肺炎衣原体igm说明书

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1、肺炎衣原体肺炎衣原体 IgM 抗体检测试剂盒抗体检测试剂盒 （酶联免疫法）（酶联免疫法） 本试剂盒用于人血清或血浆中肺炎衣原体IgM抗体的定性检测。 注册证号： 国食药监械 （进） 字 2010 第 3401353 号 【产品名称】【产品名称】 通用名称：肺炎衣原体 IgM 抗体检测试剂盒 （酶联免疫法） 英文名称：Chlamydia Pneumoniae IgM EIA 【包装规格】 ：【包装规格】 ：96 人份人份/盒盒 【预期用途】【预期用途】 A.预期用途 肺炎衣原体IgM抗体检测试剂盒用于定性检测人血清中肺炎衣原体特异性的IgM抗体。 阳性结果可辅助急性肺炎衣原体感染的诊断。 B.背

2、景介绍 自从肺炎衣原体于1986年被描述为病原体以来1，它已被认定是全世界常见的传染源。肺炎衣原体主要是呼吸道病原体，它在成人和儿童中大约引起了1020的社区获得性肺炎，在成人中引起了1020的急性支气管炎2,3,4。 肺炎衣原体还引起了鼻窦炎、原发性咽炎，并可能激发哮喘5。实际上大多数肺炎衣原体感染为亚临床型、无症状且极少引起明显疾病3。 研究表明肺炎衣原体慢性感染是发生动脉粥样硬化的因素之一6,7。 在不同人群中进行的血清流行病学研究表明，幼儿和青少年的血清阳性率急剧增加8,9,10,11。 青春期过后， 血清阳性率持续升高， 老年人的 IgG 和 IgA类抗体的血清阳性率可能几乎达到完全

3、饱和11。 到目前为止，多数研究均依赖于血清学方法进行诊断。已经使用补体结合（CF）试验进行了早期研究，该试验已被用于检测鹦鹉热多年。该试验具有属特异性，初次感染时的阳性可能性大于再感染时的阳性可能性8。 微量免疫荧光法具有种特异性， 但主观成分较大，因此该检测方法需要有经验的技术人员，不适合自动化和高通量的检测。 【检验原理】【检验原理】 Ani Labsystems肺炎衣原体IgM抗体检测试剂盒的检测原理基于以辣根过氧化物酶作为标志酶的间接固相酶联免疫测定。根据下列反应进行测定。 首先病人标本中的肺炎衣原体IgM抗体与包被在聚苯乙烯微孔板上的肺炎衣原体抗原结合。用洗涤液洗去多余的成分后，加

4、入与辣根过氧化物酶结合的羊抗人IgM抗体。洗去未结合的酶结合物，加入无色的含有色素原（TMB）的无色酶底物（H2O2）。酶与色原反应生成有色终产物。加入酸（H2SO4）终止显色反应。颜色强度与患者标本中的肺炎衣原体抗体浓度成正比。 【主要组成成分】【主要组成成分】 A.主要组成成分： 1.微孔板，128孔 A.主要组成成分： 1.微孔板，128孔 包被好的微孔板。 2.样本稀释液，100毫升 2.样本稀释液，100毫升 磷酸盐缓冲液，含有专利商品添加剂、蓝色显色剂 和0.05Bronidox作为防腐剂。 2a.肺炎衣原体IgG去除剂，20毫升 2a.肺炎衣原体IgG去除剂，20毫升 含有抗人I

5、gG，溶于含有专利商品添加剂和0.05 Bronidox作为防腐剂的磷酸盐缓冲液。 3a.阴性对照品，1.0毫升 3a.阴性对照品，1.0毫升 肺炎衣原体抗体阴性的稀释人血清，含有作为防腐 剂的0.05Bronidox和红色显色剂。 3b.临界值对照品，1.0毫升 3b.临界值对照品，1.0毫升 肺炎衣原体IgM抗体处于临界的稀释人血清， 含有作 为防腐剂的0.05Bronidox和红色显色剂。 3c.阳性对照品，1.0毫升 3c.阳性对照品，1.0毫升 含有作为防腐剂的 0.05Bronidox和红色显色剂的稀释人血清。 4.酶结合物，30毫升 4.酶结合物，30毫升 缓冲盐溶液，含有专利商

6、品添加剂、红色显色剂、 与辣根过氧化物酶结合的抗人IgM （羊） 和作为防腐 剂的0.1N甲基异噻唑酮。 5.TMB底物溶液，即用型, 18毫升 5.TMB底物溶液，即用型, 18毫升 含有专用商品添加剂和0.01凯松作为防腐剂的 3,3,5,5四甲基联苯胺和过氧化氢柠檬酸缓冲 液。 6.终止液，终止液，25毫升毫升 0.45 M H2SO4 7.洗涤液，洗涤液，100毫升毫升 浓缩的柠檬酸缓冲盐水、含有专有添加剂和作为防 腐剂的0.05Bronidox。 微孔板贴膜微孔板贴膜 2个个 试剂槽试剂槽 6 个个 注：试剂应保存在+2+8下。 每个组分的标签及包装上均印有效期。 避免不必要的光照，

7、主要是预防试剂受光影响，因为酶结合物及TMB底物溶液都是光敏感试剂。 不同试剂盒中的以下几种成分可以通用： 洗液、TMB底物、终止液 B.需要但未提供的材料需要但未提供的材料 蒸馏水或去离子水，最好是无菌的。 用于稀释试剂的刻度量筒。 保存稀释试剂的试剂瓶。 精密加样器（比如：单道量程为0.510ul、550ul、20200ul、1001000ul和多道50300ul）。 纸巾或吸水纸。 定时器，至少可测60分钟。 微孔板恒温孵育箱。 酶标仪。 洗板机。 次氯酸钠溶液，游离有效氯为50500 mg/l。 一次性手套。 C.实验中各组份的准备实验中各组份的准备 试剂 准备 打开/稀释后试剂 的

8、稳 定 性（+2-8） 包被好的微孔板 即用型 6 个月） 样本稀释液 即用型 6 个月） 肺炎衣原体 IgG去除剂 即用型 6 个月） 对照品 即用型 6 个月） 酶结合物 即用型 6 个月） TMB 底物溶液即用型 6 个月） 丢弃试剂槽中未使用的试剂。底物中出现深蓝色表明溶液已被污染，必须丢弃 终止液 即用型 6 个月） 浓 缩 洗 涤 液（10X） 用蒸馏水1+9 稀释（1：10）+4下一个月，室温下一个星期）由铝箔包装的微孔板在打开后，应该和干燥剂一起密封保存在28下， 将其开口密封好。开封试剂只有在28下正确的保存条件下，它们才可保持好的稳定性，高的环境温度和污染可降低试剂的稳定性

9、。 【储存条件及有效期】【储存条件及有效期】 本试剂盒储存于+2-8 ，有效期 18 个月。 【适用仪器】【适用仪器】 A.该试剂盒适用于各种酶标仪该试剂盒适用于各种酶标仪 【样本要求】【样本要求】 血清和血浆标本采集后应冷藏（4） ，如果不能在48个小时内进行试验，标本应冷冻（20或70中各适合的温度下） 。标本不应反复冻融。标本不应反复冻融。 由于叠氮化钠可使辣根过氧化物酶失活，因此不要使用叠氮化钠作为防腐剂。 血清或血浆的热灭活（56，30分钟）可能引起非特异性结果。 如果被微生物污染、 严重溶血或高脂的血清和血浆，可能产生错误结果。 长期保存血清（冷冻超过一年）可能导致形成脂质聚集物。

10、这些聚集物可能引起非特异性结果。 【检验方法】【检验方法】 A.实验前的控制与操作实验前的控制与操作 在实验开始前，将试剂和微孔板平衡至室温（+2025） 。 并将孵育器预热至 37。 B.实验设计实验设计 样品分配方案如下所示： 微孔板微孔板 图例：BLK空白 NC阴性对照 PC阳性对照 CO=临界值对照 S样品 C.检测方法步骤检测方法步骤 (一一) 试验准备：试验准备： 1.试剂盒取出后在室温下放置 20-30 分钟，使其恢复到室温。 2.稀释血清： 取 5ul 的血清加入到 500ul 的样本稀释液中（2 号瓶） ，稀释比例为 1：101。 3.配制洗涤液：浓缩洗液（WASHING S

11、OLUTION 10X）用酶免级用水进行 10 倍稀释， （1+9） (二二) 试验操作试验操作 1.首先加入 100 ul IgG 去除剂（2a 瓶）到每一个试验所需的微孔中。 2.留出两个孔作为试剂空白对照。 3.加入 10 ul 稀释过的样品到样品孔中。 4.再分别加入10 ul对照品到对照品孔 （3a,3b,3c瓶） ，一式两份。 5.贴上封口箔后在 37下孵育 60 分钟。 6.洗板。每孔加入 300-400ul 洗液，洗 5 次，每次间浸泡 15-30 秒。 7.向每个孔中加入 100 ul 酶结合物（4 号瓶） 。 8.贴上封口箔后在 37下孵育 60 分钟。 9.洗板。每孔加入

12、 300-400ul 洗液，洗 5 次，每次间浸泡 15-30 秒。 10.向每个孔中加入 100 ul TMB 底物液（5 号瓶） 。 11.避光室温下孵育 30 分钟。 12.向每孔中加入 100 ul 终止液（6 号瓶） 。 13.在 450nm 和 620nm （590-690nm） 处读取吸光度值注意： 注意： 为了提高效率和精密度，建议使用 8 通道加样器。 1.用样本稀释液对样本进行 1：101 稀释（5ul 的样本加入到 500ul 样本稀释液中） ， 混合均匀。 临界值对照须加两个样本孔。稀释后的样本在 4下至少可以稳定 2 周。对照品不要进行稀释。 2.避免污染：当从试剂瓶

13、中吸取液体时，要运用无菌技术以避免污染。每一份样本在吸取时都要使用新的吸头。将所需的样本稀释液、酶结合物、TMB底物液加入一次性的试剂槽中（试剂盒内提供 6个） 。 将未用完的液体丢弃， 不要将其倒回原瓶内。 当加底物时，加样器头部不要与微孔壁接触。 3.洗涤时可以手工操作或者用洗板机进行。在洗涤后，将微孔板在纸巾上将水拍干。 4.在 450nm 处以空气调零，参考波长是 620nm（590-690nm） 。大多数的微孔板读数仪可以自动地扣除试剂空白。样本的吸光值可以自动地扣除试剂空白。然而，试剂空白的吸光值应该在指控范围内。 注意：注意：所有的肺炎支原体、肺炎衣原体、百日咳杆菌的 IgG、I

14、gA、IgM 抗体可以用相同的稀释样本来进行检测，这样在实验开始时用肺炎支原体或百日咳杆菌检测试剂盒内的样本稀释液对样本进行稀释是非常重要的。详细的情况看试剂盒的说明 【参考值范围】【参考值范围】 结果计算结果计算 结果以吸光值 临界值（SCO）单位表示。 用下列公式计算： SCO标本（A标本A空白）（A临界A空白） 其中A标本标本的吸光度 A空白空白孔的平均吸光度 A临界临界对照品的平均吸光度 S/Co 结果 0.5 阴性 0.5S/Co1.1 灰区 1.1 阳性 【检测结果的解释】 【检测结果的解释】 A. 判断标准判断标准 当满足以下条件时，测定的结果可被接受： 吸光值 空白 阴性对照

15、临界值质控 0.100 0.150 *) 0.200*) S/Co 阳性质控 2.5-6.1 ）已经从这些值中减去了空白孔吸光度。 B. 结果解释结果解释 灰区灰区 根据对大约500名芬兰献血者血清和血浆标本进行 分析以及计算SCO值的分布参数，疑似区间为 0.51.1。换句话说，得出结果为0.51.1 SCO的 标本被认为是可疑的，应当用成对标本定时地重新 测定以监测IgM抗体的动态。 1 234567 8 9 10 11 12 ABLKS1 BBLKS2 CNCS3 DNCS4 ECOS5 FCOS6 GPCS7 HPCS8 急性传染：急性传染： 原发急性传染时，第一份血清标本中已经可能检测 到 IgM 应答。再感染时 IgM 可能保持阴性。Ani Labsystems 肺炎衣原体 IgA 和 IgG 酶免疫测定为 诊断急性肺炎衣原体感染提供了辅助信息。 非急性传染：非急性传染： 稳定或降低的IgG和或IgA水平加上阴性或疑似的 IgM表明可能存在以下一种感染：既往感染、近期 感染、感染已愈或持续感染。 C. 疑难解答疑难解答 空白太高空白太高 原因原因错误错误 解决方法解决方法 1、污染，其它孔有溢出 液。 避免污染。 2、没有正确稀释浓缩洗 涤液。 应该按 110（1 9）稀释。