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1、1国产注射用盐酸米诺环素人体药动学研究作者： 王华丽 黄文祥 盛家琦【关键词】 注射用盐酸米诺环素；, 药动学；,反相高效液相色谱法摘要： 目的 研究国产注射用盐酸米诺环素人体内的药动学特征，为临床提供合理给药方案。方法 12 名健康志愿者随机分成 3 组，采用 33 的交叉设计，每人单剂量分别静脉给予 100、200 和300mg 注射用盐酸米诺环素，2h 衡速滴完，分别在给药前和给药后 0、025、05 、075、1、15、2 、4、6 、8、12、24、48 、72h取血。每次间隔一周。采用高效液相色谱法测定血清中米诺环素浓度。结果用 3P97 程序计算其药动学参数。单次静脉注射盐酸米诺
2、环素 100、 200 和 300mg，药动学参数 cmax 分别为(311067)g/ml、(709189)g/ml 及(1180285)g/ml；AUC 分别为(50981365)gh/ml、(93851782)gh/ml及(163603169)gh/ml；t1/2 分别为(113062)h、 (075044)h 及(071041)h；t1/2 分别为 (1784597)h、 (1405260)h 及(1416172)h ；CLs 分别为(211063)L/h、(220040)L/h 及(190034)L/h ；Vc 分别为(2544617)L、(1948940)L 及(1803724)L
3、。结论 注射用盐酸米诺环素在人2体内的药动学符合二室模型特征。关键词： 注射用盐酸米诺环素； 药动学； 反相高效液相色谱法Pharmacokinetics of minocycline hydrochloride for injection in healthy humanABSTRACT Objective To study the pharmacokinetics of minocycline hydrochloride for injection in healthy human. Methods Twelve healthy volunteers were selected to re
4、ceive a single dose of minocycline 100, 200 and 300mg within 2h infusion in an open randomized threefold crossover study. There was a week washout in every project. Blood samples were taken for detecting serum concentration before administration and at 0, 025, 05, 075, 1, 15, 2, 4, 6, 8, 12, 24，48,
5、72h after completion of the intravenous infusion. The concentrations of minocycline in serum were determined by a highpressure liquid chromatography (HPLC) method. Results Pharmacokinetic profiles were conformed to an open twocompartment model analyzed by using 3P97 and the result of HPLC method wer
6、e as follows: the Cmax of 100, 200, 3300mg minocycline at the end of infusion were (311067)g/ml, (709189)g/ml and (1180285)g/ml; the AUCs were (50981365)gh/ml, (93851782)gh/ml and (163603169)gh/ml; the t1/2 were (113062) h, (075044)h and (071041)h; the t1/2 were (1784597)h, (1405260)h and (1416172)h
7、; the CLs were (211063)L/h, (220040)L/h and (190034)L/h; the Vc were (2544617)L, (1948940)L and (1803724)L, respectivelyKEY WORDS Minocycline hydrochloride for injection; Pharmacokinetics; Reverse phase high pressure liquid chromatography米诺环素(minocycline) 属半合成四环素类药物，又名二甲胺四环素，首先由美国氰胺公司立达大药厂研制并于 20 世纪
8、 70 年代上市，现已有胶囊、片剂、口服液等多种剂型。米诺环素是半合成长效四环素，广谱抗生素，以其对氨酰基转移 RNA 与 RNA 核糖体复合体上受体位点结合的阻滞作用干扰细菌蛋白质合成，对革兰阳性菌、革兰阴性菌、立克次体和衣原体等均有抗菌作用，对感染性疾病有较好治疗作用，安全性已被临床实践所证实1 。该药的注射剂国内尚未使用。本文首次采用高效液相色谱法测定血清中米诺环4素的浓度，研究注射用盐酸米诺环素在人体内的药动学过程，为临床合理用药提供依据。1 材料与方法1.1 药品与试剂注射用盐酸米诺环素 (批号 200310281)为西安利君制药有限公司提供，每支 100mg；盐酸米诺环素(对照品，
9、含量938%)和土霉素( 对照品，批号 130487200302，含量 882%)均为重庆市药品检验所提供。12mol/L 磷酸二氢钠和 20mol/L 的亚硫酸钠配成 pH65 的缓冲液；抗坏血酸(02% ，W/V)和半胱氨酸(01%，W/V)甲醇液配成稳定液；乙腈 盐酸(01mol/L)为991(V/V)配成溶解液。1.2 仪器和色谱条件 Waters 2690 Alliance 液相色谱仪，Waters 2487 双波长检测器， Millennium32 chromatography manager 数据采集处理系统，高速离心机(美国 Abbott 公司产品)，超纯水机(MilliQ p
10、lus，美国 Milliproe 公司产品)，KQ250B 型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司生产) 。EC250/4.6 Nucleosil C18 Gravity：5m 分析柱，柱温 30 ，检测波长350nm，AVFS0.002 ，流速 1ml/min，流动相为水乙腈 三氟乙酸=821801。进样 40l。51.3 受试对象及给药方案 12 名健康志愿者中无急性和慢性疾病及代谢异常病史，经体检证实血、尿常规、肝、肾功能、血压、心电图、血沉、HBsAg 等均正常，签署知情同意书，年龄(238354)岁，体重(488660)kg 。受试者在实验 2 周前未服用任何药物，试验期间禁烟酒。受
11、试者随机分成 A、B、C 三组，每组接受100、 200 和 300mg 三个剂量进行三个周期，每周期间隔 7 天；每个剂量均加入 5% GS 中静脉恒速滴注，2h 匀速静脉滴注完。1.4 血样采集给药前抽取空白血，给药后分别于0、025 、05、075、1、15、2 、4、6 、8、12、24、48 和 72h 于肘静脉取血 4ml，放入玻璃管中离心 3000r/min，提取血清，放入离心管中置于-40 冰箱保存，备测。1.5 标准液的配制精确称取盐酸米诺环素(对照品)实际含量 1mg加入 1ml 超纯水配成浓度为 1mg/ml 的溶液，置 4 冰箱备用；精确称取土霉素(对照品) 实际 1m
12、g 加入超纯水配成 1mg/ml 的溶液，取 50l 加入 950l003mol/L HCl 中，配成 50g/ml 的溶液。1.6 样品处理根据文献方法2，3(有少量修改)，取血清05ml 加入配制的土霉素(作为内标物)溶液 50l，用混悬器混合30s，加入缓冲液 1ml 混合 30s，再加入 6ml 乙酸乙酯混合1min，3000g 离心 5min，提取上清液放入加有 100l 稳定液的溶6液中，置氮气下吹干，在吹干了的管中加入 400l 溶解液中，混匀1min，转入离心管中 13000g 离心 3min，取上清液 40l 进样。1.7 标准曲线与检测限精密配制浓度为005、 01、02、
13、05、1、2 、4、8 和 16g/ml 系列盐酸米诺环素空白血清液，各溶液含 25g 内标物。按“样品处理 ”项下操作及色谱分离，计算米诺环素与内标峰高之比，以此为纵坐标，盐酸米诺环素浓度为横坐标，求出线性回归方程为：Y=2.472X-0.009732 r=0.9999(n=9) 最低检测限为 50g/ml。1.8 回收率取 01、1 和 8g/ml 的盐酸米诺环素血清各 3 份，经样品处理后，色谱分析得到其峰面积，与相应浓度的水溶液峰面积作比较，求得的绝对回收率为(7067793)%(n=9)。1.9 方法精密度于空白血浆中加入高、中、低(01、1、8g/ml)3 个浓度的盐酸米诺环素标准
14、液，按样品处理与测定项下操作，同日内处理测定计算日内 RSD(相对标准差)，连续 5d 测定计算日间RSD，结果见表 1。1.10 稳定性实验按含量测定条件配制 01、1 和 8g/ml 盐酸米诺环素，分别置室温和 4 冰箱，于 6、12 和 24h 取出，进样20l，每次进 3 针，计算主峰面积，结果稳定性好。71.11 统计学处理采用 3P97 专用软件处理数据。2 结果2.1 HPLC 图图 1 为米诺环素 HPLC 图。米诺环素的保留时间为3.2min，内标的保留时间为 6.7min。血清内源性物质不干扰样品的测定。2.2 药动学研究结果表 1 日内、日间精密度 (n=5)标准浓度 1
15、2名志愿者单次静脉注射 100、200 和 300mg 米诺环素后的平均血药浓度时间曲线见图 2。2.3 药动学参数实验数据经 3P97 程序处理求得药动学参数，计算过程按最佳拟合选择模型，实验数据符合二室模型，1/C 加权计算，结果见表 2。表 2 结果显示 100、200 和 300mg 的最高浓度分别为 3109、7099 和 11798g/ml；剂量比为 123，血药峰浓度比为 1228379。按用药剂量比例将最高血药浓度和 AUC折算以后作方差分析， 未见显著性差异(P005)，提示米诺环素给药剂量与血药浓度之间基本成线性关系，在试验剂量范围内也成线性药动学特征，且半衰期比较恒定，不
16、随剂量的增加而增加。表2 米诺环素人体内的药动学参数83 讨论米诺环素为一种广谱、高效、长效四环素族抗生素，对革兰阳性菌、革兰阴性菌、立克次体和衣原体均有抗菌活性，作用较其他四环素类抗生素强，许多耐四环素的溶血性链球菌、肠球菌和大肠埃希菌对米诺环素敏感4 ，对临床有较大的实用价值。本方法成熟、可靠、特异性高，色谱图清晰、杂峰很少，所测米诺环素100、 200 和 300mg 单次给药的主要药动学参数与文献4相似。目前国内尚无人体静脉制剂的相关报道。米诺环素的血药浓度与时间曲线下面积(AUC) 与剂量呈线性关系，随剂量的增加而增加；血清清除半衰期约为 15h，与文献相似5，6 ，不随剂量改变；表观分布容积(Vc)为 21L 左右，提示米诺环素在组织中分布广，与相关文献相同4 。米诺环素主要从胆汁排泄，从尿排泄低、慢，
