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1、Designed by XK Wang 实验01 植物组织中蛋白质含量的测定 （Folin酚试剂法） 一、原理Folin-酚试剂法（Lowry法）结合了双缩脲试剂 和酚试剂与蛋白质的反应。第一步反应：在碱性条 件下，蛋白质的肽键与铜结合生成紫红色的蛋白质- 铜络合物(双缩脲反应)；第二步反应：此络合物及蛋 白质中酪氨酸和苯丙氨酸等的残基使磷钼酸-磷钨酸 试剂（Folin试剂）还原，产生磷钼蓝和磷钨蓝的深 蓝色混合物质，其颜色深浅与蛋白质含量成正相关 ，在650nm下比色测定即可进行定量。1Designed by XK Wang 灵敏度高：比双缩脲法高100倍。适用范围：微量蛋白质（0.020.
2、50mg/mL）测定。干扰因素：酚类、柠檬酸和巯基类化合物等还原性物质 。2Designed by XK Wang 二、材料、设备与试剂（一 ）实验材料 ：绿豆芽下胚轴 （二）设备 ：天平；分光光度计；移液器等。（三）试剂1. Folin试剂甲试剂A：试剂B = 50：12. Folin试剂乙3. 标准蛋白质溶液： 250 ug/mL。3Designed by XK Wang 三、实验步骤（一）标准曲线的制作管号管号1 12 23 34 45 5样品样品 溶液溶液 标准蛋白溶标准蛋白溶 液液 / /mLmL0 00.20.20.40.40.60.60.80.81.01.0蒸馏水蒸馏水 / /m
3、LmL1.01.00.80.80.60.60.40.40.20.20 0试剂甲试剂甲5mL5mL，混匀后室温下放置，混匀后室温下放置510min510min 试剂乙试剂乙0.5mL0.5mL（逐一加入并立即混匀逐一加入并立即混匀），），20-20- 30min30min后，测定后，测定A A6506504Designed by XK Wang 标准曲线绘制：以标准蛋白含量（g）为横坐标，吸光度（A650）为纵坐标，在坐标纸上绘制出标准曲线。比色测定：1号管为空白，在650nm波长下用10mm的比色皿测定各管的吸光度。A A650650蛋白质蛋白质/ / gg0 05Designed by XK
4、 Wang 0.20.5g绿豆芽下胚轴于研钵中 加12mL水研磨成匀浆后定容至25mL 室温下放置1020min（间歇震荡） 过滤后得到待测溶液。取待测液1.0mL进行测定（参考制作标准曲线的步 骤）。（二）样品中蛋白质的提取及测定6Designed by XK Wang 样品中蛋白质的含量（mg/g）四、结果计算四、结果计算（X X：根据样品的吸光度所查得的标准曲线值（：根据样品的吸光度所查得的标准曲线值（ 蛋白质量蛋白质量gg）；）；V VT T：提取液总体积（：提取液总体积（mLmL）；）；WW：样品：样品 鲜质量（鲜质量（g g）；）；V Vs s：测定时取用的样品体积（：测定时取用的样品体积（mLmL）；）； N N：样品稀释倍数）：样品稀释倍数）7Designed by XK Wang 试剂乙在碱性环境中不稳定。酚类、柠檬酸、还原性糖类等物质有干扰。注意事项：8
