蛋白裂解液（RIPA）

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1、 ShineGene Molecular Biotech,Inc. 上海闪晶分子生物科技有限公司 Add: Floor 2 ,Building A,328# Wuhe Road, Shanghai 200233 China Tel: +86-21-54460832 Web: Fax:+86-21-54460831 E-mail: 蛋白裂解液(RIPA) 蛋白裂解液(RIPA) 使用说明书使用说明书 本品是一种传统的细胞组织快速裂解液。使用本品裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP 等。主要成分为 50mM Tris (pH7.4)，150mM NaCl，1% NP-40， 0

2、.1% SDS。 使用本品裂解得到的蛋白样品，可以用 BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用 Bradford 法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。 保存条件：保存条件：4 制备细胞裂解产物：制备细胞裂解产物： 1、800g 4离心 5 分钟，收集细胞，估计细胞离心后的体积(PCV,106 cells 20ul PCV, 107 cells 100 ul PCV) 2、每 50100ul PCV 加入 5 倍体积的蛋白裂解液（250500ul）,冰浴中放置 10 分钟，且每隔 5分钟在漩涡混合仪震荡 30 秒； 3、12000g 4离心 10 分钟，将上清

3、转移到新的离心管中，即得细胞总蛋白产物； 4、假如所得蛋白产物较为粘稠，可 95加热 5 分钟，然后迅速冰浴 5 分钟，12000g 4离心10 分钟，将上清转移到新的离心管中，即得细胞总蛋白产物。 制备组织裂解产物：制备组织裂解产物： 1、取 50-100mg 组织在冰上剪成碎片，用预冷的 PBS 洗涤 2 次，离心弃去 PBS； 2、加入 0.5-1ml 预冷的蛋白裂解液； 3、4用玻璃匀浆器匀浆 20-40 次，直到 95%的细胞被破碎，然后在冰浴中放置 10 分钟，且每隔 5 分钟在漩涡混合仪震荡 30 秒； 4、12000g 4离心 10 分钟，将上清转移到新的离心管中，即得组织总蛋

4、白产物； 5、假如所得蛋白产物较为粘稠，可 95加热 5 分钟，然后迅速冰浴 5 分钟，12000g 4离心10 分钟，将上清转移到新的离心管中，即得组织总蛋白产物。 6、20%的甘油保存于-70或-20。 注意事项：注意事项： 1、在转移上清液时不要吸入底部的沉淀物； ShineGene Molecular Biotech,Inc. 上海闪晶分子生物科技有限公司 Add: Floor 2 ,Building A,328# Wuhe Road, Shanghai 200233 China Tel: +86-21-54460832 Web: Fax:+86-21-54460831 E-mail

5、: 2、在做免疫沉淀或免疫共沉淀时，最好在实验前进行蛋白的提取，以避免某些不稳定蛋白的降解； 3、本品中未加入蛋白酶抑制剂，需自备需自备 PMSF。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入 PMSF，使 PMSF 的最终浓度为 1mM。 4、裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或 4进行。 Shanghai ShineGene Molecular Bio-tech Co.,Ltd. Add：Floor 2,Building A,328#, Wuhe Road,Shanghai,201109,China Tel：+86-21-54460832 Fax:+86-21-54460831 E-mail: WebSite：