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1、流式细胞术检测免疫功能流式细胞术检测免疫功能陆道培血液陆道培血液肿瘤中心肿瘤中心 检验科副主任、流式细胞室主任检验科副主任、流式细胞室主任 王卉王卉 13801359047，010-80841214 新浪微博：血液病诊断新浪微博：血液病诊断_王卉王卉陆道培血液陆道培血液肿瘤中心肿瘤中心PDF pdfFactory Pro 流式细胞室开展项目流式细胞室开展项目n 免疫分型免疫分型 n 免疫残留免疫残留 n CD55/CD59/FLAER检测检测 n 肿瘤细胞肿瘤细胞DNA倍体分析（多色）倍体分析（多色） n NK细胞颗粒酶穿孔素检测细胞颗粒酶穿孔素检测 n 免疫功能免疫功能 n CD34+干细
2、胞检测干细胞检测 n HLA-I,II类类 n MSC、DC、NK KIR检测等检测等 陆道培血液陆道培血液肿瘤中心肿瘤中心PDF pdfFactory Pro FCM：Flow Cytometry(- er): 流式细胞术流式细胞术(仪）仪） n一种对快速液流中的细胞进行分析（分选一种对快速液流中的细胞进行分析（分选 ）的高科技仪器，每秒钟可以处理成千上）的高科技仪器，每秒钟可以处理成千上 万细胞万细胞 n流式细胞术免疫分型：已经成为血液病诊流式细胞术免疫分型：已经成为血液病诊 断与监测的常见技术，是断与监测的常见技术，是MICM诊断中的重诊断中的重 要一项要一项。PDF pdfFactor
3、y Pro PDF pdfFactory Pro 荧光标记荧光标记CD3 FITCCD8 PET cellCD19-PerCPPDF pdfFactory Pro PDF pdfFactory Pro PDF pdfFactory Pro PDF pdfFactory Pro PDF pdfFactory Pro 二维点图二维点图FITC FLPE FL双阴性细双阴性细 胞群胞群FITC单阳性单阳性 细胞群细胞群PE单阳性单阳性 细胞群细胞群双阳性细胞群双阳性细胞群阴性阴性与与阳性阳性的的定义定义PDF pdfFactory Pro 标本种类各各种种活活细胞细胞标本标本 外周外周血、血、骨髓骨
4、髓、脐带脐带血血 组织活组织活检检或者或者穿穿刺标本刺标本 体液体液 培培养养细胞细胞PDF pdfFactory Pro 自动显微镜？自动显微镜？废液检测和计数检测和计数样本样本FSC大小大小SSC颗粒性颗粒性荧光染色荧光染色 ：膜：膜/浆标浆标 志物志物染色染色:细胞细胞 结构和化结构和化 学染色学染色激光激光光源光源流动室流动室载物台载物台流式流式显微镜显微镜流式流式激光激光PDF pdfFactory Pro CD8CD56CD3CD161/94CD16cCD3 看看细胞细胞看表面或者看表面或者胞胞浆特异性抗原浆特异性抗原KIRCD5PDF pdfFactory Pro Blast h
5、oleCD45/SSC设门识别各设门识别各类血细胞类血细胞PDF pdfFactory Pro 常见免疫细胞的常见免疫细胞的表表型型 与与正正常常值值PDF pdfFactory Pro 免疫细胞免疫细胞PDF pdfFactory Pro 免疫免疫学学，免疫，免疫缺陷缺陷，今日今日流式流式 360多种多种CD（检测（检测无数淋巴无数淋巴细胞细胞亚群亚群，功能，功能 相关标志相关标志，激激酶酶底物底物等）等） 白介白介素（素（33），），化学因子化学因子（48）及其受及其受体体 150多种多种明确描述特征明确描述特征的免疫的免疫缺陷缺陷病（病（状态状态 ） 多多参数参数流式，多种流式，多种荧光
6、荧光素素结合单抗结合单抗PDF pdfFactory Pro 人人CD分分组组（HLDA8）人人CD分分组组（HLDA8）分组CD（举例） T细胞CD2、CD3、CD4、CD5、CD8、CD28、CD152(CTLA4)、 CD154(CD40L)、CD272(BTLA)、CD278(ICOS)、CD294(CRTH2) B细胞CD19、CD20、CD21、 CD40、CD79a(Ig)、CD79b (Ig)、 CD80 (B7- 1)、CD86 (B7- 2) 、CD267(TACI)、CD268(BAFFR)、 CD269(BCMA)、CD307(IRTA2) 髓样细胞 CD14、CD35
7、(CR1)、CD64 (FcRI)、CD256(APRIL)、 CD257(BAFF)、CD312(EMR2) 血小板CD36、CD41(整合蛋白IIb)、CD42aCD42d、CD51(整合蛋白v) 、 CD61 (整合蛋白3) 、CD62P(P选凝素) NK细胞CD16 (FcRIII) 、CD56(NCAM- 1)、CD94、CD158(KIR)、 CD161(NKR- P1A)、CD314(NKG2D)、CD335(NKp46)、 CD336(NKp44)、CD337(NKp30) 非谱系CD30、CD32(FcRII)、CD45RA、CD45RO、CD46(MCP)、 CD55(DA
8、F)、CD59、CD252(OX40L)、 CD279(PD1)、 CD281CD284(TLR1- TLR4)、CD289(TLR9)、 CD305(LAIR- 1)、 CD306(LAIR- 2)、CD319(CRACC) PDF pdfFactory Pro 人人CD分分组组（HLDA8）人人CD分分组组（HLDA8）分组CD（举例） 黏附分子CD11a- CD11c、CD15、CD15s(sLx)、CD18 (整合蛋白2) 、 CD29 (整合蛋白1)、CD49aCD49f、CD54(ICAM- 1)、 CD62E(E整合蛋白)、CD62L (L整合蛋白)、CD324(E- cadhe
9、rin)、 CD325(N- cadherin)、CD326(EpCAM) 细胞因子/CD25(IL- 2R)、CD95(Fas)、CD116- CDw137、CD178(FasL)、 趋化因子受体CD183(CXCR3)、CD184(CXCR4)、CD195(CCR5)、 CD261CD264(TRAIL- R1TRAIL- R4) 内皮细胞CD105(TGF- RIII)、CD106(VCAM- 1)、CD140(PDGFR)、 CD144(VE钙黏蛋白)、CD299(DCSIGN- related)、 CD309(VEGFR2)、JAM1(CD321)、JAM2(CD322) 碳水化合物
10、结构 CD15u、CD60aCD60c、CD75、CDw327CDw329(siglec6、7、9) 树突状细胞CD85(ILT/LIR)、CD273(B7DC)、CD274CD276(B7H1- B7H3) 、 CD302(DCL1)、CD303(BDCA2)、CD304(BDCA4) 干细胞/祖细胞CD133、CD243 基质细胞CD292(BMPR1A)、CD293(BMPR1B)、 CD331CD334(FGFR1FGFR4)、CD339(Jagged- 1) 红细胞CD233CD242PDF pdfFactory Pro 正正常常人人的的淋巴淋巴细胞细胞亚群亚群5- 39.5%CD3
11、- CD56+CD16+NK9.8- 40.4CD8+杀伤性杀伤性T细胞细胞 78% 穿孔素穿孔素84%患患者者NK细胞细胞EBV感染感染，NK免疫免疫缺陷缺陷PDF pdfFactory Pro 2、KIR检测检测正正常常 对对照照患患者者EBV感染感染，NK免疫免疫缺陷缺陷PDF pdfFactory Pro 影响影响NK细胞的细胞的原原发发免疫免疫缺陷缺陷病病Clinical Immunology 118 (2006) 1 10PDF pdfFactory Pro 调节性调节性T细胞细胞PDF pdfFactory Pro Treg:一种一种特特殊殊的的 CD4+ T cell Treg
12、 是一种是一种特特殊殊的的 CD4+ T cell 大大多多数数CD4+ T cells 属属于于 Th1 或者或者 Th2 但但是是 5% 左右左右的的 CD4+T cells 为为 CD4+ CD25+ 调节性调节性 T 细胞细胞 作用作用：抑制潜在致抑制潜在致病的病的自身反应自身反应性性T细胞细胞过过 多多增生增生PDF pdfFactory Pro - Treg 细胞分细胞分化化和和功能功能 所需所需。Foxp3-介介导导 Treg 细胞细胞游移回游移回 淋巴结淋巴结CCR7-与与 CD80/CD86结合结合 -拮拮抗抗 CD28与与 CD80/86 结合结合CTLA-4-负向信号负向
13、信号 -生存需生存需要要GITR-大大多多数数 Treg 细胞细胞表表达达 ,IL-2受受体的体的 链链CD25+功能功能分分子标志子标志Treg细胞的分细胞的分子特点子特点TregCD4CD25 CTLA- 4GITRFoxp3PDF pdfFactory Pro CD4+CD25+Tregs 维持免疫耐受维持免疫耐受 抑制自身免疫抑制自身免疫 避免移植排斥避免移植排斥 干扰抗肿瘤免疫干扰抗肿瘤免疫 在免疫缺陷中可能起作在免疫缺陷中可能起作 用用4030201003H uptake (x10- 3)CD25CD25+CD25 + CD25+体内体内 占占CD4+T细胞的细胞的5- 10% 对对TCR刺激无反应刺激无反应 抑制抑制T细胞增殖细胞增殖100101102103104 FL1- Spl/PBS/CD4L090905.005R2100101102103104 FL4- Spl/PBSCD25L090905.005CD4CD25Foxp3FACSCD25CD25Foxp3MicroscopyCo- culture10%90%PDF pdfFactory Pro
