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1、安徽理工大学医学院安徽理工大学医学院 S c h o o l o f M e d i c i n e 教案首页教案首页 第 次课 授课时间 年 月 日 教案完成时间： 年 月 日 课程名称 免疫学检验 年 级 专业、层次 医学检验（本科） 教 师 许礼发 专业技术 职 务 副教授 授课方式 （大、小） 大 学时 3 授课题目（章、节） 自身抗体检测及应用 基本教材或主要参考书 教学目的和要求： 了解：自身免疫、自身免疫性疾病、自身抗体的基本概念。 熟悉：抗核抗体的几种主要荧光模型，常规检测的自身抗体与临床疾病诊断的关系。 掌握：抗核抗体检测的常用方法的特点，总抗核抗体检测和抗 ENA抗体谱检测
2、的临床意义，抗中性粒细胞胞浆抗体检测及意义，自身抗体检测的临床应用原则。 大体内容与时间安排，教学方法： 第一节 自身抗体特性 0.5 学时 第二节 常见自身抗体检测 2 学时 第三节 自身抗体检测的临床应用 0.5 学时 教学重点：1.常见的自身抗体检测 2.自身抗体检测的临床应用及意义 教学难点： 不同疾病中各种自身抗体的检测及其意义 教研室审阅意见： （教研室主任签名） 年 月 日 1 （教案续页）（教案续页） 基 本 内 容 辅助手段和时间 分 配 备 注 第二十章第二十章 自身抗体检测及应用自身抗体检测及应用 自身免疫：指机体免疫系统受某些内因、外因或遗传等因素作用,产生针对自身正常
3、或变性的组织、器官、细胞、蛋白质或酶类等自身抗原发生的免疫应答反应，出现自身抗体或自身致敏淋巴细胞的现象。 自身免疫性疾病： 自身免疫导致组织器官损伤或功能障碍所致疾病。 自身抗体：自身免疫性疾病患者血循环中针对自身组织器官、细胞及细胞内成分的抗体，称为自身抗体。 第一节第一节 自身抗体的特性自身抗体的特性 1自身免疫性疾病都伴有特征性的自身抗体谱； 2自身抗体是某些自身免疫性疾病标记性抗体或特异性抗体； 3自身抗体与疾病的活动性有相关性； 4自身抗体参与了免疫病理性损伤。 第二节 常见自身抗体的检测 自身抗体的种类很多，临床检测中最常见的自身抗体有类风湿因子、抗核抗体、抗可提取性核抗原抗体谱
4、、抗各种组织细胞抗体和抗受体抗体等。一、类风湿因子 (一) 定义 类风湿因子(RF)是一种抗人或动物 IgG 分子 Fc 片段抗原决定簇 的抗体，是以变性 IgG 为靶抗原的自身抗体。 (二)分类 常见的 RF 有 IgM 型、IgG、IgA 型和 IgE 型，IgM 型 RF 被认为是 RF 的主要类型。 (三)检测方法 1胶乳颗粒凝集实验:为定性或以滴度半定量 2速率散射比浊法：自动化程度高，能定量分析，测定结果准确性和敏感性均高于胶乳凝集实验。 3. ELISA 法 ELISA 检测法可测定不同 Ig 类型的 RF。 (四)临床应用 2 （教案续页）（教案续页） 基 本 内 容 辅助手段
5、和时间 分 配 备 注 1.高滴度 RF 阳性支持对早期 RA 的诊断。 2.RA 患者 RF 的滴度与患者的临床表现呈正相关。 3.RF 还可在 SLE、 进行性全身性硬化症等自身免疫性疾病患者和部分老年人中RF 的阳性率可达 28.9 -50。 4.RF 对 RA 患者并不具有严格特异性，RF 阳性不能作为诊断 RA 的唯一标准。 5.在多种疾病中可有 RF 阳性， 滴度均较低(80IUml 并伴有严重关节功能障碍时，通常提示患者预后不良。 IgG 型 RF：在 RA 患者血清或滑膜液中 IgG 型 RF 的出现与患者的滑膜炎、血管炎和关节的症状密切相关，此 RF 常伴随高滴度的 IgM
6、型 RF 在同一 RA 患者血清或滑膜液中出现。 IgA 型 RF：10的 RA 患者血清或滑膜液中可检出 IgA 型 RF，IgA 型型 RF 是是RA 临床活动的一项指标，临床活动的一项指标，IgA 型 RF 阳性与患者关节炎症状的严重程度以及骨质破坏有显著的相关性。 IgE 型 RF：在关节液、胸水中高于同一病人的血清水平。 RF 阴性不能排除 RA 的诊断，有部分 RA 患者可一直呈血清 RF 阴性，这类患者关节滑膜炎轻微，很少发展为关节外的类风湿疾病。 二、抗核抗体 （一） 定义:抗核抗体(ANA)是一组将自身真核细胞的各种细胞核成分作为靶抗原的自身抗体的总称。ANA 的性质主要是
7、IgG，也有 IgM、IgA 和 IgD。 (二)分类: 按细胞内分子理化特性与抗原分布部位将 ANA 分为以下四大类： 抗 DNA 抗体、抗组蛋白抗体、抗非组蛋白抗体、抗核仁抗体。 在临床检测中 ANA 的命名通常按以下三种方式进行： 1 根据抗原的化学名称命名：如抗 dsDNA 、抗 RNP 、抗 DNP 抗体。 2.以第一位检出该抗体的患者命名：如抗 Sm 、抗 Ro 、抗 La 抗体。 3 （教案续页）（教案续页） 基 本 内 容 辅助手段和时间 分 配 备 注 以相关疾病命名：如抗 SSA 、抗 SSB 抗体。 (三)检测方法 间接免疫荧光法又称为荧光抗体法或荧光染色法： (四)常见
8、的 ANA 荧光图形及临床意义 1均质性(homogeneous，H) 细胞核均匀着染荧光，有些核仁部位不着色，分裂期细胞染色体可被染色出现荧光。 2斑点型(speckled，S) 细胞核内出现颗粒状荧光，分裂期细胞染色体无荧光显色 。 3核膜型(membranous，M) 又称周边型(rim)，荧光着色主要显示在细胞核的周边形成荧光环，或在均一的荧光背景上核周边荧光增强；分裂期细胞染色体区出现荧光着色 。 4核仁型(nuclear，N) 荧光着色主要在核仁区，分裂期细胞染色体无荧光着色。相关抗体是抗核仁特异的低分子量 RNA，抗 RNA 聚合酶1、抗 U3RNP、抗 PM、Scl。 （五)抗
9、双链 DNA 抗体的检测方法 检测抗dsDNA抗体最特异和最敏感的方法是用马疫锥虫或绿蝇短膜虫作为抗原基质进行间接免疫荧光检测。 三、抗 ENA 抗体谱 (一)定义 ENA(extractable nuclear antigens)是可提取核抗原的总称，ENA 抗原可用盐水或磷酸盐缓冲 液从细胞核中被提取。 ENA 属非组蛋白的核蛋白，为酸性蛋白抗原，是由许多小分子 RNA(约 100215 个核苷酸)与各自对应的特定蛋白质组成的核糖核蛋白颗粒， 该组成使其各自的抗原性得以增强，分子中不含 DNA。 ENA 抗原中主要包括 Sm、RNP、SSA、SSB、Jol、Scl-70 抗 原，这些抗原除
10、 有各自的抗原特异性外，尚可因与蛋白质组成后的分子量大小各不相同而在 电泳后被分成不同分子量的条带。 不同的自身免疫性疾病可产生不同的抗 ENA 抗体。根据 ENA 抗原分子量及抗原特性不同，可用不同的免疫方法对这些自 身抗体进行检测。不同特性的抗 ENA 抗体在各种自身免疫性疾病中的阳性率 有明显差异，有些有很高的特异性。对其进一步检测，在协助诊断和鉴别诊 断自身免疫性疾病方面具有重要的临床意义。 4 （教案续页）（教案续页） 基 本 内 容 辅助手段和时间 分 配 备 注 (二)抗 ENA 抗体的检测 1方法 早期常用的方法有双向免疫扩散(ID)、对流免疫电 (CIE)，但敏感度和特异性较
11、低；目前常用的方法有免疫印迹技术(IBT)和斑点酶免疫技术(dot-ELISA)。2原理 是从小牛或兔胸腺提取的 ENA 抗原，经 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)，按分子量大小分离成区带，经参照对应分子量标准物质确定每一抗原区带的分子量 。 然后将各抗原区带转印至硝酸纤维膜上制成抗原吸附载体膜。将待检血清加在已切成细条的硝酸纤维膜上， 待检血清中存在的抗 ENA 抗体分别与硝酸纤维膜上的相应抗原区带结合， 当再加入酶标记抗人 IgG 抗体后形成抗原-抗体-酶标记抗体复合物，再加入酶的底物，出现显色反 应，凡有抗 ENA抗体与膜上抗原结合的位置，均会因酶促反应而显色。 (三)抗 E
12、NA 抗体的临床意义 1抗 Sm 抗体：SLE 的标志性抗体，30%-40%SLE 患者抗 Sm 抗体 阳性，不与SLE 的活动性有关。抗 Sm 抗体 对早期、不典型的 SLE 或治疗的回顾性诊断有大的帮助。 2.抗核 RNP(nRNP)抗体：MCTD 的重要血清学依据，检出率高大 95%，活动期或缓解期高低度抗核 RNP 抗体可持续存在。其他自身免疫性 疾病也可有低滴度的抗核 RNP 抗体存在。 3.抗 SSARo 抗体和抗 SSBLa 抗体： 抗 SSARo 抗体和抗 SSBLa 抗体是 SS患者最常见自身抗体。 4抗 Jo1 抗体 ：抗体最常见于多发性肌炎(polymyositis，PM
13、)，故又称为PM-1 抗体。 5抗 Scl-70 抗体： 抗 Scl-70 抗体几乎仅在进行性系统性硬皮病(PSS)故该抗体是 PSS 的特征抗体。 四、抗中性粒细胞胞质抗体 (一)定义 抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA)是一组以人中性粒细胞胞质成分为靶抗原， 与临5 （教案续页）（教案续页） 基 本 内 容 辅助手段和时间 分 配 备 注 床多种小血管炎性疾病密切相关的自身抗体。抗体可表达为 IgG、IgM 或 IgA。ANCA 最早于 1982 年在坏死性肾小球肾炎患者血清中发现，现已证实该抗体是系统性血管炎的血清标志性抗体，对血管炎的诊断、分类及预后具有较为重要的意义。 (二)分型 主要的
14、ANCA有二型： 胞质型(cytoplasmic， cANCA)和核周型(perinuclear，pANCA)。 (三)ANCA 的检测方法 ANCA 的检测可分为总 ANCA 和特异性 ANCA 检测两种。总 ANCA 检测通常采用IIF ，特异性 ANCA 检测最常用的是 ELISA 法. (四)ANCA 的临床应用 1ANCA 被认为是原发性小血管炎的特异性血清标志物。 2ANCA 的检测可大大提高肾血管炎的早期诊断。 3ANCA 阳性相关的疾病还有继发性血管炎、非血管炎性疾病(如肺部炎性疾病)、炎性溃疡(IBD)、RA、SLE、自身免疫性肝脏疾病等。 五、抗心磷脂抗体 (一)定义 抗磷
15、脂抗体( APLA)是针对一组含有磷脂结构抗原物质的自身抗体。这些抗体主要包括抗心磷脂抗体( ACLA)，抗磷脂酸抗体(APAA)和抗磷脂酰丝氨酸抗体等。 二)抗心磷脂抗体的检测 最常用 ELISA 法进行检测。 (三)抗心磷脂抗体的临床应用 1.ACL 抗体阳性或持续升高与患者的动静脉血栓形成、血小板减少、反复自发性流产及神经系统损伤为特征的多系统受累的抗磷脂综合征( APS)密切相关。2.ACL 抗体在 SLE 患者中阳性检出率很高。 六、抗平滑肌抗体 (一)临床意义 6 （教案续页）（教案续页） 基 本 内 容 辅助手段和时间 分 配 备 注 抗平滑肌抗体( ASMA)是自身免疫性肝炎的
16、血清学标志抗体。该抗体的检测有助于自身免疫性肝炎、 原发性胆汁性肝硬化的诊断及与其他肝脏疾病的鉴别诊断。 (二)检测方法 ASMA 的检测主要采用间接免疫荧光分析。 七、抗角蛋白抗体 (一)临床意义 抗角蛋白抗体( AKA)又称为抗丝集蛋白抗体(AFA)或抗角质层抗体(ASCA)。AKA主要见于类风湿性关节炎患者，其阳性率为 30-55，特异性可达 9599。 在非类风湿性关节炎的自身免疫病患者,AKA 的阳性检出率极低。 AKA 与 RF在诊断 RA 时具有显著的相关性。由于 AKA 的出现常可先于疾病的临床表现，因此 AKA 对于早期诊断 RA 具有重要的临床意义。 （二）检测方法 AKA 的检测
