《间接血凝实验的一般原理及一般步骤》由会员分享，可在线阅读，更多相关《间接血凝实验的一般原理及一般步骤（17页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、KKME-专业医学搜索引擎 http:/ （一）载体 红细胞是大小均一的载体颗粒，最常用的为绵羊、家兔、鸡的红细胞及 O 型人红细胞。新鲜红细胞能吸附多糖类抗原，但吸附蛋白质抗原或抗体的能力较差。致敏的新鲜红细胞保存时间短，且易变脆、溶血和污染，只能使用 23 天。为此一般在致敏前先将红细胞醛化，可长期保存而不溶血。常用的醛类有甲醛、戊二醛、丙酮醛等。红细胞经醛化后体积略有增大，两面突起呈圆盘状。 醛化红细胞具有较强的吸附蛋白质抗原或抗体的能力，血凝反应的效果基本上与新鲜红细胞相似。如用两种不同醛类处理效果更佳。也可先用戊二醛，再用鞣酸处理。醛化红细胞能耐 60加热，并可反复冻融不破碎，在 4
2、可保存 36 个月，在20可保存一年以上。 （二）致敏 致敏用的抗原或抗体要求纯度高，并保持良好的免疫活性。用蛋白质致敏红细胞的方法有直接法和间接法。直接法只须在低 pH，低离子KKME-专业医学搜索引擎 http:/ （三）血凝试验 可在微量滴定板或试管中进行，将标本倍比稀释，一般为 1：64，同时设不含标本的稀释液对照孔。在含稀释标本 1 滴的板孔（或试管）中，加入 0.5致敏红细胞悬液1 滴，充分混匀，置室温 12 小时，即可观察结果。凡红细胞沉积于孔底，集中呈一圆点的为不凝集（一） 。如红细胞凝集，则分布于孔底周围。根据红细胞凝集的程度判断阳性反应的强弱（图 13-4） ，以凝集的孔为
3、滴度终点。图 13-4 血凝反应强度示意图：红细胞沉积于孔底；：红细胞沉积于孔底，周围有散在少量凝集；：红细胞形成层凝集，面积较小，边缘较松散；：红细胞形成片层凝集，面积略多于；：红细胞形成片层凝集，均匀 布满孔底，或边缘皱缩如花边状 三、胶乳凝集试验 胶乳凝集试验也是一种间接凝集试验，所用的载体颗粒为聚苯乙烯胶乳，是一种直径约为 0.8m 大小的圆形颗粒，带有负电荷，可物理性吸附蛋白分子，但这种结合牢固性差。也可制备成具有化学活性基团的颗粒，如带有羧基的羧化聚苯乙烯胶乳等，抗原或抗体以共价键交联在胶乳表面。化学交联一般通过缩合剂碳化二亚胺将胶乳上的羧基与被交联物上的氨基缩合在一起。这种用交联
4、致敏的胶乳试剂性能稳定，保存期长。 胶乳凝集试验分试管法与玻KKME-专业医学搜索引擎 http:/ 即可观察结果。出现凝集大颗粒的为阳性反应，保持均匀乳液状为阴性反应。胶乳为人工合成的载体，因此其性能比生物来源的红细胞稳定，均一性好。但胶乳与蛋白质的结合能力以及凝集性能不如红细胞，因此作为间接凝集试验，胶乳试验的敏感度不及血凝试验。 四、间接凝集反应的作用 间接凝集反应具有快速、敏感、操作简便、无需特殊的实验设备等特点，而且能用于抗原或抗体的测定，因此在临床检验中广为应用。 （一）抗原的检测 反向间接凝集试验可用于检测病原体的可溶性抗原，也可用于检测各种蛋白质成分。间接凝集反应的敏感度虽较沉
5、淀反应高，但低于新发展的各种标记免疫测定。因此在微量抗原测定中其实用性取决于临床的要求。例如测定尿液 HGG 的胶乳凝集妊娠试验，直接凝集法的敏感度约为 300mIU/ml，凝集抑制法的敏感度约为1000mIU/ml，停经 3540 天以上的孕妇可测得阳性结果。检测乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的间接血凝试验敏感度一般在25ng/ml，对献血员的筛检已不符合要求。 （二）抗体的检测 可用于检测细菌、病毒、寄生虫等感染后产生的抗体，例如间接血凝试验或明胶颗粒凝集试验用于检测抗人免疫缺陷病毒（HIV）抗体以诊断艾滋病、胶乳凝集试验用于检测抗溶血素 O 等。也有用于检测自身免疫性疾病的抗体，例如类风
6、湿因子胶乳凝集试验、抗KKME-专业医学搜索引擎 http:/ 抗体和抗甲状腺球蛋白抗体的间接血凝试验等。衣原体抗原检测 ELISA 法是什么?准确吗衣原体抗原检测 ELISA 法是什么?准确吗？曾经的治疗：吃药 30 多天，去医院检查想得到帮助：衣原体抗原检测 ELISA 法是什么?准确吗？还要检查前，有没有什么禁忌要注意的？专家意见：沙眼衣原体快速检测目前分定性和定量快速检测。目前流行常用的为金标定性快速检测。其检测原理为：用抗衣原体脂多糖单克隆抗体和羊抗鼠 IgG 多克隆抗体分别固定于固相硝酸纤维素膜，并和胶体金标记的另一抗衣原体脂多糖单克隆抗体及其他试剂和原料制成，应用胶体金免疫层析技
7、术，采用双抗体夹心的形式建立的衣原体检测方法，用于女性宫颈和男性尿道中衣原体的检测。从而达到检测女性宫颈和男性尿道中衣原体的存在，专家意见：ELISA 基本方法 ELISA 是酶联接免疫吸附剂测定(Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay)的简称。它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。此项技术自 70 年代初问世以来，发展十分迅速，目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域。KKME-专业医学搜索引擎 http:/ 基本原理 ELISA 是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。由于抗
8、原、抗体的反应在一种固相载体聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。在实际应用中，通过不同的设计，具体的方法步骤可有多种。即：用于检测抗体的间接法(图 a)、用于检测抗原的双抗体夹心法(图 b)以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。比较常用的是ELISA 双抗体夹心法及 ELISA 间接法。频繁手淫会不会引起急慢性肾炎、慢性肾盂肾炎、多囊肾.病情描述（发病时间、主要症状、症状变化等）：频繁手淫会不会引起急慢性肾炎、慢性肾盂肾炎、多囊肾、肾功能不全等症状？在体检中检查尿液主要是为了检查什么有什么作用专家意见：
9、指导意见：可以检查到以下项目爱迪氏计数BackTop英文名称：AddisCount 化验介绍：计算病人 12 小时尿液沉淀中细胞(包括上皮细胞)、红细胞、管型的数量用于帮助临床诊断观察治疗效果参考值：KKME-专业医学搜索引擎 http:/ 50 万/12h(小时)白细胞 100 万/12h(小时)临床意义：(1)各种类型的肾炎病人尿液中细胞和管型数量可以轻度、中度或显著增高(2)肾盂肾炎、下尿路感染、前列腺炎病人尿液中白细胞增高更显著(3)某些肾盂肾炎病人尿常规检查阴性但爱迪氏计数白细胞增高本周氏蛋白BackTop英文名称：B-JprO 化验介绍：浆细胞病如多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症时尿液中
10、出现一种蛋白质 4060时可以发生凝固 90100时又可以溶解称为本周氏蛋白或凝溶蛋白参考值：对甲苯磺酸法、免疫学法：阴性临床意义：正常人尿液中无本周氏蛋白约 50%的多发性骨髓瘤病人尿 BJ 蛋白出现阳性反应；约20%的巨球蛋白症病人尿中出现 B-J 蛋白酚红排泄试验BackTop英文名称：化验介绍：酚红是一种对人无害的染料静脉注射后 20%为肝脏清除 80%由肾脏排出酚红排泄试验是检查近曲小管分泌功能的指标但有些因素如心功不全、休克、水肿都可使酚红排出减少参考值：临床上以 15 分钟排泌量在 25%以上；2 小时总排泌量在 55%以上作为成人的正常界限总排出量为 63%84%(平均 70%
11、)儿童排泌量较成人稍高老年人稍低临床意义：(1)降低：见于慢性肾盂肾炎、慢性肾炎、肾动脉硬化等并与病变发展程度平行尿毒症晚期酚红排泌可降到 0 尿路梗阻或膀胱功能障碍时因排尿困难酚红排出减慢可出现 12 小时酚红排泌量反高于 15 分钟排泌量的现象(2)增高：肝胆病变时肝脏排泄酚红障碍尿中排泄量增多甲亢病人血液循环加快排泄量增加内生肌酐清除率BackTop英文名称：CCr 化验介绍：内生肌酐为体内肌酸代谢产生血中浓度很稳定肾脏在一定时间内把若KKME-专业医学搜索引擎 http:/ CCr 已下降正常值的 80%以下(2)对肾功能估价肾功能轻度损害 CCr 在 7051ml/min；中度损害
12、Cr 在5031ml/min；重度损害 CCr 在 30ml/min 以下早期肾功不全 CCr在 2011ml/min；晚期肾功不全 CCr 低于 106ml/min；终末期肾功不全；CCr 低于 5ml/min 尿 2 微球蛋白BackTop英文名称：2M 化验介绍：尿 2M 是血液中存在的一种小分子蛋白质它在血中的浓度很恒定平均值为 1.8mg/L 尿液中含量极低正常人尿液中的含量小于 370g/24 小时参考值：酶免疫法：30347g/L 放免法：正常人 320g/L 临床意义：(1)各种原因(炎症、中毒)引起肾小管病变时 2M 的回吸收减少尿液中 2M 增高(2)某些药物(如庆大霉素、
13、卡那霉素、多粘菌素)可造成肾小管损害用药期间2M 明显增高(3)急、慢性肾炎时肾小管受损害尿 2M 增高而单纯膀胱炎、尿道炎时尿 2M 正常测定尿 2M 含量可用于鉴别上、下尿路感染尿比重BackTop英文名称：SG 化验介绍；尿液比重是指尿液与纯水的比重量之比常用比重计检测尿比重与尿液的溶质成正比受饮水量、出汗量及饮食的影响在一定程度上反映了肾脏的浓缩功能参考值：称重法：1.0031.030(小儿尿比重偏低：15 岁 1.0101.014)临床意义：(1)比重升高：急性肾炎、糖尿病、高热、呕吐、腹泻、心力衰竭时尿比重可以升高(2)比重降低：慢性KKME-专业医学搜索引擎 http:/ 形成等
14、渗尿尿沉渣BackTop英文名称：OSMi化验介绍：尿沉渣是指新鲜尿液(约 10ml 左右)在离心器内经一定时间离心然后取出来去掉上清液留下约 0.2ml 的沉渣显微镜下检查尿沉渣成份有：红细胞、白细胞、管型、结晶体等参考值：红细胞：无或偶见 2 个/HP 白细胞：5 个/HP 临床意义：(1)红细胞增多超过 3个/HP 称为镜下血尿常见于急、慢性肾炎、膀胱炎、肾结核、肾结石、肾盂肾炎或出血性疾病(2)白细胞增多超过 5 个/HP 称为镜下脓尿急性肾炎病人尿中白细胞轻度增多肾盂肾炎、膀胱炎、尿道炎或肾结核尿中可看到多量白细胞(3)上皮细胞增多：a.大量扁平上皮细胞：尿路浅层粘膜的炎症、妇女阴道炎性分泌物混入
