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1、1回流法与超声法对清脂颗粒有效成分提取比较研究【摘要】 目的: 比较不同方法对清脂颗粒中有效成分进行提取，筛选最佳条件。方法: 采用正交设计实验法，以高效液相色谱（HPLC）法测定有效成分含量，比较提取率。结果: 清脂颗粒中有效成分的最佳提取条件超声法为加 6 倍量的 80的乙醇，提取 3 次，每次提取 30min。结论 : 所确定的提取条件稳定可行。 【关键词】 提取 正交设计 清脂颗粒 有效成分清脂颗粒是由制首乌、决明子、山楂等药配伍而成，用于痰浊阻滞型高脂血症。本实验研究是根据处方中药材所含有效成分的性质，通过回流法和超声法进行提取，确定清脂颗粒中的乙醇提取条件。分别采用正交实验探讨乙醇
2、倍数、提取时间、提取次数和加醇含量作为考察因素，以 2，3 ，5，4-四羟基二苯乙烯-2-O-B-D-葡萄苷，大黄素，熊果酸含量为检测指标，对两个方法进行比较，报告如下。1 仪器与对照品1.1 主要仪器2LC-10AT 型液相色谱仪泵主机（日本岛津） ；SPD-10A 型紫外检测器（日本岛津） ；N-2000 色谱工作站（浙江大学智达公司） ；万分之一电子天平（美国 PE 公司） ；SB2200-T 型超声波清洗器（上海奥特赛恩斯仪器公司） 。1.2 对照品大黄素对照品，110756-200110 ； 2，3，5，4-四羟基二苯乙烯-2-O-B-D-葡萄糖苷，110844-200404；熊果酸
3、，110742-200527。均购于中国药品生物制品检定所。2 实验部分2.1 正交实验设计优选提取工艺条件，按每份试验 1 日用量称取制首乌、决明子、山楂等药材以 L9（34）正交表率选，每方法共试验 9 份。其因素水平安排见表 1，结果见表 2。表 1 清脂颗粒剂提取工艺因素水平表（略）32.2 有效成分指标含量测定 3，4 2.2.1 2，3，5，4-四羟基二苯乙烯-2-O-B-D- 葡萄苷色谱条件和系统适应性实验：以十八烷基键合硅胶为填充剂，以乙腈-水（13:87）为流动相，检测波长为 320nm。理论踏板数以葡萄苷峰计应不低于 2000。对照品溶液的制备：精密称取葡萄苷对照品适量，加
4、稀乙醇制成每 1ml 含 0.2mg 的溶液，即得。供试品的制备：取本品粉末约 0.5g，精密称定，具塞锥型瓶中，精密加入稀乙醇 10ml，称定重量，超声 30min，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失重量，滤过，取上清液，即得。测量法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10l，注入液相色谱仪，测定，即得。本品按照干燥品计算，含 2，3，5，4-四羟基二苯乙烯-2-O-B-D-葡萄苷（C2OH22O9）不得少于 0.70。2.2.2 大黄酚，大黄素4色谱条件和系统适应性实验：以十八烷基键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.1磷酸溶液（85：15）为流动相，检测波长 254nm。理论踏板数以大黄素,大黄
5、酚峰计应不低于 3000。对照品溶液的制备：精密称取大黄酚，大黄素对照品，加甲醇制成每 1ml 含 20g 的溶液，即得。供试品的制备：取本品粉末（过三号筛）约 1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇 10ml，称定重量，超声处理30min，放冷再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液各 10l，注入液相色谱仪，测定，即得。2.2.3 熊果酸5，6 色谱条件和系统适应性实验：以十八烷基键合硅胶为填充剂，以乙腈-水-磷酸溶液（85：14.95 ：0.05）为流动相，检测波长210nm。理论踏板数以熊果酸峰计应不低于 3000。5对照品
6、溶液的制备：精密称取熊果酸对照品，加甲醇制成每1ml 含 1mg 的溶液，即得。供试品的制备：取本品粉末（过三号筛）约 1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇 10ml，称定重量，超声处理30min，放冷再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液各 10l，注入液相色谱仪，测定，即得。2.3 方差分析根据表 2，3 的结果，将三指标含量之和作为综合含量进行方差分析。表 2 回流提取 2，3，5，4-四羟基二苯乙烯-2-O-B-D-葡萄苷、大黄素、熊果酸含量测定正交实验设计与结果 L9（34） （略）表 3 超声提取 2，3，5，4-四
7、羟基二苯乙烯-2-O-B-D-葡萄苷、大黄素、熊果酸含量测定正交实验设计与结果 L9（34） （略）62.4 工艺条件的确定从方差分析结果可知，清脂颗粒制首乌、决明子、山楂的醇提条件中，提取方法、乙醇倍数、提取时间均无显著差异（P0.05） ，提取次数和乙醇浓度具有显著性差异（P 提取次数 提取倍数提取方法提取时间，较适宜的因素为：乙醇浓度 2 提取次数 3 提取倍数 2 提取时间 1。3 讨论 中药有效成分的提取是指从原料药材中分离有效成分的操作，其直接关系到中药有效成分的得率和后续加工的难易程度。传统的提取方法主要有溶剂提取法、水蒸气蒸馏法两种。溶剂提取法又分为浸渍法、渗滤法、煎煮法、回流
8、提取法以及连续提取法等。这些传统的方法普遍存在着提取率不高、杂质消除率低、能耗高、生产周期长等缺点。近年来，一些新的技术，如超声场强化、超临界流体萃取、微波辅助提取技术、破碎提取法、空气爆破提取法、荷电提取法、旋流提取法等被广泛应用于中药有效成分的提取过程中。通过比较提取方法，回流法和超声法没有显著性差异，根据7节省能源、降低成本的前提，选择超声法为本颗粒提取方法。本实验结果表明，清脂颗粒中制首乌、决明子、山楂的最佳提取条件为6 倍量的 80乙醇，提取 3 次，每次 30min。用超声法提取中药有效成分，方便快捷，提取率比传统的回流方法高，但真正的工业化生产还有待深入探讨。【参考文献】1 谢伟
9、，谢绍辉，张爱红.安神补心颗粒醇提工艺研究.广东药学，2005，15 （3）：2830.2 许小军，田更河，冯洪江，等. 通脉活络康颗粒的制备及质量控制.中国医院药学杂志，2006 ，26（3）：336337.3 国家药典委员会编.中华人民共和国药典 (一部).2005 年版.北京: 化学工业出版社，2005 ，附录 6：31.4 龚尧峰，高尚，易志恒，等.清热解毒颗粒的质量标准研究.中国药房，2006，17(2)：12.5 雍德卿，主编 .新编医院制剂技术.第 2 版.北京：人民卫生出版社，2004，651.86 陈发奎，主编.常用中药有效成分含量测定 .第 1 版.北京:人民卫生出版社，1997，348350.
