量， 根据含氮量可计算蛋白质的含量。降一定的蛋白质用浓硫酸消化分解，使有 机氮全部转化为硫酸氨，再与 NAOH 生成氢氧化铵，加热后得到的氨气被吸收于标准盐酸中，用反滴定法滴定剩余的酸。或用硼酸吸 收，吸收氨气后，氢离子浓度降低，再用盐酸滴定
