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1、 糖模块的总结 一、成绩与问题1、同学学习态度认真，预习较好，实验原则掌握透 彻，试验进展顺利，结果较好；部分同学试验出现失 误，但能多次重做到获的良好结果为止。 2、同学们准时到课室，没有出现缺课，逃学现象。 3、其他实验室规章制度遵守好，如损坏东西登记， 卫生做得特别好。 4、良好地完成从淀粉提取酸解总糖定量测定的 系统。二、与糖有关的实验的拓展糖生物学被称为继核酸蛋白质之后的第 二里程碑，其反馈的生物信息却远远大于核酸 和蛋白质，其重要性涉及到受体、供体、信号 传导、免疫、生物合成代谢等生物学重要问题 ，所以我们虽然学习了糖的一个系统性实验， 这个系统的取材是淀粉丰富的材料甘薯，是多 糖
2、，含葡萄糖，而生物学中的许多内容与生物 研究有关热点是糖蛋白，其种类繁多，组成复 杂，所以所学习的系统表现出简单化的局限性 。因此同学们会问：糖蛋白中的寡糖和糖链是 怎样分离纯化的？其设计原理是什么？ v分离纯化程序图： （一）糖蛋白中寡糖和糖链的分离纯化v 高等动、植物，微生物，地衣海藻等材料v v 醇、醚回流脱脂 v v （冷水，热水，碱性水，酸性水）水抽提（含有许多杂物质，如无机盐，低分子和大分子有 机物）v v 分v 离 离子交换、凝胶过滤、透析（去掉小分子） v 蛋白酶，木质素酶等v 酶解（去掉原有大分子蛋白）v v 氯仿或三氟三氯乙酸振荡（得水相，去蛋白）v v v 分部沉淀法 盐
3、析 金属络合法 纤维素柱层析 凝胶层析 离子交换层析v 加30%醇或酮v v v 得沉淀物（大分子糖组分） 溶液相v 纯v 化 加50%醇或酮v v v 得沉淀物（中等分子组分糖） 溶液相v 加更高浓度的醇或酮v v 得沉淀物（小分子组分糖） 废液vv盐析：不同糖在不同盐浓度中具有不同溶解度 而逐步析出，如NaCl，KCl，（NH4）2SO4等 ，后者最佳。v 金属络合法：有些多糖能与铜、钙、钡等络合 而沉淀，得到纯化物应该是盐类。v纤维素柱层析：多糖混合物用4倍体积乙醇全部 沉淀于惰性多孔的纤维素柱上面，然后用由高 到低的不同浓度的乙醇洗脱，则不同多糖按小 分子组分到大分子组分的顺序被洗脱出
4、来。 上述各种纯化方法可以灵活、交替使用，以 求获得单组分的样品。（二）有了纯化的单组分的糖，我们可以研究 组分中单糖的组成，常用的方法有： 1、纸层析：展层剂常用的是： 正丁醇：乙酸：水 为4 ：1：5，用上层。该展层剂可把葡萄糖，半乳糖，甘 露糖，木糖，L-岩藻糖，葡萄糖醛酸，氨基葡萄糖及 氨基半乳糖依迁移率的不同而分布在滤纸的不同的位 置，而同时用已知单糖点样，层析为参比，即可分析 出某组分的糖组成。（示范操作过程及结果分析，今 后我们会做这方面实验。） 2、薄层层析法（thin layer chromatography，TLC）： 常用的为硅胶G（相当于滤纸）；展层剂可采用上。 3、气
5、相层析（气相色谱）v 流动相惰性气体，如 CO2，N2等。v 固定相担体颗粒表面所包裹的一种高沸点有机 化合物。v塔板理论。4、HPLC：在液、固相中分配时，与固定相 亲和较弱的组分就快速通过层析柱而被记录 或收集，反之较后被记录。前两法可用显色法检测。 5、苯胺-二苯胺显色剂：80、10min , 醛糖 显蓝、蓝紫色或蓝绿色，酮糖呈棕色，检出 限量为10ug. 6、苯胺-邻苯二甲酸显色剂：105、5- 10min,戊糖显鲜红色,巳醛糖及糖醛酸为棕 色,在紫外光下有荧光,而一般戊糖则无荧光, 可用来区别戊糖及巳糖,灵敏度为1ug.氨基 葡萄糖呈浅棕斑点,紫外下呈黄绿色荧光.后 两法可用内标法定性(解释内标法)。 7、非还原糖可采用苯酚-硫酸法。
