《血浆Zicl启动子甲基化水平检测在胃癌早期诊断中的价值初探》由会员分享，可在线阅读，更多相关《血浆Zicl启动子甲基化水平检测在胃癌早期诊断中的价值初探（48页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、血浆Z i c l 启动子甲基化水平检测在胃癌早期诊断中的价值初探 论文作者签名：盘童茎指导教师签名：论文评阅人1 ：方勇副主任医师浙江大学医学院附属邵逸夫医院评阅人2 ：评阅人3 ：评阅人4 ：评阅人5 ：答辩委员会主席：委员1 ：委员2 ：委员3 ：委员4 ：委员5 ：吴加国副主任医师浙江大学医学院附属邵逸夫医院袁庆丰主任医师杭州市第一人民医院吕宾教授浙江省中医院戴宁教授浙江大学医学院附属邵逸夫医院李晓玲主任医师杭州红十字会医院答辩日期：2 0 1 3 0 5 2 5浙江大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标
2、注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得浙江太堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：访、宙殍签字日期：山l 弓年箩月勘日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解浙江太堂有权保留并向国家有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权逝延太堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。( 保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：诱螺签字日期：屿年，月
3、p 曰引擀誊0 犰聊虢拶凡沙u 醢签字日期：夕吩年，月珍目浙江大学硕士学位论文致谢致谢时光飞逝，转眼浙大医学院七年的医学生活即将结束，此刻我心中饱含无限感激。首先，由衷感谢我的导师，姒健敏教授。在两年的硕士研究生期间，您渊博的学识、开阔的学术视野和对学科动态的高瞻远瞩让我终生受益。感谢您对实验的指导和论文的细致修改，您的和蔼、仁慈、正直，让我由衷敬仰。感谢您对我学习和生活上的帮助，感谢在我彷徨和困惑的时候给予巨大的鼓励和支持! 您不仅是我的授业恩师，也是我今后学习与工作上的楷模!感谢副导师陈淑洁老师在这一年来对我学习、生活上的指导和关怀。从课题的选择、设计、实施到论文的撰写、修改都花费了您大量
4、的心血和精力。感谢对我的耐心和包容，感谢您一直以来给我的支持和关心!感谢方燕飞老师在实验前期的准备及平时对我的关心，感谢实验室王岚、王吉吉，师兄李均、薛猛，师姐钱翠娟、尹莹、黄贞霞，师妹林金萍、林正铧、胡莹莹等对我的巨大帮助。感谢邵逸夫医院消化科戴宁教授、吴加国主任、於亮亮老师、刘玮丽老师、邓燕勇老师、李爱清老师对临床学习工作的支持和指导。感谢内镜室张奕荫老师对我内镜学习的悉心指导!感谢临床三系0 6 0 5 班的各位同学，感谢大家一起在求是园结下的七年同窗之谊! 感谢同班同学吕杰敏、倪俊俊、邵逸夫医院体检中心叶君君姐姐对标本收集的支持!感谢我的家人，感谢你们对我学业、生活的无私关怀、理解和包
5、容!最后，感谢答辩委员会专家和评审专家!陈雪琴于浙大医学院浙江大学硕士学位论文中文摘要血浆Z i c l 启动子甲基化水平检测在胃癌早期诊断中的价值初探浙江大学医学院内科学( 消化内科)硕士研究生陈雪琴导师姒健敏教授副导师陈淑洁中文摘要目的研究正常人一胃上皮内瘤变一胃癌等不同阶段患者血浆中Z i c l 启动子甲基化频度变化，初步探讨其作为一种新型分子标志物在胃癌前病变监测和胃癌诊断中的价值和应用前景。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应( M S P ) 方法，检测1 5 倒正常对照者、2 2 例胃上皮内瘤变患者、3 0 例胃癌患者血浆中Z i c l 启动子甲基化水平，并收集研究对象临床及病理
6、资料，分析相关临床病理资料对Z i c l 启动子甲基化水平的影响，同时评价Z i c l 甲基化联合癌胚抗原( C E A ) 检测在胃癌诊断中的意义。结果1 ) 6 7 例研究对象包括1 5 例基本正常的健康对照者，2 2 例胃上皮内瘤变患者及3 0 例胃癌患者，平均年龄为( 5 5 9 士1 2 2 ) 岁，其中男性3 4 例，女性3 3 例；2 ) 外周血浆游离D N A 中Z i c l 启动子甲基化现象在正常对照组阳性率为o 。上皮内瘤变组、胃癌组、高级别上皮内瘤变+ 早期胃癌组阳性率分别是3 1 8 、5 0 0 、5 5 6 。与正常对照组相比，阳性率均有显著升高( P 0 0
7、 5 ) ；4 ) 传统胃癌标志物血浆C E A 检测在胃癌组、胃癌+ 上皮内瘤变组、高级别上皮内瘤变+ 早期胃癌组患者中，阳性率分别为2 1 4 、1 7 5 、1 6 7 ；与Z i c l 启动子甲基化检测的灵敏度相比均显著低于Z i c l ( P 0 0 5 ) 。( 见表3 4 )表3 4 胃癌组患者中Z i c l 启动子甲基化水平与患者临床及病理参数之间的关系Z i c l临床病理参数nMUX2 值P 值性别男女年龄( 岁)6 00 0 5 ) 。( 见表3 5 )表3 5 上皮内瘤交组患者中Z i c l 启动子甲基化水平与患者临床及病理参数之间的关系浙江人学硕士学位论文正文
8、一实验结果3 2 4 联合Z i c l 启动子甲基化水平与C E A 检测6 7 例研究对象外周血的结果在胃癌组患者中，C E A 检测的阳性率为2 1 4 ( 6 6 + 2 2 ) ，特异度为9 5 ( 1 1 + 8 1 2 + 8 ) ；Z i c l 启动子甲基化检测的阳性率为5 3 6 ( 1 5 1 5 + 1 3 ) ，特异度为7 5 0 ( 8 + 7 8 + 1 2 ) ；联合Z i c l 启动予甲基化与C E A 检测( 叠加检测) 的灵敏度为1 0 7 ( 3 3 + 2 5 ) ，特异度为9 5 ( 8 + 1 1 8 + 1 2 ) ，诊断胃癌的阳性预测值为7
9、5 o ( 3 3 + 1 ) ，阴性预测值为4 3 2 ( 8 + 1 1 8 + 1 1 + 2 5 ) ；联合Z i c l 启动子甲基化与C E A检测( 平行检测) 的阳性率为6 4 3 ( 18 1 8 + 1 0 ) ，特异度为7 5 O ( 7 + 8 8 + 1 2 ) ，诊断胃癌的阳性预测值为7 8 3 ( 1 8 1 8 + 5 ) ，阴性预测值为6 0 O ( 7 + 8 7 + 8 + 1 0 ) 。其中Z i c l 启动子甲基化检测与C E A 检测相比，阳性率有显著性提高( P 8 5 ) ，而其中C p G 岛中大部分都是呈非甲基化状态( 1 0 ) 。近年来
10、有相关研究表明年龄 7 1 ，吸烟旺性别【7 1 等可能对人体甲基化水平有一定的影响。二、抑癌基因启动子甲基化与胃癌在肿瘤的形成过程中，原癌基因突变的作用已被广泛认识，目前观点认为表观遗传修饰导致的抑癌基因沉默在肿瘤的发生中至少起着同样重要的作用。目前研究比较广泛且深入的主要有组蛋白修饰和D N A 甲基化两种方式。它们与抑癌基因的沉默、原癌基因的活化、染色体不稳定性、印记的缺失、染色质结构的重构有关。在乙酰化和低甲基化状态时，染色质区域的转录能够正常进行，而一旦呈去乙酰化及高甲基化，则基因转录将会受抑制。与基因突变相比，异常D N A 甲基化是肿瘤发生发展中是比较早期的改变 4 。在人类的发
11、展中，基因序列中C p G 被逐渐剔除，余下的部分形成了C p G 岛【8 1 。大部分的C p G 位点是以甲基化形式存在，但是C p G 岛中主要是以非甲基化状态存在的9 1 。在肿瘤中异常甲基化状态主要表现为许多非C p G 岛区域呈去甲基化状态，而C p G 岛区域呈高甲基化状态，总体效应表现为基因组D N A 总体甲基化水平的降低及部分甲基化水平的升高2 1 。C p G 岛是C p G 富含区，长度一般不小于5 0 0 b p ，G C 含量不小于5 5 ，C p G 含量观察值预期值不小于0 6 5 的D N A 序列 1 0 lC p G 岛主要位于基因的启动子区域或者第一外显
12、子区域 】1 1 。在5 0 的基因中c p G 岛位于上游的启动子区域，其余的位于转录起始位点 1 2 。其中肿瘤中抑癌基因启动子甲基化能够引起相关抑癌基因表达降低 1 3 J 的可能机制有：1 ) D N A 甲基化能够直接抑制转录因子与D N A 的结合；2 ) 甲基化c p G 结合蛋白能够直接识别甲基化，进而募集沉默转录的抑制分子，从而修饰周围染色质；3 ) D N M T 除了有甲基转移酶活性，且与组蛋白去乙酰化酶及组蛋白甲基转移酶结合，从而抑制转录；4 ) 在基因编码区内的D N A 甲基化能够通过与甲基化C p G 结合蛋白的结合，直接影响转录的延伸【l4 1 。在启动子的核心
13、区域，甚至可以是C p G 中的单个二核苷酸的甲基化，即可以影响相关基因的表达 1 5 1 。浙江大学硕士学位论文胃癌的发生是一个涉及多基因遗传学和表观遗传学改变的累积过程，其中包括原癌基因的激活和抑癌基因的失洲引。目前越来越多的学者投向了抑癌基因启动子甲基化在胃癌发生、发展中作用的研究。目前公认炎症微环境为肿瘤发生的第七大机制【l 州。流行病学调查提示在某些特异性脏器中，长期持续的炎症使肿瘤发生的风险增加，如溃疡性结肠炎与结肠癌m 、肝炎与肝癌、胃炎与胃癌1 9 1 等。关于D N A 甲基化在炎症介导的肿瘤发生中的的作用也已被深入研究。在溃疡性结肠炎【2 0 1 、幽门螺旋杆菌感染相关胃炎
14、及病毒性肝炎 2 1 中都存在异常甲基化现象。现认为在炎症组织中的抑癌基因甲基化的改变是癌变的早期事件。在u s 埘i m aT等冽提出的假说中认为，随着炎症进展发生的D N A 甲基化积聚导致了肿瘤的发生。T a k e i c h i 等 2 3 】发现在弥漫型胃癌中，D N A 甲基化水平与胃粘膜炎症程度呈平行关系，认为与胃炎活动相关的抑癌基因甲基化可能是弥漫型胃癌发生的重要机制。胃癌的发病机制复杂，其中H p 感染、高盐饮食、环境及遗传因素等都超着一定的作用2 4 1 。国内C a i 等 2 5 1 对9 2 0 例对象进行研究，发现在胃癌前病变中，p 1 6基因C p G 岛的甲基
15、化程度- 9H p 感染有着显著关联，推测H p 感染可能诱导p 1 6基因启动子区甲基化现象的发生。有报道在H p 相关的M A L T 患者组织中也观察到高甲基化现象2 6 l 。但仍有部分研究认为在胃癌的发生过程中，H p 感染与D N A甲基化水平无显著关联【2 7 1 。因此H p 感染- 9D N A 甲基化状态的关系有待进一步探索。D N A 的甲基化现象与胃癌前病变抑癌基因启动子密切相关。K a F a i 等【2 8 】发现无论是在胃癌患者或者是非胃癌患者的胃肠化组织中，抑癌基因启动子甲基化水平相当。说明抑癌基因甲基化是胃癌发生中的早期事件。D o n g 等1 2 5 对9
16、 2 0 例胃癌前病变患者( 包括慢性萎缩性胃炎、肠化生、不典型增生) 的患者胃组织进行检测，发现在胃癌前状态的各个阶段中均可以发现D N A 甲基化现象的存在，且推测H p 感染能够诱导D N A 甲基化的发生。胃上皮内瘤变是胃癌发生过程中的重要阶段，对其进行有效监测对胃癌的发生有重要的意义。相关研究报道在胃癌细胞中的研究表明Z i c l 作为一个抑癌基因在胃癌中表达下降，其主要机制是通过启动子区域的甲基化2 9 1 。W a n g 等3 的研究发现，在胃癌浙江大学硕十学位论文综述组织中抑癌基因H o x D l 0 启动子区甲基化发生率为8 7 5 ，肠化组织中发生率为6 0 ，而在正常组织中未发现甲基化现象。由此可见抑癌基因启动子区甲基化现象存在于胃癌前病变及胃癌的各个阶段中，可能对胃癌前病变的有效检测及胃癌的诊断有重要价值，其在胃癌发生发展中的具体作用机制
