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1、抗核抗体检测 及其临床意义宁波市李惠利医院 张瑾风湿免疫性疾病诊断方法v症状、体征v自身抗体v影像学检查v病理风湿免疫性疾病相关自身抗体v抗核抗体谱（ANAs）v类风湿关节炎相关抗体(RF, 抗CCP等)v抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）v抗自身免疫性肌炎谱v自身免疫性肝病相关抗体谱v抗磷脂抗体谱抗核抗体谱检测的意义v有助于弥漫性结缔组织病的分类和诊断抗Sm抗体是SLE的标记抗体；抗Scl-70抗体是SSc的标记抗体；抗Jo-1抗体是PM/DM的标记抗体；v观察疾病活动度和治疗反应抗dsDNA抗体v研究发病机理抗核小体抗体、抗dsDNA抗体v基本概念vANA荧光核型vANAs中的常见抗体抗核抗
2、体v自身抗体：指抗自身组织、器官、细胞及其成分 的抗体vANA：指抗细胞核成分（DNA，RNA，蛋白质和酶） 的抗体。ANA存在一个谱。vANA新概念：抗核酸(Nucleic acid)和核蛋白 (Nucleoprotein)抗体总称v某些核抗原成分在核仁和胞浆内比核质内更丰富(如SSA/RO,Jo-1,rRNP等)ANA检测方法-IIF法ANA滴度 ANA核型ANA滴度的意义v结缔组织病的粗筛（1:160）v阳性标本还需进一步识别v感染、肿瘤及5%正常人可出现低滴度阳性vANA阴性基本可以除外SLEvANA滴度与疾病活动性无明确相关性荧光显微镜下ANA的染色型别v均质型（H）v核膜型（M)v
3、斑点型（S）v核仁型（N）v着丝点型（ACA）v胞浆型（C）v混合型均 质 型 (H)v抗组蛋白v抗ds/ssDNAv抗核小体v主要出现在SLE中均 质 型 (H)核 膜 型 (M)v主要与抗dsDNA有关与抗原底物片固定方法和备制过程有关出现在SLE中 v部分与抗核包膜蛋白有关抗板层素抗gp210出现在PBC中核 膜 型 (M)v与抗ENA成分有关抗Sm抗RNP抗SS-A抗SS-Bv出现在SLE、MCTD、pSS、SSc、PM/DM等斑 点 型 (S)斑 点 型 (S)v与抗核仁蛋白有关抗Scl-70抗RNA多聚酶I抗PM-Sclv出现在SSc中核 仁 型 (N)核 仁 型 (N)v与抗着丝
4、点染色质有关存在于有丝分裂期v出现在SSc、CREST综合征等中着 丝 点 型(ACA)着 丝 点 型(ACA)v与抗胞浆成分有关v抗核糖体P蛋白（rRNP）：出现在SLE中v抗合成酶：Jo-1、PL-12、PL-7、OJ、EJv抗信号识别颗粒（SRP)v抗线粒体：出现在PBC中v抗高尔基体v抗溶酶体v等等胞 浆 型 (C)见于 PM/DM胞 浆 型 (C)ANA荧光核型小结v均质型（H）：像大饼，SLE相关v核膜型（M)： 像圈圈，SLE相关v斑点型（S）：像藕片，抗ENAv核仁型（N）：像纽扣，SD相关v着丝点型（ACA）：像满天星，抗ACAv胞浆型（C）：像空心大饼,SLE PM/DM
5、PBC相关v混合型：稀释后检测有助于区分抗核抗体谱（ANAs）ANAs抗核不溶成分抗核可溶成分 （抗ENA）抗染色体DNA蛋白抗核仁抗体抗DNA抗体抗核小体抗体抗组蛋白 H1,H2A, H2B, H3,H4 抗Sm,U1RNP,SSA,SSB抗Scl-70,Jo-1,PM-1抗rRNP,PCNA.dsDNAssDNA抗着丝点抗体（ACA)抗5sRNA抗dsDNA检测方法v以短膜虫或马疫锥虫为底物的间接免疫荧光法(IIF) ：1:5v短膜虫或马疫锥虫的动基体内含有天然纯dsDNA，未经人工处理，不含组蛋白与 ssDNA，抗原性纯一特异。v优点：特异性好抗dsDNA检测方法v酶联免疫吸附法（ELI
6、SA）: 100IU/ml优点：敏感性最高缺点：过于敏感，同时可能检测到ssDNA抗体和低亲和力dsDNA抗体,而这两种致病力均不强 v放射免疫法(Farr): 20%优点：对高亲和度DNA抗体的检测优于CL-IIF缺点：具有放射性，对技术人员身体造成一定影响v蛋白印迹法（WB）缺点： dsDNA抗原在纯化包备过程中可变性解链，变成ssDNA,导致假阳性结果v不同方法检测SLE患者抗dsDNA抗体的结果： everything is possible v至少用两种方法做（报告结果时注明方法学）,互为补充。 如：IIF法+ ELISA法 抗dsDNA抗体临床意义vSLE 的血清特异性抗体v多有致
7、病性（IgG型），与亲和力（高）有关v与LN与SLE疾病活动性相关，活动期达90可用于SLE 疾病活动期判断药物疗效观察v与SLE急性皮疹、血管炎、浆膜腔炎、白细胞 减少等有关抗组蛋白抗体（AHA） （酶联免疫吸附法X2SD)v可出现于多种结缔组织病，不具有诊断特异性vSLE ：50% 活动期SLE 可达90.2%与LN相关，与SLE疾病活动性存在一定意义的相关性v药物性狼疮（DIL）：90%如：异烟肼、苯妥因钠、青霉胺、雌激素等仅有AHA而无其他ANA，强烈支持DILv其他结缔组织病：23-30%如：RA、PBC、SSc等核小体是真核细胞染色质的基 本复制单位，由组蛋白与DNA组成。参与SL
8、E发病机制： 多克隆B细胞活化剂 产生ANuA，先于其他ANA 促进抗dsDNA与AHA形成 参与LN的发生抗核小体抗体（ANuA） 抗核小体抗体临床意义vSLE标记性/高特异性自身抗体敏感性：58%-66% （优于抗dsDNA及抗Sm ）特异性：98%-100% （与抗dsDNA相当）v用于SLE的早期诊断ANuA 的产生早于抗dsDNA、AHA抗dsDNA阴性者有1/41/2 ANuA阳性v与LN相关，用于SLE疾病活动性监测ANuA、抗dsDNA、AHA联合检测意义抗ENA抗体extractable nuclear antigen v可提取性核抗原v成分：核酸与核蛋白，不含染色质成分v功
9、能：参与细胞内DNA复制、RNA转录、蛋白翻译合成v来源：无种属差异，有组织不均一性v理化特性：对温度和RNA酶敏感（U1RNP、SS-A）v意义：抗ENA抗体是ANAs中范围最广、最为重要的一簇抗体，与疾病活动性大多无相关抗ENA抗体检测方法v免疫双扩散法(ID)v对流免疫电泳法( CIE)v免疫印迹法(IBT)v酶联免疫吸附法(ELISA)v蛋白芯片（Protein chip）抗Sm抗体与抗U1RNP抗体v靶抗原：位于细胞核内的一组含尿嘧啶丰富的核糖核 蛋白， Sm和U1RNP是同一分子复合物中的不 同位点抗Sm抗体与抗U1RNP抗体v抗Sm：SLE的标记性抗体，是前瞻性及回顾性诊断的指标
10、。 阳性率低： SLE （30%）v抗U1RNP：多种CTD均可出现，与手指肿胀、雷诺现象、肌 炎、指端硬化等相关，但肾炎发生率低。阳性率：40 - 60%，其中SLE(30-40%) , SSc(14%) , pSS (12%) , PM/DM (15%)v高滴度抗U1RNP+抗Sm- MCTDv抗U1RNP+ 抗Sm+ SLEv抗U1RNP- 抗Sm+ 实验室误差? U1RNP丢失 ? 抗rRNP抗体v靶抗原：胞浆中60S核糖体大亚基上的磷酸化蛋白抗rRNP抗体vSLE的高度特异性抗体，与SLE脑病相关v常在SLE活动期存在,但不会随病情的缓解立 即消失,可持续1-2年后才转阴。v阳性率：
11、24%v可出现在SLE 早期（ANA及抗dsDNA阴性 ）抗SSA与抗SSB抗体v靶抗原：位于同一小分子核糖核蛋白上的相邻结构在不同的细胞周期，在细胞内的定位不同（细胞核内和胞浆中均可存在）vpSS的SS-A存在于细胞核内SLE的SS-A存在于胞浆中SS-B主要位于细胞核内 45KD 47KD 48KD抗SSA与抗SSB抗体v抗SS-A ：结缔组织病中出现频率最高的抗体（ 60-75%），见于pSS（75%）SLE（25%）RA（10%） SSc （24%）PBC（20%）等v抗SSB：常与抗SSA相伴出现，诊断pSS更特异，见于pSS（40%）、SLE （10%）v临床意义：与新生儿狼疮和先
12、天性心脏传导阻滞、平 滑肌受累、光过敏、血管炎、皮损、紫癜、淋巴结肿大、WBC减少有关vANA阴性的SCLE：常为抗SSA 抗体阳性。抗Jo-1抗体(抗PL-1抗体)v靶抗原：组氨酸tRNA合成酶胞浆中的磷酸蛋白抗Jo-1抗体(抗PL-1抗体)vPM/DM的标记抗体，阳性率20-30%v抗体效价与疾病活动性相关v抗Jo-1抗体综合征：急性发热,对称性关节炎,技工手, 雷诺现象,肌炎（相对轻） ,肺间质病变 v其他抗合成酶抗体：抗PL-7、抗PL-12、抗OJ、抗EJ抗ScL-70抗体v靶抗原：DNA拓朴异构酶I的降解产物主要存在核仁中vSSc的标记抗体，阳性率20-30%v多见于dSSc，病情
13、进展快，提示预后不良v与ILD、弥漫性皮肤硬化有关，而PAH少见v主要靶抗原：着丝点蛋白-Bv多见于ISSc，病程缓慢，提示预后较好vCREST综合征：软组织钙化（C）,雷诺现象（R）,食道功 能障碍（E）,指端硬化（S）,毛细血管扩张（T），但并非 标记抗体，也见于孤立性雷诺现象、SS、PBC、AIH等v国外文献：与PAH相关，而ILD少见中国人群：未发现与PAH相关，但ILD少见白伊娜，王迁等.中国系统性硬化症患者硬皮病相关 自身抗体的检测及其临床意义. 中华微生物学和免疫 学杂志.2011（5）:452-455.抗着丝点抗体(ACA)Take Home MassagevANA荧光核型对抗
14、体性质范围有一定提示作 用，尤其在靶抗原阴性时。vANA阴性而靶抗原阳性主要见于抗胞浆成分 抗体，如：SS-A、Jo-1、rRNP、线粒体等 。v抗核仁型抗体常与SSc有关。v抗均质型或核膜型抗体常与SLE有关。Take Home Massagev抗dsDNA：SLE特异性抗体，与LN及疾病活动度有关，至少两种方法联合检测（如：IIF法+ ELISA法）。v抗核小体、抗组蛋白、抗dsDNA三抗体阳性者强烈提示增殖性LN。v与疾病活动性相关的抗体：抗dsDNA、抗核小体、抗组蛋白、抗Jo-1、抗rRNPv与预后相关的抗体：抗Scl-70（差）、ACA（好）案例1v女性，34岁v游走性多关节痛，雷
15、诺现象半年vRF 56U/L；抗CCP抗体阴性；vANA 1：320v胸部CT：轻度肺间质病变v诊断？治疗？（核仁型）UCTD ILD 发展为 SSc可能性大 Pred+CTX案例2v男性，50岁v双腕关节炎、雷诺现象半年vANA全套：阴性；抗CCP、RF：阴性v胸部CT：轻度肺间质病变右腕关节MRI：骨髓水肿和滑膜炎v诊断？复查：ANA阴性，抗Jo-1弱阳性 诊断：抗Jo-1抗体综合征 Pred+T案例3v女性 32岁 手指关节痛2月 v ANA（+）S1:80 抗SSA（+）135 抗Ro52（+） 110v三大常规正常； ESR CRP 正常；补体 正常；RF 87IU/ml；v诊断？
16、治疗？CTD SLE待随诊，重用HCQ案例4v女性，40岁v4年前多浆膜腔积液、低补体血症、ANA 1：320、 抗SS-A+、抗SS-B+，诊断为“系统性红斑狼疮可能 性大”，予“pred+CTX”治疗好转后“pred 10mg qod +HCQ”维持。v15天前新发面部皮疹（丘疹鳞屑型）、脱发；v尿常规：PRO 阴性；尿四蛋白：轻度增高；v补体下降（C3 50mg/dl C4 7.4mg/dl）；v抗dsDNA（IF） 1：320 抗核小体 + 抗组蛋白+；v诊断？治疗？SLE，SLEDAI 8分， pred1mg/kg/day+CTX案例5v女，28岁，面部红斑，尿蛋白（+） ；vANA 1:1280H；抗dsDNA（IF/ELISA）： 1:40/800 ； C3 40mg/dl C4 6mg/dl ；v诊断？治疗？v治疗半
