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1、载脂蛋白E在神经细胞中表达 对细胞功能的影响 蒋 莉 南京医科大学动脉粥样硬化研究中心 阿尔茨海默病阿尔茨海默病(Alzheimers disease(Alzheimers disease， AD)AD)v进行性的大脑退行性疾病v以记忆和其他认知功能衰退直至发展 为严重痴呆为特征，也是老年期痴呆 中最常见的类型之一。 研究背景ADAD主要病理学特征主要病理学特征v老年斑 v神经原纤维缠结 v神经元丢失 研究背景AD 发 病 率(%)研究背景E2 E3 E4112 Cys Cys Arg158 Cys Arg ArgvapoE多态性v不同表型的apoE 在有-VLDL存在时，对神经细胞 突起的生
2、长具有不同效应：apoE3可促进神经生长而 apoE4抑制神经生长。vapoE4可影响细胞溶酶体膜的稳定性，从而加剧淀粉 样蛋白A引起的溶酶体破坏，从而导致细胞的死亡。研究背景v细胞内表达的apoE尤其是截断的apoE4可与tau结合 而引起神经原纤维缠结的形成 。v表达人apoE4的转基因小鼠也出现了tau蛋白过磷酸 化，神经原纤维缠结增加的现象 。研究背景v脑内的apoE主要由星型胶质细胞、小胶质细胞合成和分泌，但近年来的研究显示其他类型的细胞如神 经细胞、少突胶质细胞等也有apoE mRNA的表达， 并且在脑损伤、退行性变和AD病人脑内apoE的表达 明显增强。 研究背景设想：v能否使a
3、poE4在神经细胞中过表达，以建立神经保 护药物的筛选模型。同时，探讨apoE4在AD发病中的相关机制。研究方法筛选筛选转染转染SK-N-SHSK-N-SH定位观察定位观察表达鉴定表达鉴定功能分析功能分析构建真核表达质粒构建真核表达质粒重组pEGFP-apoE质粒酶切电泳图apoE3Query: 321 cgcaggcccggctgggcgcggacatggaggacgtgtgcggccgcctggtgcagtaccgcg 380| | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | |
4、 | | | | | | | | | | | | | | | | | |Sbjct: 398 cgcaggcccggctgggcgcggacatggaggacgtgtgcggccgcctggtgcagtaccgcg 457Query: 381 gcgaggtgcaggccatgctcggccagagcaccgaggagctgcgggtgcgcctcgcctccc 440| | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | |
5、| | |Sbjct: 458 gcgaggtgcaggccatgctcggccagagcaccgaggagctgcgggtgcgcctcgcctccc 517Query: 441 acctgcgcaagctgcgtaagcggctcctccgcgatgccgatgacctgcagaagcgcctgg 500| | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | |Sbjct: 518 acctgcgcaagctgcgt
6、aagcggctcctccgcgatgccgatgacctgcagaagcgcctgg 577 apoE4Query: 332 cgcaggcccggctgggcgcggacatggaggacgtgcgcggccgcctggtgcagtaccgcg 391| | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | |Sbjct: 398 cgcaggcccggctgggcgcggacatggaggacgtgtgcggccgc
7、ctggtgcagtaccgcg 457Query: 392 gcgaggtgcaggccatgctcggccagagcaccgaggagctgcgggtgcgcctcgcctccc 451| | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | |Sbjct: 458 gcgaggtgcaggccatgctcggccagagcaccgaggagctgcgggtgcgcctcgcctccc 517Query: 452 ac
8、ctgcgcaagctgcgtaagcggctcctccgcgatgccgatgacctgcagaagcgcctgg 511| | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | |Sbjct: 518 acctgcgcaagctgcgtaagcggctcctccgcgatgccgatgacctgcagaagcgcctgg 577 GFP GFP-apoE3 GFP-apoE4共聚焦显微镜观察GFP在SK-N-SH中的表
9、达Western blot检测 apoE在SK-N-SH中的表达GFP apoE3 apoE462KD34KDGFPapoE3apoE4apoE表达对SK-N-SH细胞形态的影响apoE在SK-N-SH内表达对细胞LDH释放的影响*p0.01vs GFP- transfected cellsapoE 对 SK-N-SH细胞增殖的影响. *p0.01vs GFP- transfected cells空载体对照组apoE3转染组apoE4转染组7.841.98.410.67.030.722.971.230.211.1*18.410.4*77.031.269.791.1*81.590.4*15.131.620.580.8*11.381.2组 别 G0G1 S G2M 增殖指数 apoE在SK-N-SH中的稳定表达对细胞周期和增殖指数的影响 ( % , xs)注:与空载体对照组比较, * P 0.05 ; 与apoE3转染组比较, P 0.01
