ISO标准食品和动物饲料的微生物学

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1、国际标准国际标准 ISOISO 65796579食品和动物饲料的微生物学食品和动物饲料的微生物学沙门氏菌检测的基准方法沙门氏菌检测的基准方法内容内容 1 范围 2 参考标准 3 定义 4 原理 4.1 概要 4.2 前增菌非选择性液体培养基 4.3 增菌选择性液体培养基 4.4 划平板和鉴定 4.5 确认 5 培养基、试剂和血清 5.1 概要 5.2 培养基和试剂 5.3 血清 6 设备和玻璃器皿 7 采样 8 检验样品的制备 9 程序 9.1 试验样品和原始悬浮液 9.2 非选择性前增菌 9.3 选择性增菌 9.4 划平板和鉴定 9.5 确认 10 结果表示 11 检验报告 12 质量保证附

2、录 A （标准化）程序图表 附录 B （标准化）培养基和试剂的成份及准备 附录 C （非标准化）实验室间试验结果 参考书目前言前言 ISO（国际标准化组织）是国际标准化团体的全世界同盟。通常由 ISO 技术 委员会来执行国际标准的制订工作（ISO 成员体） 。通常由 ISO 技术委员会来完 成国际标准的准备工作。在委员会中，若对建立的技术委员会有兴趣的话，每 个成员体有权作为代表。国际组织、政府或非政府组织，通过 ISO 联系，也可 以参加这项工作。在所有电工标准方面，ISO 与国际电工委员会（IEC）紧密合 作。 国际标准按照 ISO/IEC 指南第三章所列的规则草拟。 技术委员会的主要任务

3、是准备国际标准。被技术委员会采用的国际标准草 案 以投票方式在成员体内运行。至少要 75%成员体的投票赞成，才能作为一个国 际标准发布。 要引起注意的可能性是:本国际标准的一些要素可能是专利权主体。ISO 不 应承担鉴定部分或全部的这种专利权。 ISO6579 是由食品 ISO/TC34 技术委员会、微生物 SC9 分委员会所准备的。 第四版删除或更换了第三版（ISO6579：1993） ，并已作了技术性修订。 附录 A 和附录 B 形成了本国际标准的标准化部分。附录 C 仅为资料。介绍介绍因为有大量的不同种类的食品和饲料产品，本基准方法可能对某些产品并 不完全适用,而另一些产品可能得用到其他

4、方法。既然这样，如果为论证技术上 的原因而绝对需要时，那么就可使用这些产品指定的不同方法。不过，应尽可 能地使用本基准方法。 在下一次审查这个国际标准时，我们会考虑所有有用关于这些指标所涉及 的范围内以及个别产品不遵照这些指标的原因的信息。 (产品的)检测方法无法在短时间内达到统一,而且,对于某些产品,可能已经 有与本基准方法不符的国际标准/或国家标准存在。但是我们希望,在以后审查 这些标准时能进行修改,使其同本国际标准保持一致,以保证除了因技术原因确 实需要外不会发生背离本基准方法的情况.微生物学微生物学检测沙门氏菌方法的通用指南检测沙门氏菌方法的通用指南警告为了保护实验室工作人员的身体健康

5、，在适当装备的实验室、在熟练 的微生物学家的控制下检测沙门氏菌、特别是伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌， 这是非常关键的。另外最要关注的是所有培养物的处置。1 1 范围范围 本国际标准详述了沙门氏菌的基准方法，包括伤寒沙门氏菌和副伤寒沙门 氏菌。 在绪论中受讨论的局限性，本国际标准适用于 供人类消费或动物饲养所使用的产品。在食物生产和处理范围内的环境样品。 警告本方法并不包括所有的伤寒沙门氏菌和副伤寒沙门氏菌。2 2 标准的参考资料标准的参考资料通过本文中的参考目录，下列标准化文件包含组成本国际标规定的条款。对 后来更正或修订的陈旧参考资料，这些条款并不适用。然而，鼓励那些基于赞 同本国际标准的成

6、员，去调查下面提到的大多数新版标准化文件应用的可能性。 对更新的参考资料，最新版的标准化文件作了参考应用。ISO 和 IEC 的成员保 持对现行有效国际标准的注册。ISO6887-1，食品和动物饲料的微生物学微生物检验中测试样品、原始 悬浮液及十倍稀释液的制备第一章：原始悬浮液和十倍稀释液制备的通用 规则ISO 7218：1996，食品和动物饲料的微生物学微生物检验的通用规则ISO 8261，牛奶及奶制品微生物检验中测试样品、原始悬浮液及十倍 稀释液制备的通用指南3 3 术语和定义术语和定义 应用下列定义来表达本国际标准的用途。 3.1 沙门氏菌：在选择性培养基上形成典型或少典型的菌落，当依照

7、本国际标 准进行试验时，它们表现出特有的生化反应和血清学特征的微生物。 3.2 沙门氏菌检测：当依照本国际标准进行试验时，在一定重量或体积的产品 中，测定这些沙门氏菌的存在与否。4 4 原理原理 4.14.1 概要概要 沙门氏菌检测需四个连续阶段（也可以见附录 A） 注 沙门氏菌可能少量存在，并经常伴随着相当数量的其它肠杆菌属或其它菌 属。因此，选择性增菌是必需的；此外，为尽可能地检测到受伤沙门氏菌，经常需要进行前增菌。 4.2 前增菌非选择性液体培养基将试验部分接种于缓冲蛋白胨水，在 371培养 18h2h。 对于某些食品，则需利用其它的前增菌程序，见 9.1.2。 数量比较庞大时，在接种测

8、试样品前应将缓冲蛋白胨水加热到 371。 4.3 增菌选择性液体培养基将 4.2 得到的培养物接种到 RVS 肉汤和 MKTTn 肉汤。 RVS 肉汤在 41.51孵育 24h3h，MKTTn 肉汤在 371孵育 24h3h。 4.4 划平板和鉴别 从 4.3 中获得的培养物接种于两种选择性固体培养基上。 木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂（XLD 琼脂） 对 XLD 琼脂的任何其它补充性的选择性培养基，特别是适合于分离乳糖阳 性的沙门氏菌、伤寒沙门氏菌和副伤寒沙门氏菌的培养基，实验室可以选择使 用。 XLD 琼脂在 371孵育，在 24h3h 后检查结果。第二种选择性琼脂按照厂 家说明书进行孵育。 注

9、作为资料，亮绿琼脂、亚硫酸铋琼脂等，可用作第二种平板划线培养基。 4.5 确认 挑选可疑沙门氏菌的菌落进行次培养，再按 4.4 所描述的划线分离，通过 适当的生化试验和血清学试验加以证实。5 5 培养基、试剂和血清培养基、试剂和血清 5.1 概要 供常规实验室使用，见 ISO 7218。 5.2 培养基和试剂 注 由于培养基和试剂的数量庞大，为了表述清晰，我们认为将它们的组成和 配制在附录 B 中列出更适当。 5.2.1 非选择性前增菌液：缓冲蛋白胨水 见 B.1 5.2.2 第一种选择性增菌液：RVS 肉汤 见 B.2 5.2.3 第二种选择性增菌液：MKTTn 肉汤 见 B.3 5.2.4

10、 固体选择性平板培养基 5.2.4.1 第一种培养基：木糖赖氨酸去氧胆酸盐琼脂木糖赖氨酸去氧胆酸盐琼脂（XLD 琼脂） 见 B.4 5.2.4.2 第二种培养基 第二种培养基的选择是留给检测实验室自定。在它的准备使用时应准备按 厂家说明书准确执行。 5.2.5 营养琼脂 见 B.5 5.2.6 三糖/铁琼脂（TSI 琼脂） 见 B.65.2.7 尿素琼脂（Christensen） 见 B.7 5.2.8 L-赖氨酸脱羧酶培养基 见 B.8 5.2.9 -半乳糖苷酶检测试剂（或依照厂商说明书使用的比色盘比色盘）见 B.9 5.2.10 V-P 反应试剂 见 B.10 5.2.11 吲哚反应试剂

11、见 B.11 5.2.11.1 半固体营养琼脂 见 B.12 5.2.13 生理盐水溶液 见 B.13 5.3 血清 含有一种或多种 O 抗原的多价血清型可由商品化获得，也就是包含一个或 更多个 O 群抗血清（称单价或多价抗 O 血清） ，抗 Vi 血清和含有一个或多个 H 因子的抗血清（称单价或多价抗菌素 H 血清） 。 应确保所用的抗血清足以检测所有的沙门氏菌血清型。6 6 设备和玻璃器皿设备和玻璃器皿 如果操作规范，对于可重复使用的玻璃器皿，重复使用是可以接受的。 通常或特殊情况下微生物实验室设备（见 ISO 7218）如下： 6.1 干灭菌（烘箱）或湿灭菌（高压灭菌器）设备 见 ISO

12、 7218 6.2 干燥柜或烘箱，通过对流通风，能在 371和 551之间调节温度。6.3 培养箱，能调节温度至 351或 371。 6.4 水浴，能调节温度至 41.51，或孵育，能调节温度至 41.51。 6.5 水浴，能在 44-47间调节温度。 6.6 水浴，能调节温度至 371。 由于沙门氏菌的低传染性，推荐使用由于沙门氏菌的低传染性，推荐使用含有抗菌剂的水浴锅含有抗菌剂的水浴锅（6.4、6.5 和 6.6） 。6.7 灭菌环，直径约为 3mm 或 10l 的灭菌吸管。 6.8 pH 计，要求在 20-25时精确校准到0.1 单位。 6.9 适当容量的试管或烧瓶适当容量的试管或烧瓶

13、可以使用可以使用带无毒金属或塑料螺旋帽的试管或烧瓶带无毒金属或塑料螺旋帽的试管或烧瓶 6.10 分别以 0.5ml 和 0.1ml 间隔标示，容量为 10ml 和 1ml 的刻度吸管或自动 吸管。 6.11 小规格（直径为 90mm-100mm）和/或大规格（直径为 140mm）的皮氏培养 皿。7 7 制样制样 实验室收到具有代表性的，且在运输或贮存过程中没有损坏或改变的样品 是非常重要的。 制样不是本国际标准指定方法的一部分。可参见处理相关产品的特定国际 标准。如果没有特定国际标准，可推荐这一方面已被公认的相关部分。8 8 测试样品的制备测试样品的制备 根据处理相关产品的特定国际标准来制备测

14、试样品。如果没有特定国际标 准，可推荐这一方面已被公认的相关部分。9 9 程序程序（见图附录 A） 9.1 测试样品和原始悬浮液 9.1.1 概要 特定的国际标准处理相 关的产品，见 ISO 6887-1。 牛奶及奶制品见 ISO 8261。 准备原始悬浮液，通常用 5.2.1 和 4.2（缓冲蛋白胨水）指定的前增菌培 养基作为稀释液。 如果指定测试样品的重量超过 25g，则需用一定量的前增菌液做约 1：10 稀释。 为减少检测工作量，当检测指定食品中超过 25g 样品时，或有证据表明混 合物（将测试样品堆聚）不会影响到特殊食品的检测结果时，则样品可以混合 测定。例如，如果要测定 10 份 2

15、5g 的样品，则各取 10 份样品混合形成一个 250g 混合测试样品，加入 2250ml 前增菌肉汤。另外，还可从 10 份单独测试样 品（9.3.1）的前增菌液中取 0.1ml（10mlRVS 肉汤）和 1ml（10mlMKTTn 肉汤） 混合加入到 100ml 选择性增菌液中进行增菌培养。 9.1.2 某些产品原始悬浮液的特殊制备 注 下列特殊的制备仅涉及沙门氏菌的情况。在 ISO 6887-2、ISO 6887-3、ISO 6887-4 和 ISO 8261 中描述了适用于其它病原微生物检测的特殊制备。 9.2 非选择性前增菌液 将原始悬浮液（9.1）于 371孵育 18h2h。 9.

16、3 选择性增菌液 9.3.1 将 9.2 获得的培养物 0.1ml 接种到含有 10mlRVS 肉汤（5.2.2）的试管中； 另取 9.2 获得的培养液 1ml 接种到含有 10mlMKTTn 肉汤（5.2.3）试管中。 9.3.2 接种的 RVS 肉汤（9.3.1）于 41.51孵育 24h3h；接种的 MKTTn 肉汤于 371孵育 24h3h。引起注意的是不得超过最高允许的孵育温度 （42.5） 9.4 划线和鉴定 9.4.1 在孵育 24h2h 后，取 RVS 肉汤（9.3.2）培养物一环（6.7）接种于含 有第一种选择性平板培养基（XLD 平板，见 5.2.4.1）的大规格皮氏培养皿表面， 以便获得好的单个菌落。 若缺少大的培养皿，则可采用两个小的培养皿，用相同的接种环一个接着 一个地划平板。 用消毒过的接种环和皮