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1、浙江大学硕士学位论文细胞DNA倍体及周期分析在良恶性胸液鉴别中的应用价值姓名：赵琼申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：周建英2003.3.1潢泼大学磋士辑究生论文细胞D N A 倍体及周期分析浙汉大学蹶学院2 0 0 0 级研究生导师内科擎 赵琼周建英中文摘要目的探讨，啦用流式细胞仪进行细胞D N A 倍体及周期分析在良恶性胸液鉴别巾的临床价值。方法应用流式缨缎仪B e c k m a n C o n l t e r 黼e S N 捡测1 3 镄恶性籍承患者稻1 7 例良性嬲水患者胸滚中缨胞务期D N A 含量分布情况及异倍体峰。结果异倍体在良恶性胸液中出现率分别为1 2 ( 2 7 )
2、和6 2 ( 8 1 3 ) ，嚣缓院较骞燕著牲差雾妒哟O 魏教翻用纲胞D N A 异倍体诊断恶性壤渡的敏感性为6 2 ，特异性为8 8 ，阕时谨估细胞D N A 指数及各周期分析提示良恶性胸水组D N A 指数分别为1 0 7 士O 0 9 和1 1 8 圭O 1 8 ，G 2 M 所占比例分别1 2 4 士1 6 3 和3 9 0 土4 1 3 ，两缝闽均有鬟著差弊( p 固0 5 ) 。续论缨脆D N A 镶嚣及髑期分析是鉴别良恶性骢液憋一_ 秸方便抉捷的新方法。浙眭大学硪纛研究垒论文T h ec l i n i c a lv a l u e so fD N Ae u p t o i d
3、a n dc e l lc y c l ea n a l y s i sf o rd i f f e r e n t i a ld i a g n o s i so fb e n i g na n dm a l i g n a n tp l e u r a lf l u i d sC o l l e g eo fM e d i c i n e ，Z h e j i a n gU n i v e r s i t yI n t e r n a lM e d i c i n eP o s t g r a d u a t eZ h a oQ i o n gA d v i s o rZ h o uJ i
4、 a n y i n gA b s t r a c tO b j e c t i v e aT oi n v e s t i g a t et h ec l i n i c a lv a l u e so fD N Ae u p l o i ta n dc e l lc y c l ea n a l y s i si nt h ed i f f e r e n t i a ld i a g n o s i so fb e n i g na n dm a l i g n e n tp l e u r a lf l u i d sb yF l o wC y t o m e t r y ( F C
5、M ) M e t h o d sB yF C M ，t h eD N Ai n d e x , c e l lc y c l ed i s t r i b u t i o na n dD N Aa n e u p l o i d yi nm a l i g f m n t ( 1 3c a s e s ) a n db e n i g n ( 1 7c a s e s )p l e u r a lf l u i d sv 黼s t u d i e d 。R e s u l t sD N Aa n e u p l o i d yi nb e n i g na n dm a l i g n a
6、n tp l e u r a lf l u i d s7w e r e1 2 ( 2 7 ) a n d6 2 ( 8 1 3 ) ，r e s p e c t i v e l y ( P O 0 5 ) T h es e n s i t i v i t y 撇s6 2 ，a n dt h es p e c i f i c i t yW a S8 8 i nd i a g n o s i sm a l i g n a n tp l e u r a lf l u i d s D N Ai n d e xi nb e n i g na n dm a l i g n a n tp l e u r a
7、 lf l u i d sW e l e1 0 7 - t - 0 0 9a n d1 1 8 士O 1 8 ；G 2 Mp h a s ef r a c t i o nw e r e1 2 4 t 6 3a n d3 。9 0 4 。1 3 ，r e s p e c t i v e l y C o n c l u s i o n sD N Ae u p l o i da n dc e l lc y c l ea n a l y s i sh a v ei m p o r t a n tv a l u e si nd i s t i n g u i s h i n gb e n i g np
8、l e u r a lf l u i d sf r o mm a l i g n a n tp l e u r a lf l u i d s 2浙江大学硕士研究生论文细胞D R A 倍体及周期分析在良恶性胸液鉴别中的应用价值浙江大学医学院2 0 0 0 级研究生导师内科学 赵琼周建荚前言胸水的脱落细胞学检查是鉴别良恶性胸液的重要方法，但恶性胸腔积液细胞学诊断的阳性率仅为6 0 左右【1 1 。近年来，应用流式细胞仪分析胸水细胞D N A 的含量来识别异常D N A 群体的存在，评估D N A 指数以及了解细胞各个时相的分布情况，从而提蓐肿瘤细胞的存在，作为良恶性胸液鉴别的辅助诊断方法，有较好的
9、临床应用前景。我们对3 0 例胸腔积液患者进行胸液细胞D N A 倍体及周期分析，探讨其在良恶性胸液鉴别中的应用价值。对象和方法一、对象选择2 0 0 2 年1 月至2 0 0 2 年9 日期间在我院住院的3 0 例胸腔积液的患者进行研究。每位患者入院后均进行胸片、胸部C T 及胸液检查，部分患者进行纤维支气管镜、肺穿刺活检，胸腔镜胸膜活检或开脾潇检，明确诊断。将3 0 例胸水患者分为良性胸液组和恶性脾波组( 患者临床资料见表1 ) ，其中恶性胸液组1 3 例( 粥9 例，女4铡，平均年龄5 8 1 3 岁) ，良性胸液组1 7 ( 勇l O 例，女7 例，平均年龄4 9 2 l 岁) ，瑟性
10、蕤滚组均在瓣窳枣找到癌缨貔。二、实验方法1 、仪器：流式细胞仪B e c k m a n C o u l t e r E P I C S X L ( 美国)2 、试剂：c y c l eT E S Tp l u sD N AK i t3 、方法：接取臆承1 0 m l ( 翳素抗凝) ，离心沉淀，蠲淋巴缨藤分离液分离单个核细胞( 2 5 0 0 转绘3 0 分钟) ，用P B S 液洗涤2 遍，将沉淀的细胞用P B S 液调熬细胞浓度至1x1 0 6 m l ，加D N A 试剂盒中的A 液2 5 0 I ll ，室温孵育l O 分钟后，加入B 液2 0 0 l ll 孵育l O 分钟，籍船入
11、冷翡e 滚2 0 0 l al ，4 涟毙释育1 0 分钟，土杭捡鞭l 。4 、分析：细胞D N A 倍体及周期结果用M c y e l e 软传分析。5 、统计学处理：用S P S S 软件包进行统计分析( t 检验)结桑透过渡式细腿仪分析细骢D N A 含量发现异倍体在恶性髓液中出现率离缸( 8 1 3 ) ，良性胸液中出现率较低j 2 0 o ( 2 1 7 ) ，鼹组间存在显著差异( p I 。0 ，提示结核性黪腔积渡，两P SA D A 2 0 u m l 的诊断秀恶性胸腔积液。据覆道，恶整胸腔积液意者盘清C A S 0 舞高者蠢5 8 ，稳腔羧滚拜遗者达7 8 1 1 嘲。C A
12、l2 5 、C A l 9 9 对恶髅瓣麓积滚豹诊鼗有定参考徐值。2 。2 4 细胞角蛋白1 9 片段( C Y F R A 2 1 1 ) ：C Y F R A 2 1 。1 对非小细胞肺癌( N S C L C ) 诊断有较高敏感性和特异性。在恶性脾水中1 3浙江大学硕士研究生论文C Y F R A 2 1 1 亦有增高( 均值在7 0 9 0 m g m 1 ) ，与血清浓度比值可达1 0 2 0 以上。其他常见指标如铁蛋白，透明质酸，脂质过氧化物、组织多肽抗原等。2 3 免疫学检查2 3 1 免疫细胞：在结核性和恶性胸腔积液中，T 细胞比例增高，而结核性的又明显高于恶性胸腔积液。研究表
13、明，结核性胸腔积液中，N K 细胞活性与外周血中相似，而癌性胸腔积液时，胸腔积液中N K 细胞活性低于外周血。故结核性胸腔积液中N K 细胞活性大大高于癌性胸腔积液【2 0 】。2 3 2 细胞因子测定：胸液中S I C A M - 1 、I L - 8 和P M N 的C D l l 6 C D l 8 可作为鉴别结核性和肿瘤性胸腔积液的诊断指标。文献报导，结核性胸液中I L 8 含量高于恶性胸液，而S I C A M - 1 则低于恶性胸液。结核性和恶性胸液患者P M N 上C D l l 6 C D l 8 表达显著高于对照组，而结核性比恶性胸液明显增耐2 ，而T N F 无显著差异。2
14、 4 活体组织检查对于不明原因的胸腔积液，如脱落细胞及临床不能明确诊断，应考虑做一些有创性检查，包括胸膜针吸活检，胸腔镜检和开胸胸膜活检【2 2 1 ，以明确诊断。3 鉴别诊断肿瘤性胸腔积液约占胸腔积液的4 0 - 5 0 2 ”，1 4浙江大学硬士研究生论文以肺癌向胸膜转移多见，其次为乳腺癌、淋巴瘤、胸膜间皮瘤引起，少数可由腹腔肿瘤，前列腺癌及骨骼系统恶性肿瘤转移而成。恶性肿瘤转移到胸膜时，使胸膜表面通透性增加产生渗出性胸水，胸膜淋巴管引流受阻或纵隔淋巴结肿大阻塞淋巴回流，可产生漏出液。恶性胸水P H 常 7 4 ，胸液和血清葡萄糖比值癌性多为1 1 左右，而结核性常为O 6 【2 4 1
15、。恶性胸水中L D H 增高，当胸液与血清L D H 比值 2 的，应考虑恶性可能。胸液中C E A 2 0 n g L ，胸液与血清C E A 比值 1 0 时，应考虑恶性胸水存在，此对腺癌引起的胸水更有价值f 2 5 l 。肺癌恶性胸液中癌细胞合成前列腺素E ( P G E ) 增多，故胸水P G E上升。胸水脱落细胞检查及胸膜活检阳性者可确诊。4 总结随着医学的发展，许多先进技术与设备应用于临床，恶性胸腔积液的诊断率亦明显提高。脱落细胞学检查及活体组织检查是诊断明确的主要手段。近年来，流式细胞仪、D N A 探针原位杂交技术、P C R 、基因检测技术，大大提高了诊断率，在降低检测成本的
16、前提下可广泛应用于临床。浙江大学硬士研究生论文参考文献1 罗慰慈、1 9 9 8 ，现代呼吸病学。北京：人民军医出版社，9 4 0 9 6 1 。2 M i l l e r k s ，H a r l e yR A ，S a h nS A ，P l e u r a le f f u s i o n sa s s o c i a t e dw i t he t h c h l o r v y n o ll u n gi n j u r yr e s u l tf r o mv i s c e r a lp l e u r a ll e a k ，A mR e vR e s p i rD i s ，1 9 9 1 ，1 4 0 ：7 6 4 7 7 03 张敦华，1 9 9 7 ，实用胸膜痰病学，第一版，上海：上海医科大学出版社，1 1 6 1 3 14 朱德明，1 9 9 6 ，现代临床
