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1、 第 3 卷 第 3 期 现 代 农 药 Vol.3 No.3 2004 年 6 月 Modern Agrochemicals Jun. 2004 多菌灵在柑桔及土壤中的 HPLC 残留分析方法 桂文君 黄雅丽 吴慧明 朱国念 （浙江大学农药与环境毒理研究所 杭州 310029） 摘 要 用稀盐酸和甲醇混合溶液提取柑桔和土壤样品中的多菌灵，并采用液相色谱法测定了样品中残留的多菌灵。检测线性范围为 12000 ng，相关系数 r = 0.9996，最低检出量 1.010-10 g，最低检测浓度：土壤 0.025 mg/kg；果肉、果皮和全果 0.010 mg/kg。多菌灵在不同样品中的添加回收率
2、在 80.1%105.4%之间，满足农药残留分析要求。 关键词 多菌灵 液相色谱 残留 柑桔 土壤 多菌灵carbendazim，N-(2-苯并咪唑基)氨基甲酸甲酯，又叫苯并咪唑 44 号、棉萎灵等，是一种广谱内吸性杀菌剂，能防治水稻、棉花、蔬菜、果树等多种作物的多种病害，尤其对子囊菌和半知菌 引起的病害有较好的防治效果1，但它的残效期比较长，对哺乳动物有一定的毒性2，因此农产品中 多菌灵残留量的测定越来越受到重视。近年来，多菌灵在多种作物上的残留分析方法有许多报导，如 荧光分析法3、红外光谱法4、气相色谱法5、薄层扫描法6、可见光比色分析及紫外光谱法7等。其 中，薄层扫描法灵敏度较低，比色法
3、及荧光法操作较繁琐且易受干扰，而气相色谱法需要对样品进行 衍生化处理，李俊凯等以紫外光谱法测定了多菌灵 在柑桔上的残留7，但该方法前处理繁杂，检测周期长，仅溶剂提取一步就须 24 h，易造成多菌灵损 失，且灵敏度低，因此，目前多菌灵的残留分析一般采用液相色谱法8-14，但该法在柑桔上的残留分析未见报道。 多菌灵不溶于水，微溶于常用的有机溶剂，常 规方法用有机溶剂很难将多菌灵从样品中提取出来。 笔者用甲醇和稀盐酸混合溶液对样品进行萃取，以高效液相色谱法测定，方法的准确度和灵敏度均符合农药残留检测的要求。 1 材料与方法 1.1 仪器与试剂 仪器：HP1100 液相色谱仪(DAD 检测器)，色谱工
4、作站，国际型振荡器，2FG-85A 型旋转蒸发仪 试剂：甲醇、二氯甲烷、石油醚、盐酸（均为A.R.级） ； 无水硫酸钠 （A.R.级， 用前在马福炉中 600灼烧 4 h） ；甲醇（色谱纯） ；乙腈（色谱纯） ；水（二次重蒸） ；N,N-二甲基甲酰胺（重蒸） 多菌灵标样： 99.0% 1.2 试验材料 试验作物为柑桔（椪柑） ，土壤、桔果采自浙江衢州市郊柑桔园。 1.3 试验方法 1.3.1 分析原理 利用多菌灵易溶于酸性水溶液、在紫外光下有较强的吸收等特性，采用甲醇和稀盐酸混合溶液作 为提取剂，将样品中的多菌灵提取出来，经液-液分 配等方法将样品净化， 再浓缩并定容至一定的体积，经 HPLC
5、 定量测定其中的多菌灵残留量。 1.3.2 液相色谱操作条件 色谱柱： 4.6mm(id)100mm， TRACE EXCEL 120 ODS-C18不锈钢柱，粒径 5 m。流动相：采用甲醇、乙腈和 0.1%磷酸水缓冲液梯度淋洗：0 min，甲醇 100%；4 min，甲醇 10%，乙腈 20%，缓冲液70%；6 min，甲醇 100%；停止时间 10 min。流速：0.8 mL/min。检测波长：281 nm。进样量：20 L。多菌灵相对保留时间：约 5.5 min。 1.3.3 标准溶液的配制 准确称取 0.01 g(精确至 0.2 mg)多菌灵标准品， 置于 10 mL 容量瓶中， 以
6、N,N-二甲基甲酰胺溶解并定容至刻度，摇匀后即为标准母液。从上述标准母液中准确吸取 1 mL 于 25 mL 容量瓶中，以 N,N- 收稿日期：2004- 01- 14；修回日期：2004- 04- 18 作者简介：桂文君(1973 )，男，浙江桐庐人，硕士研究生，主要从事农药环境毒理方面的研究工作。 26 现 代 农 药 第 3 卷 第 3 期 二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，再从中准确吸取1 mL 于 10 mL 容量瓶中，以 N,N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，备用。 1.3.4 样品的前处理 (1) 土壤：称取制备好的土样 20.0 g（精确至0.01 g）于 250 mL 具塞三角瓶
7、中，加入 80 mL 甲醇和 20 mL（0.1mol/L）的盐酸水溶液，在国际型振荡器上振荡提取 2 h，用布氏漏斗抽滤，以 50 mL甲醇洗残渣，合并滤液于 250 mL 平底烧瓶中，在40水浴上减压浓缩至 4050 mL， 留待液-液分配。 将浓缩后的提取液转移至 500 mL 分液漏斗中，加入 20 mL（0.1mol/L）的盐酸溶液和 100 mL 10%NaCl 溶液后，再加入 50 mL 石油醚剧烈振荡 1 min， 静置分层后， 弃去石油醚层。 下层水相用2mol/L NaOH 溶液调节 pH 值至 6.5，再用二氯甲烷萃取 3次，每次 40 mL。经无水 Na2SO4干燥，合
8、并二氯甲烷于 250 mL 平底烧瓶中，减压浓缩至近干，再用 氮气吹干，以 N,N-二甲基甲酰胺定容至 5 mL。 (2) 柑桔 （桔皮、 果肉和全果） ： 称取 20.0 g （精 确至 0.01 g） 捣碎的样品 （果肉为 50.0 g） 于 250 mL具塞三角瓶中，加入 80 mL 甲醇和 20 mL（0.1 mol/L） 的盐酸溶液， 然后按土壤样品处理方法处理。 1.3.5 标准曲线 采用外标法定量， 将多菌灵的标准母液用 N,N- 二甲基甲酰胺稀释成 0.1100 ng/L 的标准溶液。在上述色谱操作条件下，测定了 HPLC/DAD 对多菌灵响应的线性关系(见图 1)。检测线性范
9、围为 1 2000 ng， 其线性回归方程式为y = 3.3548x + 86.653，相关系数 r = 0.9996，最低检出量：1.010-10 g，最低检测浓度：土壤 0.025 mg/kg；果肉、果皮和全果0.01 mg/kg。 01 0 0 02 0 0 03 0 0 04 0 0 05 0 0 06 0 0 07 0 0 005 0 01 0 0 01 5 0 02 0 0 0 绝对进样量（n g ）峰面积（A u . s ）图 1 多菌灵标准曲线 1.3.6 添加回收率 取制备好的空白对照样品 20.0 g (柑桔果肉为50.0 g)，加入一定量的多菌灵标准品，按上述方法 对样品
10、进行提取、净化、色谱测定后，计算添加回收率，结果如表 1 所示。多菌灵在不同样品中的添 加回收率在 80.1%105.4%之间，变异系数（CV）最大为 5.5%。 1.3.7 残留量计算公式 样品中多菌灵的残留量 X 按式（1）计算： 残留量 X=进样样品检出量（g）定容体积（ml）进样量（ml）样品重量（g）（1） 表 1 多菌灵残留分析方法添加回收率 土壤 全果 果肉 果皮 添加浓度 （mg/kg） 回收率 (XS)% 变异系数 (% ) 回收率 (XS)% 变异系数 (% ) 回收率 (XS)% 变异系数 (% ) 回收率 (XS)% 变异系数 (% ) 0.01 105.45.80 5
11、.50 0.1 87.02.12 2.44 90.72.76 3.04 86.32.33 2.70 98.31.63 1.66 1 88.93.18 3.58 80.14.17 3.80 91.21.04 1.14 92.33.12 3.38 5 82.72.70 3.26 88.01.87 2.13 99.51.48 1.49 注：表中的回收率值均为 3 次平行检测结果，S 为标准偏差。 2 结果与讨论 (1) 多菌灵不溶于水，微溶于常用的有机溶剂，因此，常规方法用有机溶剂很难将多菌灵从柑桔、土壤样品中提取出来。本文利用多菌灵在酸性条件下会成盐而易溶于水这一特性，使用甲醇和 0.1 mol/
12、L 的盐酸水溶液，在振荡器上振荡 2 h，提取基质中残留的多菌灵， 净化后直接用液相色谱仪检测，与李俊凯等7的紫外分光光度法相比，大大缩短了检测周期，简化了操作步骤。 (2) 本文采用高效液相色谱法分析柑桔和土壤中的多菌灵残留，利用 HP1100 液相色谱仪的 4 元梯度洗脱功能，采用 3 种流动相梯度洗脱程序，并选择快速短柱，使残留的多菌灵在 5.5 min 时流出，而其它基质共提物则在其后流出，对多菌灵不产生 干扰，从而使得定性定量结果更趋准确和真实。检2004 年 6 月 桂文君，等：多菌灵在柑桔及土壤中的 HPLC 残留分析方法 27 测线性范围为 12000 ng，添加回收率在 80
13、.1% 105.4%之间，最低检出量 1.010-10 g，最低检测浓度土壤0.025 mg/kg； 果肉、 果皮和全果 0.010 mg/kg。该方法定量准确、快捷，操作简便，灵敏度高，满足农药残留分析要求。典型色谱图见图 2图 8。 图 2 多菌灵标样色谱图 图 3 土壤对照色谱图 图 4 土壤样品色谱图 图 5 果肉对照色谱图 图 6 果肉样品色谱图 图 7 桔皮对照色谱图 图 8 桔皮样品色谱图 参考文献 1 刘乾开, 朱国念. 新编农药使用手册（第二版） M. 上海: 上海科学技术出版社, 1999: 309 2 吴丽明, 黄伯俊. 多菌灵对小鼠精子形态及雄鼠生育力的影响 J. 职业
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