《脑卒中患者血脂与血清脂蛋白谱及载脂蛋白E的基因多态性的临床研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《脑卒中患者血脂与血清脂蛋白谱及载脂蛋白E的基因多态性的临床研究（58页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、第一军医大学硕士学位论文脑卒中患者血脂与血清脂蛋白谱及载脂蛋白E的基因多态性的临 床研究姓名：周娟申请学位级别：硕士专业：中西医结合临床指导教师：张暋20030601荚文缩写 A LA p o E A Sb p C V De I D N AD P A G EE D T A鼗D L c羚HI C V DL D LL D L cp e R _ R 鞠潆8 L P GT E N 蹬DT CT G 眩D L ca L P8 毛pI n t D L VP r e t L P中英文对照缩略词表英文全称N o n e s t e r i f i e dF a t t y A c i d A l b u m
2、i nA p o l i p o p r o t e i nEA t h e r o s e l e r o s i sb a s ep a i r ( s )C e r e b r o v a s e u l a rD i s e a s e sC e r e b r a lI n f a r c t i o nD e o x y r i b o n u c l e i cA c i dD o u b l eG r a d i e n tP o l y a c r y l a m i d eG e lE 1 e c t r o p h o r e s i se t h y l e n ed
3、i a m i n et e t r a a c e t i ca c i d琢酶D e n s i t yL i p o p r o t e i nC h o l e s t e r o lI n t r a c e r e b r a tH e m o r r h a g eS c h e m i eC e r e b r o v a s e u l a rD i s e a s e sL o wD e n s i t yL i p o p r o t e i n L o wD e n s i t yL i p o p r o t e i nC h o l e s t e r o lp o
4、 l y m e r a s ec h a i nr e a c t i o n - r e s t r i c t i o nf r a g m e n tl e n g t hp o l y m o r p h i s m中文全称非黼亿脂肪酸清蛋臼载鹭蛋鑫嚣动脉粥样硬化碱基对脑舡管病脑梗塞脱裁核糖核酸双梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳乙二胺四己酸寒密度器蛋自疆圃醇弦出盘缺皿性脑斑管病低密度脂擞自低密度脂凝白眶固簿聚合酶链菠应一限制性片段长度瓣多态牲S e r u mL i p o p r o t e i nE l e c t r o p h o r e t a g r a m血清脂蛋白谱M N N
5、，N - t e l r a m e t h y le t h y l e n e - d i a m i n e四甲基乙二胺T o t a lC h o l e s t e r o l总腿固醇T r i g l y c e r i d e甘油三酯V e r yL o wD e n s i t yL i p o p r o t e i nC h o l e s t e r c 裰低密度餮蛋自A l p h aL i p o p r o t e i n0 【脂蛋白B e t aL i p o p r o t e i n1 3 鏊蛋叁I n t e rB e t aL i p o p r o t
6、e i n中间B 脂骚白P r eB e t aL i p o p r o t e i n蘸8 骺蛋囱脑卒中患者血脂与血清脂蛋白谱及载脂蛋白E基因多态性的临床研究摘要目的观察脑卒中患者血脂与血清脂蛋白谱的变化，并对脑卒中患者A p o E 基因多态性进行检测。探讨血脂和血清脂蛋白谱与载脂犀白E 基 因多态性的关系及其对脑卒中发病的影响，为临床脑卒中的防治提供依据。方法选择脑卒中患者6 0 例，其中脑梗塞( c I ) 组4 1 例，脑出血( I C H )组1 9 例；对照组为健康体检者30 例。清晨空腹取静脉血3 m l 置于干燥试管中用于血脂检测，2 m l 置于E D T A 抗凝试管中
7、用于A p o E 基因型检测。甘油三酯( T G ) 的测定采用乙酰丙酮显色法；总胆固醇( T C ) 采用胆固醇氧化酶法；高密度脂蛋白胆固醇( H D L c ) 采用葡聚糖硫酸酯镁沉淀法：低密度脂蛋白胆固醇( L D L c ) 采用F r i e d e w a l d 公式计算法，当血清T G 水平 4 0 0 m m o l l L 时，采用聚乙烯硫酸盐沉淀法；血清脂蛋白谱( s L P G ) 采用本实验室双梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳法( D P A G E ) 检测；A p o E 基因型采用聚合酶链反应一限制性片断多态性技术( P C R - R F L P )检测。结果1 三组
8、血脂水平变化：脑梗塞、脑出血和对照组之间比较，脑梗塞组T G 高于对照组，H D L c 、H D L 2 c 、H D L s c 低于对照组( P 0 0 5 ) ；脑梗塞组致动脉硬化指数T C H D L c 、T C I 玎) L c 玎) L c 及L D L c H D L c 高于对照组( P O 0 5 ) 。2 三组S L P O 变化：梗塞组A L 、a L P 量低于对照组， 3 L P 、i m p L P和p r e 3 L P l 高于对照组，差别有显著性( P O 0 5 ) 。2 病例纳入标准以全国第四届脑血管病学术会议修订的各类脑血管病诊断要点为诊断标准1 5
9、 l ，均是经头颅C T 和( 或) M 砒检查证实的脑梗塞与脑出血患者；患者卒中发病前两周内未服用调脂药物并且病历资料齐全；入选范围：6 0 岁以上老年人，男女不限，汉族。3 病例排除标准短暂性脑缺血发作者；继发性血脂异常者( 包括胰腺炎、甲状腺疾病、高血钙) ；经检验证实由脑肿瘤、脑外伤、脑寄生虫病、代谢障碍、风湿性心脏病、冠心病及其他心脏病合并房颤引起的脑栓塞者；合并有肝、肾、造血系统和内分泌系统等严重原发性疾病，精神病患者。( 二) 实验设计按照随机对照的原则，采用完全随机设计方法，将研究对象分为脑梗塞、脑出血和健康对照三个组。检测每个研究对象的血脂、血清脂蛋白谱及A p o E 基因
10、型。把分组和A p o E 基因分型作为两个独立因素，对血脂和血清脂蛋白谱进行方差分析。( 三) 照标本处理方法采盔方法按中华涎学会检验学会建议f q 进行。藏梗塞稻脑出盘患者予入院螽次鑫清震采斑。将3 m l 瘫标本饕予不畲抗凝裁靛试管中，予1小对肉置4 。c 冰箱暂时保存，3 小时两经离心( 3 0 0 0 r m ，1 0 分钟) 分离出血滴，用于血脂及m 清脂蛋白谱的检测；2 m l 衄标本置于E D T A 抗凝试管中，用于全觑标本D N A 的提取，对A p o E 进行基因型检测。二、观察指标与方法( 一) 甘油三酝：乙酝嚣酮照色法f 1 7 】1 。仪器7 5 2 紫多 光掇分
11、巍光凌诗；主海第三分椽饺器厂；小型三瘸零辍：j 哀枣嚣疗竣冬厂。2 。试剡4 5 2 m m o l L 时，L D L e 用聚乙烯硫酸盐沉淀法t 2 0 j N 定。( 三) 致动脉粥样硬化指数根据血清总胆固醇及脂蛋白各组分胆固醇含量的结果，分别计算T C H D L c 。L D L c H D L c ，( T C - - H D L c ) I - I D L e ，H D L 2 c H D L 3 c 的结果。( 四) 血清脂蛋白谱采用双梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳法【1 3 】。1 仪器C S 9 0 0 双波段飞点扫描仪：日本岛津公司；D Y - 3 0 0 型低压电泳仪：广东汕头
12、广播仪器厂；圆盘电泳盘：自制。2 试剂( 1 ) 丙烯酰胺( A c r ) ：F l u l k aB i o e h e m i k a ；( 2 ) N 、N 一亚甲基双丙烯酰胺( B i s ) ：F I u l k a B i o c h e m i k a ：( 3 ) 苏丹黑B ( s B B ) ：进口分装，上海化学试剂公司分装厂，批号：0 0 0 2 1 0 ；( 4 ) 三羟甲基氨基甲烷( T r i s ) ：进口分装，广州南方化玻公司，批号：0 0 0 3 0 5 ；( 5 ) 氨基乙酸：汕头市光华化学厂，批号：0 0 0 4 0 8 ：( 6 ) 四甲基乙二胺( T
13、E M E D ) 上海前进试剂厂，批号0 0 0 8 0 3 ：( 7 ) 过硫酸铵( A P ) ：广东汕头西陇化工厂，批号0 0 0 6 0 5 ：( 8 ) I N 盐酸：广州东红化工厂，批号0 0 0 3 0 1 ：( 9 ) 乙二胺四乙酸二钠( E D T A ) ：汕头市达濠化工厂，批号0 0 0 7 0 1 。3 操作步骤( 1 ) 配制电泳槽缓冲储存液( P H8 4 )“ I r i s6 0g + 氨基乙酸2 8 8 9 ，加水定容至1 0 0 0 m l ，应用时再稀释1 0 倍。( 2 ) 配制分离胶、浓缩胶母液及缓冲液A 液：分离胶母液。A c r9 6 9 + B
14、 i s0 2 5 2 9 ，加水至1 0 0 m l ，过滤后使用。B 液：分离胶缓冲液( P H8 9 ) 。T r i s1 8 3 9 + T E M E D0 2 3 m l + 1 N盐酸2 4 m l ，加水至1 0 0 m 。c 液：浓缩胶母液。A c t1 9 6 9 + B i s0 4 9 ，加水至1 0 0 m ，过滤后一1 4 使用。D 液：浓缩胶缓冲液( P H8 8 ) 。T r i s6 0 5 7 9 + E D T A l 1 7 9 ，加水至1 0 0 m l 。( 3 ) 制备梯度凝胶A 胶：7 的聚丙烯酰胺凝胶。A 液1 3 6 8 m l + B 液
15、2 4 m l + 蒸馏水3 1 2 m l + 1 0 A P O 1 5 m l 。B 胶：3 6 的聚丙烯酰胺凝胶。C 液3 0 0 m l + D 液2 0 0 m l + 蒸馏 水1 1 4 8 4 m l + 髓M E D 0 0 1 6 m l + 1 0 A P0 1 1 7 m l 。c 胶：3 的聚丙烯酰胺凝胶。c 液0 7 5 m l + D 液O 6 0 “+ 蒸馏水3 5 9 5 m 1 + T E M E D0 0 0 5 m l + A P 0 0 5 m l 。将A 、B 、c 三种不同浓度的凝胶，按A 、B 、C 顺序先后注入同一电泳扫描硬质玻璃管中( 内径为
16、5 5 r a m ) ，形成不同浓度梯度的凝胶，每批1 2 管，这三种浓度的凝胶均有分离作用。( 4 ) 预染取1 0 0 l al 新鲜血清与1 0 ul 饱和苏丹黑液，共置有盖塑料离心管中混匀，3 7 。c 恒温水浴预染4 5 分钟。( 5 ) 上样取预染标本4 5 l l l ，小心加在C 胶表面，用电泳槽缓冲液轻轻覆盖，继而将缓冲液加至适当高度。( 6 ) 电泳以D Y - 3 0 0 型低压电泳仪作恒流电源，先0 5 m A 管2 小时，然后加大至2 m A 管2 小时。( 7 ) 吸光度扫描电泳后立即取下玻璃管，擦干玻璃管表面黏附的液体，放入C S - - 9 0 0 0 双波段飞点扫描仪内的扫描架中，准确固定扫描架，依次进行扫描。扫描波长为6 0 4 n m ，C S 9 0 0 0 扫描仪将图谱自动量化，计算出各区带的比值( ) 。( 五) 载脂蛋白E 基因分型采用P C R - R F L
