《雷帕霉素对大鼠vsmc增殖影响及机制探讨第三军医大学》由会员分享，可在线阅读，更多相关《雷帕霉素对大鼠vsmc增殖影响及机制探讨第三军医大学（59页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、第三军医大学硕士学位论文E f f e c to fr a p a m y c i no nt h ep r o l i f e r a t i o no fV a s c u l a rs m o o t hm u s c l ec e ni nr a t sa n di t sm e c h a n i s mB a c k g r o u n da n do b je c t i V e ：A b s t r a c tE x c e s s i v ep r o l i f e r a t i o no fV S M Ci st h ec o m m o np a t h 0 1 0
2、9 i cb a s i sf o ra r t h e r o s c l e r o s i sa n dr e s t e n o s i sa R e rr e v a s c u l a r i z a t i o n D N Ar e p l i c a t i o ni sa ne s s e n t i a lc h a r a c t e ro fV S M Cp r o l i f e r a t i o n O R Ci sac o m p l e xo fD N Ar e p l i c a t i o no r i g i np r o t e i ni ne u k
3、 a r y o t i cc e l l s ，a n di tc o o p e r a t e sw i t ho t h e ro r i g i nf A c t o r so nc h r o m a t i ni n V o l V e si nt h ei n i t i a t i o no fD N Ar e p l i c a t i o n O R Ci sc o m p o s e do fs i xs u b u n i t s ，w h i c ha r ec a U e d0 R C1 6r e s p e c t i V e l y ；a n d0 R Cli
4、 st h el a r g e s ts u b u n i to fO R C I ne a r l yGlp h a s e ，0 R Cb i n d st oD N Ar e p l i c a t i o no r i g i ns i t eo nc h r o m a t i n ，w h i c hp r o V i d e sap l a t f o mf o rt h eo t h e ri n i t i a t i o nf a c t o r s ( s u c ha sC d c 6 ，C d t1 ，M c m 2 7 ) t oc o m b i n et o
5、 g e t h e ra n df o mt h ep r e R C A c t i V a t e db yV a r i o u sk i n a s e ，p r e R Cp r o m o t e sc e Uf r o mG1p h a s et oSp h a s ea n dc o m m e n c e sD N Ar e p l i c a t i o n I nm a m m a l i a nc e l l s t h eO R C 2 6s u b u n i t sb i n dt ot h eD N A ，0 R C1 i sr e m o V e df r
6、o mt h ec h r o m a t i na sc e l l sp r o g r e s si n t oSp h a s ea n dr e b o u n dt oc h r o m a t i no n l ya sc e l l sp r o g r e s si n t oG1p h a s e I tw a sd e f i n e da s 0 R Cc y c l e ”S o ，I ti saw i d e l ya c c e p t e do p i n i o nt h a tO R Cli st h ek e yf a c t o rt or e g u
7、l a t ec e l lp r o l i f e r a t i o n R a p 锄y c i ni so n eo ft h em o s tu s u a l l yu s e dd 1 1 J g so fd n l g e l u t i n gs t e n t ，a n di t si n h i b i t i v ee f r e c to nV S M Cp r o l i f e r a t i o ni sc o m p l e x ，i tm a y b et h r o u g hP 1 3 K - A K T - m T O Rp a t h w a yt
8、 oi n h i b i tn 1 T O R ，t h e ni n h i b i tc o m p o s i t i o no fp r o t e i n sa n dk e e pc e U sm a i n l yi nG 0 G1p h a s e O u re a r l i e rs t u d i e sf o u n dt h a t0 R C1g e n es i l e n c e db yR N Ai n t e r f e r e n c ec a ni n h i b i tV S M Cp r 0 1 i f e r a t i o na n dk e 印
9、c e Um a i n l yi nG O G1p h a s e S o ，b o t hf a p 锄y c i na n dO R Clg e n e s c i l e n c ec a ni 1 1 1 1 i b i tt h ep r o l i f e r a t i o no fV S M C H o w e V e r ，i nc e Uc y c l e ，r 印a m y c i na n d0 R C1 ，w h i c hs i t eo fa c t i o ni sm o r ep r i o r ? H o wd o e st h ee x p r e s
10、s i o nl e V e lo fO R C1c h a n g ei nc e Uc y c l ed u r i n gr a p a m y c i ni n h i b i tt h ep r 0 1 i f e r a t i o no fV S M C ? i ti sn o tc l e a r II nt h i ss t u d y ，c u l t u r e dV S M Cw a so b t a i n e df r o mS Dr a tt h o r a c i ca o n at oe x p l o r et h ee 骶c ta n dm e c h a
11、 n i s mo fr 印a m y c i no nt h ep r o l i f e r a t i o no fV S M Ci nr a t sa n dt h ea c t i o ns i t eo fr a p 锄y c i na n d0 R C1 i nc e Uc y c l e ，i no r d e rt op r o V i d et h e o r ye V i d e n c e sf o rp r e c a u t i o n第三军医大学硕士学位论文a n dt r e a t m e n to fv e s s e ld i s e a s e ss u
12、 c ha sA sa n dr e s t e n o s i sa f t e rr e v a s c u l a r i z a t i o n M e t h o d s ：( 1 ) V S M Cw a so b t a i n e db yt h ea d h e r e n c em e t h o do ft i s s u ec u l t u r e ，V S M Cg r o w t hc u r v ea n dt h eo p t i m i z a t i o nc o n c e n t r a t i o no fr a p a m y c i nw e r
13、 ed e t e 咖i n e db yM T T ( 2 ) V S M Cw a sd i V i d e dr a n d o m l yi n t ot w og r o u p s ，t h r e eb o t t l e s w e U sp e rg r o u p c o n t r o lg r o u p s ( C G ) w e r ec u l t u r e di nD M E Mw i t h1 0 F B S ，a n de x p e r i m e n t a l 乒o u p s ( E G )w e r ec u l t u r e di nD M
14、E Mw i t h1O 1 0 l Lr a p a m y c i na n d10 F B S S y n c h r o n i z e dc e Uw a so b t a i n e db ys e r u ms t a r v a t i o nm e t h o d E x p r e s s i o no fP C N A ，B c l - 2 ，B a xp r o t e i nw e r eo b s e r v e db yi m m u n o c y t o c h e m i s t r y ，V S M Cu l t r a m i c r o s t m c
15、 t u r ew a sa n a l y z e db ye l e c t r o nm i c r o s c o p e ，c h a n g e so fc e l lc y c l e ，s u c ha st h ep e r c e n t a g eo fc e l l sa tG 0 G1p h a s e ，a tSp h a s ea n da tG 2p h a s e ，w e r em o n i t o r e db yF C M ，c e Uc y c l er e l a t e df a c t o r s ( c y c l i nD1a n dc y
16、 c l i nA ) a n da p o p t o s i sf a c t o rP 5 3p r o t e i nw e r ed i s p l a y e db yW e s t e mB l o t ，e x p r e s s i o no f0 R C1a tt r a n s c r i p t i o na n dp r o t e i n1 e V e lw e r ed i s p l a y e db yR _ T - P C Ra n dW e s t 锄B 1 0 tw h e nV S M Cw a sc u l t l l r e df o r4 8h R e s u l t s ：( 1 ) V S M Cw a si s o l a t e ds u c c e s s 如l l ya n di t sg o o dp r o l i f e r a t i v ea c t i v i t yw a so b t a i n e d C o m p a r e dw
