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1、1五柴颗粒中五味子甲素的小鼠血清药动学研究作者：郭庆英 王振华 张长水 陈扬 张兆强【摘要 】 目的研究五柴颗粒中五味子在小鼠体内药物代谢规律。方法小鼠灌胃给予五柴颗粒 2 g/kg，在不同的时间点采血样，用高效液相色谱（HPLC）方法分析五柴颗粒和血清样品中五味子甲素成分，测定五味子甲素浓度的经时变化，绘制浓度-时间曲线图。结果五柴颗粒中五味子的主要成分是五味子甲素,其平均含量为 3.13 mg/g ；小鼠给予五柴颗粒后，血清中检测到五味子甲素含量在5，10 ，20，30 min 分别为 1.07，1.14， 0.59，0.51 g/ml。结论五柴颗粒中五味子可吸收进入体内，其在体内吸收和消
2、除速度均比较快，符合线性动力学规律。 【关键词】 五柴颗粒； 五味子； 药物动力学； 高效液相色谱法Abstract：Objective To study pharmacokinetics of schizandrinin in Wuchai Particles in mice. MethodsAfter oral administration of Wuchai Particles(2 g/kg) for the mice , the serum was collected at different time points .The components in the Wuchai Part
3、icles and serum were analyzed by HPLC to 2monitor the changes of the schizandrin in serum so as to draw the curve of concentration connected with time . ResultsThe main component in Wuchai Particles was schizandrin ; after oral administration of Wuchai Particles , the schizandrin in serum of mice wa
4、s detected .The mean concentration of schizandrinin was 1.07，1.14，0.59，0.51 g/ml respectively at five ,ten,twenty,thirty minutes in serum .ConclusionThe schizandrin in Wuchai Particles could be absorbed in mice after oral administration .It could be absorbed and eliminated rapidly . The pharmacokine
5、tics of schizandrin in serum complies with linear kinetic course .Key words：Wuchai Particles; Schizandrin; Pharmacokinetics; HPLC五柴颗粒由五味子、柴胡、半枝莲和丹参等组成，五味子为方中君药，其主要有效成分为五味子甲素。本实验通过对五柴颗粒在小鼠体内五味子甲素的药动学规律进行研究，以阐明该方剂有效成分的药物动力学特征，为五柴颗粒的临床应用和剂型改进提供依据。1 仪器与材料3岛津高效液相色谱系统：SLC-10AT VP 液相色谱仪, UV-VIS 紫外监测器，CTO-1
6、0AS VP 二元泵，HPLC 工作站( 日本岛津公司)。超声波清洗器(KUDOS SK3200H，上海科导超声仪器有限公司)；高速离心机(SORVALL RC 5C PLUS，美国科峻仪器公司)；电子分析天平（SARTORIUS BS 224S，北京赛多利斯仪器系统有限公司 )；SZ-1 型快速混匀器(江苏金坛市金城国胜实验仪器厂)。 五味子标准对照品(0764-200107,购于中国药品生物制品检定所)；五柴颗粒(批号 060513，由济宁市传染病医院提供 )；甲醇( 一级色谱纯，济南市化工研究所)；实验用水为双蒸水（本试验室自制） 。昆明种小鼠 ，体重（252）g ，由济宁医学院实验动物
7、中心提供。2 方法与结果2.1 色谱条件 色谱柱 SHIMADZU VP-ODS C18 (150 mm 4.6 mm，5 m )；流动相为超声脱气 15 min 的甲醇；流速 1 ml/min ；柱温 40 ；检测波长 250 nm。2.2 标准溶液的配制 用电子分析天平准确称量干燥的五味子甲素标准品 5.0 mg，用甲醇定容至 10 ml。此时所得标准品溶液浓度为 500 g/ml，将此浓度标准品规定为 1 号标准品，然后对 1 号倍稀得2 号标准品，用同样的方法分别得到 3，4，5，6，7 ，8 号标准品。42.3 样本的处理2.3.1 五柴颗粒中五味子甲素的含量测定 精确称取 5 g
8、五柴颗粒溶于 50 ml 双蒸水，经超声混匀配成 100 mg/ml 的溶液按上述色谱条件进行分析，测定五柴颗粒中五味子甲素含量。2.3.2 空白血清和含药血清的制备取昆明种小鼠 10 只，其中两只作为空白血清组，其余作为含药血清组。含药血清组按照 0.2 ml/10 g 体重分别给 8 只小鼠灌胃五柴颗粒 100 mg/ml 的混悬液，于 5，10 ， 20，30 min 分别给两只小鼠摘眼球取血；空白血清组以同样方法取血。5 组血样立即 12 000 r/min 离心 15 min（4 ） ，用微量移液器分别取 0.2 ml 上清液加入空离心管中，并分别加入0.4ml 甲醇 12 000
9、r/min 离心 15 min，再将上清液转移到空离心管中，加入 0.4 ml 甲醇，于 12 000 r/min 离心 15 min，上清液转移至空的离心管中，80水浴至干，用甲醇定容至 100 l，即分别为空白血清组和含药血清组。2.4 色谱行为 分别取不同浓度的标准品和处理后的五柴颗粒和小鼠血清样品 20 l，按以上色谱条件分别进样，绘制色谱图，在该色谱条件下，五味子甲素的保留时间为 2.69 min，在该处，该峰独立，并且与其他物质无干扰。见图 13 。52.5 线性关系考察分别精密吸取五味子甲素对照品溶液 20 l 的,按上述色谱条件进行测定，记录峰面积，以峰面积为横坐标，浓度为纵坐
10、标，绘制标准曲线。结果表明五味子甲素回归方程为Y=2.125X ,r2=0.996 265，五味子甲素在 3.9 500 g/ml 范围内呈良好线性关系,RSD=8.298% 。结果见表 1。表 1 五味子甲素对照品线性关系实验2.6 重复性实验取五柴颗粒 6 份，分别制成供试品溶液，按样品测定方法测定，结果五味子甲素平均含量为 0.313 mg/ml，即五柴颗粒中五味子甲素含量为 3.13 mg/g，RSD%为 3.939 96。结果见表 2。表 2 重复性实验2.7 加样回收率实验取上述测定完含量的五柴颗粒 0.5g，配制成10 ml 的溶液，取 1 ml 分别与 3，4，5 ， 6 标准
11、液 1 ml 混合，制成供试液，按上述色谱条件测定含量，并计算回收率。结果见表3。2.8 血清五味子甲素浓度经时变化小鼠灌胃五柴颗粒溶液后，血清成分谱见图 2，通过与五柴颗粒及空白血清对比分析，并经标准对照品确认，血清中可检测到五味子甲素；各个时间段的血清样品按同标准品同样的方法进样，根据各样品的图谱所对应的峰面积以及标准曲线，计算出各样品的血清五味子甲素的浓度（见表 4） ，绘6制浓度-时间曲线（见图 4） ，可见五味子甲素在本次研究中先出现浓度随着时间延长而上升，说明在该段时间内五味子甲素虽然在代谢，但是其吸收量大于代谢量；而当达到一定时间时，其吸收量不足以补充代谢量，出现其含量的下降。3
12、 讨 论为了阐明五柴颗粒中五味子甲素在体内的药物动力学规律，对五柴颗粒体内外成分进行了分析，结果表明五柴颗粒中主要药物为五味子，且吸收进入血液的主要成分以五味子甲素为主。在本次实验中有两点需要注意：由于五柴颗粒溶解度低，且五柴颗粒中五味子含量低，因此小鼠的灌胃量要增大，并且血清需要浓缩以提高其中的药物浓度；血样处理时需要用甲醇沉淀其中的蛋白质直到血样变为无色澄清为止。表 3 五味子甲素的回收率实验 表 4 不同时间段血清五味子甲素浓度本研究还阐明了五柴颗粒中五味子甲素在小鼠体内代谢规律，结果表明，在 510 min 五味子甲素血清中浓度随时间增加，推测其在小鼠体内代谢的同时，其经胃吸收量也在增
13、加，表明五柴颗粒中五味子甲素可以迅速吸收进入体内，有利于药效的迅速发挥；在1030 min 血清中药物浓度随时间在减少，表明其从体内消除也很迅速。这些结果对五柴颗粒的临床应用也具有一定的指导意义。7五味子具有收敛固涩、益气生津、补肾宁心等功效, 现代药理研究表明其具有抗氧化、降低血清转氨酶等多种药理活性1 ，在五柴颗粒中发挥重要作用。本研究表明，五柴颗粒中所含的药效成分五味子甲素应为该方中重要的有效成分之一。因而本研究阐明的方中五味子甲素的药物代谢规律，可为该方的进一步研制提供帮助。中药复方的药物动力学研究相对复杂，还处于探索性阶段，对绝大多数中药复方的药物动力学规律不清楚，对复方在人体内的有效成分变化及药动学规律更不清楚；目前对中药复方新药研究尚未有药物动力学方面的要求，因而，在临床上开展中药复方药物动力学研究存在很大的难度2 。本实验对五柴颗粒在人体内的有效成分变化及药动学规律进行了一些研究，以期对中药复方在人体内的药物动力学研究方法进行探索。【参考文献】 1 刘继永,王英平,刘洪章. 五味子化学成分及药理研究进展J. 特产研究,2005,27（3 ）：49.2 沈映君. 中药药理学M .北京：人民卫生出版社，2000：1009.
