猪链球菌2型检测方法的研究及其在出入境检疫中的应用

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1、分类号S 墨31学号2 0 I ) 5 鱼3 Q Z Q Q !南京蔑董戈髻博士学位论文猪链球菌2 型检测方法的研究及其在出入境检疫中的应用陈国强I IIII MI I II II I II I P l lI I P F l UI IJ Y 2 3 6 0 6 7 7E S T A B L I S H A 们狲TA N DA P P L I C A T l 0 NO FD E T E C T I O NM E T H O D SF O RS T R E P T O C O C C U SS U I ST Y P E2B yC h e nG u o q i a n gS u p e r v i

2、s e db yP r o f L uC h e n g p i n gAT H E S I SS u b m i t t e dt oN a n ji n gA g r i c u l t u r a lU n i v e r s i t yI nP a r t i a lF u l f i l l m e n to ft h eR e q u i r e m e n tf o rt h eD o c t e r o fP r o f e s s i o n a lD e g r e ei nV e t e r i n a r yM e d i c i n eC o l l e g eo f

3、V e t e r i n a r yM e d i c i n eN a n ji n gA g r i c u l t u r a lU n i v e r s i t yN a n j i n g ,210 0 9 5 ,P R C C o m p l e t e di nO c t 2 011C o m m e n c e m e n ti nO c t 2 011原创性声明本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在

4、文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者( 需亲笔) 签名:倔I 翁缪、夕汐f 年但月a 日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授权南京农业大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编学位论文。保密口,在年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密囱。( 请在以上方框内打“”)学位论文作者( 需亲笔) 签名:彳鲦I 筑兰至、a 口年段月a 日导师( 需亲笔) 签名:目录目录摘要

5、IA B S T R A C T V第一篇文献综述1第一章猪链球菌病11 临床症状12 致病机制22 1C P S 2 2 2 脚与E F 32 3 猪溶素( s u i l y s i n ) 42 44 4 K b 蛋白和I g G 结合蛋白52 5o r f 2 毒力相关基因52 6 新毒力基因片段53 乡包男芝64 流行病学74 1 猪感染猪链球菌。74 2 人感染猪链球菌85 诊断9参考文献1 0第二章猪链球菌的分类和鉴定。1 71 链球菌的分类系统172 猪链球菌的分类地位及其血清型1 72 1 猪链球菌分类地位172 2 猪链球菌形态学和生化特性1 82 3 猪链球菌血清分型2

6、02 4 猪链球菌基因分型2 0参考文献2 3第二篇实验研究2 5第一章猪源动物产品中猪链球菌2 型分离方法的建立2 51 材料与方法2 5猪链球菌2 型检测方法的研究及其在出入境检疫中的应用1 1 菌株和培养基2 51 2 细菌生长状况的测定2 61 3 选择性增菌液的选择2 61 4 选择性平板的分离2 72 结果2 72 1 增菌基础液的选择2 72 2 抑菌剂种类的选择2 82 3 叠氮钠、结晶紫和亚硫酸钠对猪链球菌2 型和杂菌的抑制情况2 92 4 组合抑菌剂的抑菌效果2 92 5 选择性平板分离2 93 讨论3 0参考文献31第二章猪链球菌2 型分型血清的制备3 31 材料与方法3

7、 31 1 菌株和培养基3 31 2S S 2 分型血清的制备:3 41 3S S 2 分型血清效价的测定3 51 4 抗S S 2 凝集血清特异性检验3 52 结果3 52 1 抗原的制备3 52 2S S 2 凝集血清的效价测定3 62 3S S 2 凝集血清特异性检验3 6参考文献3 9第三章猪链球菌溶血素基因的检测4 11 材料与方法4 21 1 试验材料_ 4 21 2S S 溶血素基因P C R 检测方法的建立4 21 3S S 溶血素基因P C R 检测方法的应用4 32 结果4 32 1P C R 检测4 32 2P C R 产物酶切鉴定结果4 42 3 灵敏性试验4 42 4

8、 特异性试验4 5目录2 5P C R 产物测序结果4 62 6S S 溶血素基因P C R 检测方法的应用4 63 小结4 6参考文献4 7第四章江苏出入境猪源动物产品中猪链球菌的检测4 91 材料与方法4 91 1 试验材料4 91 2 方法5 02 结果5 22 1 初步筛选5 22 2 生化鉴定5 22 2 血清学鉴定6 02 3 分子鉴定6 03 讨论6 2参考文献6 3全文总结6 7附录6 9致谢1 0 9摘要猪链球菌2 型检测方法的研究及其在出入境检疫中的应用摘要猪链球茵( S t r e p t o c o c c u ss u i s ,S S ) 是一种重要的人畜共患病病原

9、茵,能引起猪的败血症、脑膜炎、肺炎、多发性关节炎和多发性浆膜炎等;该茵在特定情况下也能感染人,引起人的急性败血症、脑膜炎、心内膜炎等疾病猪链球菌病呈世界性分布。目前,美国、荷兰、英国、加拿大、澳大利亚、新西兰、比利时、巴西、丹麦、挪威、芬兰、西班牙、德国、爱尔兰、中国、E 1 本等几乎所有养猪国家和地区均有发生猪链球茵病的报道,这不仅给养猪业造成了巨大的经济损失,同时还对公共卫生尤其是相关从业人员的健康构成严重威胁在中国,S S 2 最早于9 0 年代初发生于广东,但未见感染人的报道;1 9 9 8 1 9 9 9 年江苏省部分地区猪群爆发该病;同时造成2 5 人感染发病,其中1 4 人死亡;尤其是2 0 0 5 年夏季在四川猪群爆发该病,造成2 1 4 人感染发病,其中3 9 人死亡此外,重庆、香港、江西、广东等地也有人感染猪链球菌的零星病例发生因此,加强猪链球菌检测技术的研究,开展猪链球菌的检测,防止猪链球茵2 型传入传出,

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