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1、人! “ # # $ %可溶性功能片段在毕赤酵母中的分泌表达王蒙，杨媛，杨峥嵘，李广阔，粟永萍，罗成基，程天民【摘要】 目的在毕赤酵母系统中分泌表达具有生物活性的人! “ # # $ %基因胞外区片段 （ ! ! 检测证实其对? 6 ; .细胞具有细胞毒效应。结论在毕赤酵母系统中实现了人 “ # % + * ! K 6K I Q . 9 H. V 7 6 8 ! !. , WR ! N Q 6 ? 3 G H可有效地将其表达产物分泌至胞外， 且其表达产物类似于天然蛋白，无过度糖基化。本研究将/ ! ; G H中进行分泌表达。!材料方法! I !材料与试剂大肠杆菌菌种J K B )和人宫颈癌细胞
2、株K 5 1 )由本实验室收集保存； 酵母分泌型表达质粒, E F G H和酵母宿主菌L $ B购自F * M 0 . 4 - 32 5 *公司； 含人/ ! ; G H的相同位点， 连接产物转化宿主菌J K B )， 提取质粒， 进行E %鉴定和酶切鉴定， 上游引 物：B3 L L、; ; !、! L、 L、! ! 、; L L、L ! 、 ; L、; ; L 3 ? ； 下 游 引 物：B3 ; ! L、 L L、 L、 ! 、; ;、L ;、L ! !、! ;、; ! L 3 ? ； 扩增条 件：G Q? R/、S RQ? R/、= (QT 0 *? R个循环后= (Q=T 0 *。!
3、I “ I “感受态酵母细胞的制备按照 精编分子生物学实验指南 中提供的方法将酵母菌L $ B制备成感受态。! I “ I #毕赤酵母的转化质粒, E F G H 3 / ! ; %检测，E %反应体系和扩增条件同前。将E % 检测阳性的N 6 .阳性转化体接种于含L A的V E J平板上，L A浓度分别为R I B、R I = B、 I R、 I B、( I R、 I R、B I RT 2T 1、? RQ孵 育( L 1 2 5 : 76 7 6 8 9 : 1 : A $ % ? ? ? ? 7 A 7 A : , - . . ) != B C -1 7 9 5 6 : 5 %：% G H
4、 I J H（ 7 6 ? 6 9 7 A : : B （2 32 4）)（* + ,）C 6 3 7 A D 6 ? : 9 : 4E, 0 F - 1 G , 0 , % -( 7 2 7 3 6 A D 6 ? : 9 : 4，! , 0 , .；J! , 0 , %讨论! C K超家族成员是机体内产生的一类重要的 细胞因子， 它们以膜蛋白形式， 或者通过蛋白酶水解成为可溶性的细胞因子后， 结合相应受体介导多种生物学效应， 在细胞增殖、 分化、 凋亡以及免疫反应、炎症等一系列生理和病理反应过程中均具有非常重要的调控作用， 而干预! C K! C K L信号对动脉粥样硬化症、 自身免疫性疾
5、病、 移植排斥反应、 慢性炎症、 骨病以及许多恶性肿瘤的治疗亦具有重要意义.。! “ # # $ %是% + + +年被发现和描述的属于! C K ( K一个新型细胞因子， 其基因定位于染色体% H M H 1 $ H *，! “ # # $ %基因全长编码1 F .个氨基酸， 分 子量为H % 0 HN )， 是一个典型的“型穿膜蛋白， 其C端%!* -位氨基酸为胞内区片段，# * I!O I H为疏 水跨膜区， 其余为胞外区片段， 其中部分胞外区片段（“ % H * !# 1 F .） 在某些蛋白酶的作用下发生水解， 形成可溶性功能片段 （/ : 4 ; J 4 6! “ # # $ %）
6、-。人! “ # # $ %在外周血单核细胞、 淋巴结、 脾脏和骨髓等组织中表达最丰富， 它通过与效应细胞膜表面的相应受体相互作用， 向胞内传递信号对机体的细胞及体液免疫进行调节。目前证实属于! C K受体超家族的H个 “孤儿受体” ：P细胞成熟蛋白 （P? 6 4 42 7 ; 9 7 A : ，P = Q“） 、 跨膜激活与= “Q # 作用因子 （ 9 7 / 2 6 2 J 9 7 6 7 ? A D 7 : 9 7 R= “Q # $ A 6 9 $7 ? : 9，! “ = ） 和P细胞激活因子受体 （P “ K K $ L） 是! “ # # $ %的受体， 其中! “ # #
7、$ %和“ S L #与它们的1个受体! “ = 和P = Q“形成了双配体$双受体系 统， 共 同 调 节P细 胞 的 活 化、 增 生 与 成 熟I。! “ # # $ %具有! C K超家族成员的共性， 对肿瘤细胞 具有细胞毒效应， 能强烈地抑制多种肿瘤细胞的生长， 激活? 7 / = % 0 5 1 : %毕赤酵母真核表达系统中的分泌表达， 并且表达产物具有免疫反应活性和抗原特异性，? C D T + : 2 / 2 * / 2 0 5 F U / 2 /= B 4 : F : ; = 0 : 5 2 = 2 * : 0 % 4 5 ; = 0 : 5 2 : 2 = F 5 E 1
8、) U / 2 / ; 4 E % 0 / 1CD2 “ ) *3 / . 04 * / %- * (5 - 4，J K K K，# “（+） ：# J + K ) # J + $ D+? = ; 7 = IH，. 5 5 * ; 5 ; 7“ ，( = V 0 5 29，# . / 01 ? : ; / 0 1 = 2 % U / 2 : ; F 5 1A H H* / Q / 4 5 4 I B 0 5 1 % F 5 1 = = 0 / * : 2A ) ; / 4 4 = E 0 5 : B B E 2 / * : % )/ = % /CD3 / . ; “ #，J K K K， 0
9、: 5 2 %5 F2 / V 4 I: * / 2 0 : F : / *B / B 3 / 1 % 5 F 0 0 5 14 : U = 2 * % E / 1 F = B : 4 : / %: 2 4 I B , ; $ ) 0，# L L L，$ $（+） ：+ W K )+ W $ D M“ ; 1 5 0 / : 2，V / 2 % = 3 4 /F 5 1 5 2 % / %CD: ) 0 = * 5 0 5 % : %，2 E ; 4 / = 1 F = ; 0 5 1 ) 7 = = A，= 2 * ; ) C E 2G J ) 0 / 1 B : )2 = 4 7 : 2
10、= % /CD6 ( ) 0 , ; $ ) 0，J K K #，!（6） ：M + J ) M + 6 D # #X / 1 4 = % : = = 2 *= E 0 5 : B B E 2 / * : % / = % / : 2B : ; /CD2 “ ) *3 / . 04 * / %- * (5 - 4，J K K K，# “（6） ：+ + 6 K ) + + 6 $ D# J 5 4 4 / 2 3 / 1 UN 9，! / 4 4 : % % / 2!D 9 1 5 * E ; 0 : 5 25 F 1 / ; 5 B 3 : 2 = 2 0 1 5 0 / : 2 %3 IB
11、/ 0 : ;I / = % 0 %CD ; “ “= 9 ( $ ( ) . # * + $ ) 0，# L L 6，（$） ：$ $ W ) $ M K D （收稿日期J K K M ) K J ) J S） （徐昌娟校）中国药学文摘J K K 6年征订启事中国药学文摘（- “ “ G # K K + _ + $ J #N G # # _ J $ J LT） 是由国家食品药品监督管理局主管， 国家食品药品监督管理局信息中心主办， 国内外公开发行的医药科技性专业期刊。月刊，# M开本， 每期J S K页左右， 每期 约S K万字。是国内药学期刊中唯一的综合性文摘类刊物。收载国内外公开发行的6 K K余种药学相关学科期刊中的精粹文献。全年定价：W 6 M元。 单位名称： 国家食品药品监督管理局信息中心； 通讯地址： 北京市西城区北礼士路甲+ S号 （邮编：# K K S # K） ； 开户名称： 国家食品药品监督管理局信息中心； 开户银行： 建设银行北京展览路支行； 账号：M $ # K K K + K W J M # K K K J $ # 6； 电话：K # K _ M J J # W 6 # $，M J J # W M M $； 传真：K # K _ M J J # W S M M6W#疾病控制杂志J K K 6年W月第# #卷第J期
