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1、分类号：密级：学位类别：0R 7 7 7 5科学学位口专业学位团学校代码：10062学号：2 0 1 0 6 0 2 6 0 5学科门类：医学 夭肄酱科矢垮 T I A H J l NM E O I C A LU N l V R S l l l硕士学位论文M A S T E R SD I S S E R T A T I O N论文题目：甲状腺相关眼病患者血清与泪液中炎性因子的检测及治疗后的变化TIT L ED e t e c t i o no fi n f l a m m a t o r yc y t o k i n ei ns e r u ma n dt e a ro ft h y r o
2、i d a s s o c i a t e do p h t h a l m o p a t h yp a t i e n t sa n dt h ec h a n g ea f t e rt r e a t m e n t一级学科：临床医学二级学科：眼科学论文作者：王倩指导教师：何彦津天津医科大学研究生院二零一三年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意
3、。学位论文作者签名：盈日期：芦传年工月司日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密口，在年解密后适用本授权书。本论文属于广1 不保密I l 。( 请在相对应的方框内打“”)学位论文作者签名：导师签名：王镐日期：为B 年上月z 1 日日期：弘f ；年r 月刁日天津医科大学硕士学位论文中文摘要目的：1 应用酶联免疫吸附测定法( E L I S A ) 检测不同分期甲状腺相关眼
4、病( T A O ) 患者、正常人血清中炎性因子I L 6 、T N F 一0 【、s l C A M 1 表达水平，了解T A O 患者血清中这些因子的表达水平，意在寻求能够反映T A O 患者病情活动性的指标。2 同样方法检测不同分期T A O 患者、正常人泪液中炎性因子I L 6 、T N F 0 【、s I C A M1 表达水平，了解T A O 患者泪液中这些因子的浓度，寻找能够评价疾病活动性的实验指标，探求这些因子在T A O 发病中的变化规律。3 同样方法测定糖皮质激素治疗后活动组T A O 患者血清与泪液中I L 一6 、T N F c 【、s l C A M 1 表达水平，对
5、比治疗前后的变化，意在发现糖皮质激素对其影响及变化规律。方法：1 根据C A S 评分将3 4 例T A O 患者分为活动组2 2 例与稳定组1 2 例，采用E L I S A 方法检测1 A O 活动组与稳定组、正常对照组血清和泪液中I L 6 、T N F c 【、s l C A M 1因子的表达水平，并进行各组间比较分析。2 同样方法检测2 2 例活动组T A O 患者糖皮质激素治疗后血清和泪液中I L 6 、T N F G t 、s l C A M 1 表达量，分析比较这些因子水平在治疗前后的变化。T A O 患者首先应用类固醇激素冲击疗法( 第一周甲强龙5 0 0 m g d x 3
6、 d ，停用4 天，第二周甲强龙5 0 0 m g d 3 d ，停用4 天) ，后改用强的松( 3 0 m g d x 2 w ，2 0 m g d 2 w ，1 0 m g d 2 w ) ，疗程8 周。3 应用S P S S1 7 0 统计学软件进行统计分析，计量资料用均数- 4 - 标准差表示，并进行正态性检验和方差齐性检验。两组间比较采用独立样本t 检验；相关性分析采用S p e a r m a n 相关性分析，P 0 0 5 ) 。天津医科大学硕士学位论文( 4 ) 糖皮质激素治疗后，T A O 患者血清I L 一6 、s l C A M 1 水平与治疗前比较，均显著降低，差异有统
7、计学意义( p O 0 5 ) 。( 5 ) T A O 患者血清I L 一6 、T N F a 、s l C A M 1 之间有相关性( p 0 0 5 ) 。( 3 ) 活动组T A O 忠者泪液I L 一6 水平较稳定组明显升高，差异有统计学意义( p 0 0 5 ) 。( 4 ) 糖皮质激素治疗后，泪液I L 一6 水平较治疗前显著降低，差异有统计学意义( p 0 0 5 ) 。( 5 ) T A O 患者泪液I L 6 、n 师0 【呈正相关t 生L o 3 ) 1 2p a t i e n t sw i mi n a c t i v eT A O ( C A S O 0 5 ) (
8、 4 ) T h es e r u ml e v e l so fI L - 6 ，s l C A M - 1w e r ed e c r e a s e di np a t i e n t s 谢mT A Oa f t e rt r e a t e dw i t hg l u c o c o r t i c o i d s ，t h ed i f f e r e n c eb e f o r ea n da f t e rt r e a t m e n tw a ss t a t i s t i c a l l ys i g n i f i c a n t ( p 0 0 5 ) ( 5 )
9、 T h e r ew e r es i g n i f i c a n tp o s i t i v ec o e l a t i o n sb e t w e e nI L - 6 ，T N F - 值l e v e l sa n ds l C A M 1l e v e l s 2 L e v e l so fi n f l a m m a t o r yc y t o k i n e si nt e a ro fT A O( 1 ) T e a rI L - 6a n dT N F - 0 【w e r ed e t e c t e di na l ls a m p l e s ，w h
10、 i l et e a rs l C A M - 1W a sd e t e c t e di ne i g h tc a s e s ( 2 ) C o m p a r e d 谢t 1 1t h ec o n t r o lg r o u p ，t e a rI L 一6l e v e l so fT A Op a t i e n t sW a ss i g n i f i c a n t l yi n c r e a s e d ，t h ed i f f e r e n c eW a ss t a t i s t i c a l l ys i g n i f i c a n t ( p
11、 0 0 5 ) ( 3 ) T h ec o n c e n t r a t i o n so ft e a rI L 一6o fa c t i v eT A Og r o u pw e r es i g n i f i c a n t l yh i g h e rt h a nt h ei n a c t i v eT A Og r o u p ，t h ed i f f e r e n c ew a ss t a t i s t i c a l l ys i g n i f i c a n t ( p 0 0 5 ) ( 4 ) T h et e a rl e v e l so fI L
12、 - 6W a sd e c r e a s e di np a t i e m sw i t hT A Oa f t e rt r e a t e d 埘t hg l u c o c o r t i c o i d s ，t h ed i f f e r e n c eb e f o r ea n da f t e rt r e a t m e n tW a ss t a t i s t i c a l l ys i g n i f i c a n tV天津医科大学硕士学位论文( p O 0 5 ) ( 5 ) T e a rI L - 6l e v e ll e v e l ( p 3 分
13、，共2 2 例；稳定组：C A S 3 分即认为T A O 处于活动期。1 1 2 标本采集1 1 2 1 血清采集：抽取受试者空腹时肘部静脉血约5 m l ，置于室温下半小时，之后在3 0 0 0 转分的速度下快速离心1 0 分钟，提取血清置于一2 0 冰箱内保存待测。1 1 2 2 泪液采集：通过l O “1 的毛细玻璃管在下睑结膜囊泪阜处虹吸采集泪液( 未4天津医科大学硕士学位论文甲状腺相关眼病患者血清与泪液中 炎性因子的检测及治疗后的变化使用表面麻醉药物或其他化学性药物) ，尽量不接触眼表，每次取5 0 9 l 备用，收集的泪液E p 管分装，置- - 2 0 冰箱保存待测。1 1 3
14、 实验仪器设备( 1 ) w 1 R D 9 4 1 型药用电子振荡器苏州东乌医用电子仪器厂( 2 ) 砂6 0 型全自动酶标仪美国M e t e r t e c h 公司( 3 ) 温浴箱上海大龙医疗设备有限公司( 4 ) 微量移液器德国E p p e n d o r f 公司( 5 ) 2 0 低温冰箱青岛海尔( 6 ) T G L 1 6 G 高速台式离心机上海飞鸽1 1 4 主要试剂( 1 ) 人白细胞介素一6 ( I L 一6 ) E L I s A 试剂盒美国R & Ds y s t e m s 公司( 2 ) 人肿瘤坏死因子一a ( T N F - a ) E L I S A 试
15、剂盒美国R & Ds y s t e m s 公司( 3 ) 人细胞问粘附分子一I ( s I C A M 一1 ) E L I S A 试剂盒北京四正柏生物科技有限公司试剂盒组成：l 、酶标包被板：1 2 孔8 条3 个2 、标准品和标准品稀释液：s l C A M 1l a 标准品2 支，1 b 标准品和标本稀释液4 瓶；T N F 标准品O 5 m l 1 瓶( 9 6 0 n g 1 ) ，标准品稀释液3 m l ；I L 6 标准品0 5 m L x l 瓶( 6 4 0 n g 1 ) ，标准品稀释液3 m l 。3 、2 a 浓缩生物素化抗体2 支1 份，2 b 生物素化抗体稀释
16、液1 瓶1 份：生物素标记的抗T N F Q 抗体6 m l 1 份；生物素标记的抗一I L 6 抗体l m l x l 份4 、链霉亲和素H R P6 m l1 2 份5 、3 a 浓缩酶结合物2 支1 份，3 b 酶结合物稀释液1 瓶1 份6 、3 0 倍浓缩洗涤液2 0 m l x 2 份，2 0 倍浓缩洗涤液1 瓶1 份7 、显色剂A 液6 m L x 2 份，显色剂B 液6 m L 2 份，显色剂1 瓶1 份8 、终止液6 m L x 2 份，终止液1 瓶X 1 份9 、说明书1 份3 份1 0 、封板膜2 张2 份，4 张l 份1 1 、密封袋1 个3 份1 2 、座标纸( 半对数) ：3 张天津医科大学硕士学位论文甲状腺相关眼病患者血清与泪液中炎性因子的检测及治疗后的变化1 1 5E L I S A 法操作步骤1 1
