《以mapk通路为靶向的肿瘤生物治疗》由会员分享，可在线阅读，更多相关《以mapk通路为靶向的肿瘤生物治疗（3页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、可能其增殖及分化能力有限,而适于发育学研究的ESC易 携带异源物质,培养条件要根据不同目的加以选择。除了满 足适合ESC的生长需要,最优化的培养系统还需要其明确 组成成分,以便于在多个实验室重复开展,需要明确培养基 质、 培养基成分、 重组蛋白因子的种类、 传代培养的密度与时 间;另外, ESC的来源、 胎胚获取方式、 甚至培养瓶的材质等, 这些因素都可能在一定程度对研究结果产生影响。参考文献1 EVANSM J, KAUFMAN M H.Establishment in culture of pluri2potential cells from mouse embryos J .Nature
2、,1981,292(5819) : 154 - 156.2 THOMSON J A,ITSKOW ITZ ELDOR J, SAPHI RO S S, et al .Embryonic stem cell lines derived from human blastocystsJ . Sci2ence, 1998, 282(5391) : 1145 - 1147.3 HALME D G, KESS LER D A. FDA regulation of stem - cell - basedtherapiesJ. New Engl J Med, 2006, 355(16): 1730 - 173
3、5.4 FAN L, CRODI AN J, COLLODI P. Culture of embryonic stem celllines from zebrafishJ . Methods CellBiol, 2004, 76: 151 - 160.5 B IGDEL IN, ANDERSSON M, STREHL R, et al . Adaptation ofhuman embryonic stem cells to feeder - free and matrix - free cul2ture conditions directly on plastic surfaces J .J
4、Biotechnol,2008, 133(1) : 146 - 153.6 HEISKANEN A, SATOMAA T, TIITI NEN S, et al . N - glycolyl2neuraminic acid xenoantigen contamination of human embryonicand mesenchymal stem cells is substantially reversible J .Stemcells, 2007, 25(1) : 197 - 202.7 KOCAOEMER A, KERN S, KLUETER H, et al . Human AB
5、-serum aswell as thrombin - activated platelet - rich - plas ma aresuitable alternatives to fetal calf serum for the expansion ofmesen2chymal stem cells from adipose tissueJ .Stem cells, 2007, 25(5) : 1270 - 1278.8 AM ITM, SHAR IKI C, MARGULETS V, et al .Feeder layer -and serum - free culture of hum
6、an embryonic stem cellsJ . BiolReprod, 2004, 70(3) : 837 - 845.9 POCHAMPALLY R R, S M ITH J R, YLOSTALO J, et al .Serumdeprivation of human marrow stromal cells ( hMSCs) selects for asubpopulation of early progenitor cellswith enhanced expression ofOCT - 4 and other embryonic genesJ . Blood, 2004, 1
7、03 (5) :1647 - 1652.10 ZHU W, CHEN J, CONG X, et al . Hypoxia and serum depriva2tion - induced apoptosis in mesenchymal stem cells J .Stemcells, 2006, 24(2) : 416 - 425.11 YI NGQ L, N ICHOLS J, CHAMBERS I, et al . BMP induction ofId proteins suppresses differentiation and sustains embryonic stemcell
8、 self - renewal in collaboration with STAT3 J .Cell, 2003,115(3) : 281 - 292.(收稿日期: 2009 - 05 - 17 编辑:王冰)3 国家自然科学基金资助项目(编号: 30971520) 现工作单位:南方医科大学第三附属医院消化科(广州510630) 通信作者。王新颖,主治医师,电话: 020 - 61642256, E - mail:sunwingwxy163. com;姜泊,教授,电话: 020 - 61641541, E - mail:drjiang163. com以MAPK通路为靶向的肿瘤生物治疗3王伟飞,
9、王新颖,姜泊南方医科大学南方医院消化科(广州510515)丝裂原激活蛋白激酶(mitogen - activated protein kinase,MAPK)是一组被不同的细胞外刺激(如生长因子、 细胞因子、 激素、 药物及细胞应激等)激活的丝氨酸-苏氨酸蛋白激 酶1。MAPK通路的基本组成是一种从酵母到人类都保守的MAPK激酶激酶(MAPKKK)、MAPK激酶(MAPKK)及MAPK三级激酶模式。在真核细胞中,已确定出细胞外信号 调节蛋白激酶(extracellular signal - regulated protein kinase,ERK)、p38、c - Jun氨基末端激酶( c -
10、 Jun N - terminal Ki2nase, JNK)和ERK5/BMK1 (big MAP kinase) 4个MAPK亚 族。MAPK通路与细胞的增殖和凋亡密切相关,对肿瘤的生 长增殖起至关重要的作用1。MAPK通路在大肠癌等多种恶性肿瘤中过度激活,以MAPK通路激酶为靶点来阻断增殖 信号的传递,为肿瘤的个体化治疗带来新的希望2。1 Raf - MEK - ERK通路Raf - MEK - ERK通路,即ERK1/2通路,是MAPK通路 中最早被发现的最经典的一个亚族。它在细胞的分裂、 存活、 迁移以及肿瘤侵袭能力方面有重要的调节作用,主要参与各种生长因子、 细胞因子、 丝裂原以及
11、激素受体活化后的信号转导,参与多种肿瘤细胞的生存和增殖1。ERK1/2通路的MAPKKK,即Raf激酶,是4075 kD的Ser/Thr蛋白激酶,有Raf - 1 (C - Raf)、A - Raf和B - Raf3个同型异构体,其分布具有组织特异性,A - Raf和B - Raf主要分布于泌尿生殖和神经组织,而Raf - 1则广泛表达于各种组织中3。Raf激酶特异性地磷酸化并激活MAPKK(MEK1/2)。MEK1和MEK2蛋白分子量分别为44 kD和45 kD,属于少有的双重特异性蛋白激酶( dualspecificity protein kinase) ,既为Tyr蛋白激酶,又为Ser/
12、Thr蛋白激酶。MEK1/2激活ERK1和ERK2MAPKs。ERK1/2一旦被活化,胞浆中的一部分转位至细胞核,然后,通过核转录因子的磷酸化作用来调节基因表达,细胞膜、 细胞核、 细胞骨架及内膜系统的多种功能都受其影响4。Raf激酶的上游激活分子是Ras小GTP酶,两者常以复合物形式存在, Ras催化胞浆中的Raf激酶重新定位于细胞 膜内侧, Raf激酶一旦与胞膜的脂质层结合即暴露出其功能区,进一步被EGFR或Src等分子激活5。EGFR在包括大肠癌在内的多种肿瘤中高表达,而Ras和B - Raf在结肠癌、胰腺癌等多种肿瘤中发生突变,最终导致ERK通路在肿瘤组织中持续激活。由此可见,以ERK
13、通路为靶点,阻断其激811广东医学 2010年1月 第31卷第1期 GuangdongM edical Journal Jan. 2010, Vol . 31, No. 1活,对于大肠癌等多种肿瘤具有治疗价值。2 Raf - MEK - ERK通路抑制剂目前, Raf - MEK - ERK通路抑制剂主要是针对Raf和MEK激酶,还没有关于ERK1和ERK2激酶抑制剂的研究。Raf激酶抑制剂应用最成功的应该是sorafenib (索拉非 尼,商品名Nexavar,又称BAY 43 - 9006)。sorafenib由拜耳(Bayer) /Onyx药业公司研制, 2005年12月经美国食品药品局
14、(FDA)批准作为治疗晚期肾癌的一线药物上市。sorafenib 是双芳香基脲复合物,与ATP竞争目标激酶的ATP结合位 点,最初被作为Raf - 1的抑制剂6,随后的分析研究发现它 还可以抑制野生型和突变型的B - Raf7。进一步研究发 现, sorafenib还可抑制VEGFR - 2、VEGFR - 3、PDGFR - b、Flt - 3、c - Kit及FGFR - 1等受体酪氨酸激酶的活性8。因此, sorafenib具有多激酶抑制作用,发挥多重的抗肿瘤作用, 既可阻断由ERK通路介导的肿瘤细胞的增殖作用,又可通 过抑制VEGFR而抑制新生血管的形成。临床试验表明sor2afeni
15、b对人体是安全的,治疗的耐受性良好,主要有皮疹、 疲 劳、 腹泻、 恶心等常见的不良反应9。目前, sorafenib用于大 肠癌的治疗已经进行了体外实验和 期临床试验,结果显示 用于治疗进展期和难治性大肠癌患者,效果良好10。而且,sorafenib可以恢复panitumumab和cetuximab对B - Raf基因 突变的大肠癌患者治疗的敏感性11。其他针对Raf激酶的 抑制剂有RAF265和PLX4032等,目前正进行 期临床试验。MEK1和MEK2在序列上同源,MEK的抑制剂通常同时 靶向这两个分子。最早发现的小分子抑制剂是U0126和PD98059,因为缺乏用于人体的药理学特征,它
16、们只能用于实 验室的学术研究。但是,基于它们的研究成果,抑制双特异 性MEK激 酶 成 为 癌 症 治 疗 的 引 人 注 意 的 靶 点12。PD32590113和ADZ624414是目前正在对结肠癌、 胰腺癌、 乳腺癌等多种实体瘤进行 期临床试验的MEK抑制剂。与 大多数激酶抑制剂不同,此类抑制剂不与ATP竞争目标激 酶的ATP结合位点,也不影响ERK激酶的结合位点,它们是 空间构象抑制剂,修饰改变MEK的三维结构,使得MEK不 能被上游激酶磷酸化,而且抑制磷酸基转移到ERK激酶的 活性位点。此类抑制剂的结合部位在其他激酶上没有同源 序列,因此,抑制作用的特异性强15。临床试验表明,受试 者对ADZ6244的耐受性良好,不良反应主要有皮疹、 恶心、 呕吐和四肢水肿等16。3 Ras GTP蛋白及其抑制剂Ras蛋白是小G蛋白家族中的重要成员,包括3个主要 类型:N - Ras、H
