细胞增殖检测新技术

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1、细胞增殖检测新技术细胞增殖检测新技术EdU 取代取代 BrdU直接测定 DNA 合成是细胞增殖检测的最准确方法之一，是测定物质毒性、评估药物安全评价、细胞健康的基本方法，其中以前常用的方式是利用胸腺嘧啶核苷酸类似物BrdU 进行检测。因为在细胞周期的 S 期，和细胞一起孵育的 BrdU 能渗入 DNA 分子中，再结合 BrdU 抗体与渗入 DNA 的 BrdU 特异性结合，就能够检测到 DNA 复制活跃的细胞。但 BrdU 有一大缺点，就是需要变性 DNA 后才能与抗体结合，但这就破坏了 DNA 双链结构，影响了其他染料的结合染色，导致染色弥散，准确性降低等问题。哈佛大学医学院细胞生物学家 A

2、drian Salic就认为：“为了能够暴露 BrdU 的抗原表位，必须用高浓度的盐酸，乙酸或酶解，但经历了如此严重的处理后，细胞原本精巧细致的结构在显微镜下就变得惨不忍睹了。”事实上，现在有一种新的检测方法能避免这种情况的发生EdU 检测。EdU （5-乙炔基-2脱氧尿嘧啶核苷）也是一种胸腺嘧啶核苷类似物，但其连有的炔羟基团在天然化合物中很少见，在细胞增殖时能够插入正在复制的 DNA 分子中，基于 EdU 与染料的共轭反应可以进行高效快速的细胞增殖检测分析，可以有效地检测处于 S 期的细胞百分数。与传统的免疫荧光染色（BrdU）检测方法相比，更简单，更快速，更准确。EdU 只有 BrdU 抗

3、体大小的 1/500，在细胞内更容易扩散，不需要严格的样品变性（酸解、热解、酶解）处理，有效地避免了样品损伤，有助于在组织、器官的整体水平上观测细胞增殖的真实情况，具有更高的灵敏度和更快的检测速度。Adrian Salic 特别强调：“与传统的免疫荧光染色不同，EdU 反应能在几分钟内完成，且不需要进行严格的样品变性处理，使得组织成像更简单易行。”细胞增殖检测方法基于 EdU 与 Apollo？荧光染料的完美结合准确检测新合成的 DNA，简单，快速，准确。这种检测方法非常快速，且只需简单的几个步骤，因此也适用于高通量筛选试验，如在药物筛选中检测加药后细胞的活力。图 1 BrdU 与 EdU 检

4、测原理示意图 表 1 BrdU 与 EdU 检测优缺点比较图 2 BrdU 需要 DNA 变性后才能与抗体结合，导致 BrdU、Hoechst 染色弥散，边缘模糊不清；而 EdU 边缘清晰完整，检测更灵敏、更准确 EdU 可以检测新合成的 DNA，而 EU 则可以检测新合成的 RNA。EU 是一种尿嘧啶核苷类似物，能够在 RNA 转录时期代替尿嘧啶（ U ）渗入正在合成的 RNA 分子，基于 EU 与 Apollo？荧光染料的特异性反应进行 RNA 检测。EU 能够在体内和体外水平检测时间和空间上 RNA 合成的变化，能够更方便地研究 RNA 转录位点，结合相关抗体标记能够检测与 RNA 有相互作用的蛋白。结合 EdU 和 EU 进行检测新合成的 DNA 和新合成的 RNA，可以深入开展细胞增殖、细胞周期、细胞毒性、DNA 复制及修复、信号通路等方面的研究。