《消毒产品中糖皮质激素(glucocorticoid)测定-》由会员分享，可在线阅读，更多相关《消毒产品中糖皮质激素(glucocorticoid)测定-（9页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、- 1 -附件附件 1 1消毒产品中消毒产品中糖皮质激素糖皮质激素（glucocorticoidglucocorticoid）测定）测定- -液相色谱液相色谱- -串联质谱法串联质谱法MethodMethod forfor determinationdetermination ofof glucocorticoidglucocorticoidinin disinfestiondisinfestion product-product-LC-MS-MSLC-MS-MS methodmethod1 范围范围本方法规定了膏霜类消毒产品中六种糖皮质激素残留量液相色谱-串联质谱测定方法。本方法适用于膏霜类
2、消毒产品中六种糖皮质激素残留量的测定。 取样量为 0.2g 时，本方法对六种糖皮质激素的检出限见表 1。表 1 LC/MS/MS 法测定的消毒产品中糖皮质激素的检出限、保留时间和特征离子中文名称英文名称检出限 （mg/kg）保留时间 （min）特征离子(m/z)醋酸氢化可的松Hydrocortisone acetate 0.056.75405.2/327.3/309.3 醋酸氟轻松Fluocinonide0.0214.90495.2/475.3/337.3 醋酸可的松Cortisone acetate0.047.75403.2/343.2/163.2 醋酸地塞米松Dexamethasone a
3、cetate0.019.46435.3/415.3/397.2 醋酸泼尼松Prednisone acetate0.057.26401.2/383.2/341.2 地塞米松Dexamethasone0.0044.71393.2/373.3/355.12 规范性引用文件规范性引用文件3 原理原理试样中糖皮质激素用甲醇提取，提取液经 0.45m 滤膜过滤，用 C18柱分离后，用液相色谱-串联质谱仪测定，正离子扫描，离子对定性，峰面积定量。4 试剂和材料试剂和材料- 2 -除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为不含有机物的纯水，纯水中干扰物的浓度需低于方法中待测物的检出限。4.1 甲醇：农药残留级。4
4、.2 乙腈：农药残留级。4.3 标准品：标准品醋酸氢化可的松、醋酸氟轻松、醋酸可的松、醋酸地塞米松、醋酸泼尼松、地塞米松均由中国药品生物制品检定所提供，纯度99%。4.4 标准溶液：分别准确称取醋酸氢化可的松、醋酸氟轻松、醋酸可的松、醋酸地塞米松、醋酸泼尼松、地塞米松适量，用甲醇（4.1）配制成 2.00mg/mL 标准贮备溶液。准确量取上述标准贮备溶液适量，用甲醇稀释配制成浓度为 20.0g/mL 的混合标准中间溶液，将标准中间溶液转移到安瓿瓶中于 4C 保存。临用前，再根据需要以甲醇配制成不同浓度的标准使用溶液。4.5 0.45m 滤膜。5 仪器仪器5.1 液相色谱- -串联质谱联用仪：H
5、P1100 高效液相色谱仪(Agilent) - API 4000 质谱仪(Applied Biosystems) ， 电喷雾离子化源(ESIMS， NI/PI 模式)。5.2 分析天平：感量 0.1mg 和 0.001g。5.3 实验室纯水机：Barnstead 纯水机。5.4 涡旋振荡器：Scientific Industries 涡流振荡器。5.5 具塞试管：10mL。6 试样的制备与保存试样的制备与保存6.1 试样的制备取有代表性样品 5g，搅拌均匀，制成实验室样品。6.2 试样保存制备好的试样置于室温保存。7 测定步骤测定步骤7.1 样品前处理- 3 -称取 0.10.2g 样品 (
6、精确到 0.001 g) ，置于 10mL 试管中，加入 3.00mL 甲醇溶液，涡旋振摇使样品分散后，超声振荡 10min。静置，吸取上清液经滤膜（4.4）过滤后，供液相色谱- -串联质谱测定。7.4 测定7.4.1 液相色谱条件a）色谱柱：Waters SymmetryC18，5m， 3.9150mm；b）柱温：25；c）流动相：流动相为乙腈和水，等度淋洗。018min，乙腈：水=50：50。d）流速：200L /min；e）进样量：10L。7.4.2 质谱条件a）离子化方式：热喷雾电离(TSI)；b）扫描方式：正离子扫描；c）检测方式：多反应监测（MRM） ；d）碰撞气(CAD)：6.0
7、 psi；e）气帘气(CUR)：20.0 psi；f）雾化气(GS1)：35.0 psi；g）加热气(GS2)：30.0 psi；h）喷雾电压(IS)：5500V；i）去溶剂温度(TEM)：450C；j）碰撞室射出电压（CXP）：16Vk）定性离子对、定量离子对、扫描时间、碰撞气能量和去簇电压，见表 3。- 4 -表 3 糖皮质激素的定性离子对、定量离子对、扫描时间、碰撞气能量和去簇电压化合物定性离子对（m/z）定量离子对（m/z）扫描时间Dwell time（ms）碰撞气能量CE（eV）去簇电压DP（V）醋酸氢化可的松405.2/309.3405.2/309.310028.030.0405.
8、2/327.310028.032.0醋酸氟轻松495.2/337.3495.2/337.310025.032.0495.2/475.310025.032.0醋酸可的松403.2/163.2403.2/163.210032.038.0403.2/343.210030.038.0醋酸地塞米松435.3/397.2435.3/397.210016.038.0435.3/415.310016.045.0醋酸泼尼松401.2/341.2401.2/341.210018.035.0401.2/383.210018.035.0地塞米松393.2/355.1393.2/355.110017.074.0393.
9、2/373.310014.086.07.4.3 液相色谱-串联质谱测定7.4.3.1 定性测定用糖皮质激素的定性离子对（见表 3）进行定性。7.4.3.2 定量测定将混合标准中间溶液用甲醇稀释配制成 0-800ng/mL 的标准使用溶液，在仪器最佳工作条件下，标准使用溶液分别进样，以标准使用溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线。采用外标法进行定量测定。样品溶液中糖皮质激素的响应值应在标准工作曲线线性范围内。在上述色谱条件和质谱条件下，糖皮质激素标准物质液相色谱-串联质谱的多反应监测（MRM）色谱图参见图 A.1。- 5 -7.5 平行试验按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定，六
10、种糖皮质激素的平行测定相对偏差应小于 10%。 。7.6 空白试验除不称取试样外，均按上述步骤同时完成空白试验。8 8 结果计算结果计算样品中糖皮质激素的质量分数可按式（1-1）计算：) 11.(.100011mV式中， 消毒产品中糖皮质激素的质量分数，mg/kg；1从回归方程中查出测试溶液中糖皮质激素的质量浓度，ng/mL；V1 提取溶液体积，mL；称样量，g。9 9精密度和准确度精密度和准确度同一实验室对加标样品重复测定，六种糖皮质激素的相对标准偏差和平均回收率数据参见附录 C。- 6 -附录 A (资料性附录) 六种糖皮质激素标准物质多反应监测(MRM)色谱图六种糖皮质激素标准物质多反应
11、监测(MRM)色谱图，见图 A.1。- 7 -图 A.1 六种糖皮质激素标准物质多反应监测(MRM)色谱图续图 A.1 六种糖皮质激素标准物质多反应监测(MRM)色谱图- 8 -附录 B (资料性附录) 标准曲线消毒产品中六种糖皮质激素的线性回归方程，见表 B.1。表 B.1 消毒产品中六种糖皮质激素的线性回归方程化合物线性范围（ng/mL）ab醋酸氢化可的松0-15001.691043.981031.000醋酸氟轻松0-15005.841044.201030.9992醋酸可的松0-15001.321051.021040.9992醋酸地塞米松0-15001.671051.231040.9991
12、醋酸泼尼松0-15009.951049.541040.9994地塞米松0-5009.961041.961040.9993- 9 -附录 C (资料性附录)回收率和重复性消毒产品中消毒产品中六种糖皮质激素的添加回收率和重复性，见表C.1。表C.1 消毒产品中六种糖皮质激素的添加回收率(%)和重复性(n=6)化合物添加水平（g/g）平均回收率(%)相对标准偏差(%)醋酸氢化可的松4.0089.52.18.0098.44.3醋酸氟轻松4.0084.02.08.0083.13.5醋酸可的松4.0097.13.08.001078.0醋酸地塞米松4.0092.03.18.0096.56.1醋酸泼尼松4.001011.18.001138.1地塞米松4.0056.32.78.0054.72.8
