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1、 糖模块的总结 一、成绩与问题1、同学学习态度认真,预习较好,实验原则掌握透 彻,试验进展顺利,结果较好;部分同学试验出现失 误,但能多次重做到获的良好结果为止。 2、同学们准时到课室,没有出现缺课,逃学现象。 3、其他实验室规章制度遵守好,如损坏东西登记, 卫生做得特别好。 4、良好地完成从淀粉提取酸解总糖定量测定的 系统。二、与糖有关的实验的拓展糖生物学被称为继核酸蛋白质之后的第 二里程碑,其反馈的生物信息却远远大于核酸 和蛋白质,其重要性涉及到受体、供体、信号 传导、免疫、生物合成代谢等生物学重要问题 ,所以我们虽然学习了糖的一个系统性实验, 这个系统的取材是淀粉丰富的材料甘薯,是多 糖
2、,含葡萄糖,而生物学中的许多内容与生物 研究有关热点是糖蛋白,其种类繁多,组成复 杂,所以所学习的系统表现出简单化的局限性 。因此同学们会问:糖蛋白中的寡糖和糖链是 怎样分离纯化的?其设计原理是什么? v分离纯化程序图: (一)糖蛋白中寡糖和糖链的分离纯化v 高等动、植物,微生物,地衣海藻等材料v v 醇、醚回流脱脂 v v (冷水,热水,碱性水,酸性水)水抽提(含有许多杂物质,如无机盐,低分子和大分子有 机物)v v 分v 离 离子交换、凝胶过滤、透析(去掉小分子) v 蛋白酶,木质素酶等v 酶解(去掉原有大分子蛋白)v v 氯仿或三氟三氯乙酸振荡(得水相,去蛋白)v v v 分部沉淀法 盐
3、析 金属络合法 纤维素柱层析 凝胶层析 离子交换层析v 加30%醇或酮v v v 得沉淀物(大分子糖组分) 溶液相v 纯v 化 加50%醇或酮v v v 得沉淀物(中等分子组分糖) 溶液相v 加更高浓度的醇或酮v v 得沉淀物(小分子组分糖) 废液vv盐析:不同糖在不同盐浓度中具有不同溶解度 而逐步析出,如NaCl,KCl,(NH4)2SO4等 ,后者最佳。v 金属络合法:有些多糖能与铜、钙、钡等络合 而沉淀,得到纯化物应该是盐类。v纤维素柱层析:多糖混合物用4倍体积乙醇全部 沉淀于惰性多孔的纤维素柱上面,然后用由高 到低的不同浓度的乙醇洗脱,则不同多糖按小 分子组分到大分子组分的顺序被洗脱出
4、来。 上述各种纯化方法可以灵活、交替使用,以 求获得单组分的样品。(二)有了纯化的单组分的糖,我们可以研究 组分中单糖的组成,常用的方法有: 1、纸层析:展层剂常用的是: 正丁醇:乙酸:水 为4 :1:5,用上层。该展层剂可把葡萄糖,半乳糖,甘 露糖,木糖,L-岩藻糖,葡萄糖醛酸,氨基葡萄糖及 氨基半乳糖依迁移率的不同而分布在滤纸的不同的位 置,而同时用已知单糖点样,层析为参比,即可分析 出某组分的糖组成。(示范操作过程及结果分析,今 后我们会做这方面实验。) 2、薄层层析法(thin layer chromatography,TLC): 常用的为硅胶G(相当于滤纸);展层剂可采用上。 3、气
5、相层析(气相色谱)v 流动相惰性气体,如 CO2,N2等。v 固定相担体颗粒表面所包裹的一种高沸点有机 化合物。v塔板理论。4、HPLC:在液、固相中分配时,与固定相 亲和较弱的组分就快速通过层析柱而被记录 或收集,反之较后被记录。前两法可用显色法检测。 5、苯胺-二苯胺显色剂:80、10min , 醛糖 显蓝、蓝紫色或蓝绿色,酮糖呈棕色,检出 限量为10ug. 6、苯胺-邻苯二甲酸显色剂:105、5- 10min,戊糖显鲜红色,巳醛糖及糖醛酸为棕 色,在紫外光下有荧光,而一般戊糖则无荧光, 可用来区别戊糖及巳糖,灵敏度为1ug.氨基 葡萄糖呈浅棕斑点,紫外下呈黄绿色荧光.后 两法可用内标法定性(解释内标法)。 7、非还原糖可采用苯酚-硫酸法。