《趋化因子cxcl12-cxcr4生物轴对大肠癌肝脏定向转移影响及其分子机制的研究2006年6月18日》由会员分享，可在线阅读，更多相关《趋化因子cxcl12-cxcr4生物轴对大肠癌肝脏定向转移影响及其分子机制的研究2006年6月18日（93页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、 盔星些型奎兰擅主堕壅圭堂丝堡苎 但是其作用的具体步骤、理论基础目前仍不十分清楚。肝脏作为机体内重要的代谢器官，其实质细胞、间质组织均具有非常强的可塑性同时又是大肠癌定向转移的重要靶器官，但C X C L l 2 一c X C R 4 生物轴在该转移途径中是否发挥作用，其作用机制仍不太清楚。因而以此为切入点深入展开本课题：目的从大肠癌活检组织学标本、体外细胞培养、动物在体实验三个层次探讨趋化因子C x c L l 2 一C x C R 4 生物轴系统在大肠癌肝定向转移中的作用机制，着重研究体外L O V O 肿瘤细胞趋化、侵袭等生物学特性的变化；在体肿瘤组织、靶器官、血循环中，C x C L
2、l2 一C X C R 4 生物轴系统的表达存在组织特异性，且彼此问有相互协同的作用。方法( 1 ) 采用免疫组织化学方法检测大肠癌活检组织C X C R 4 、M M P 9 的分布、表达特点。( 2 ) 体外培养高肝脏转移的低分化大肠癌L 0 v O 细胞，利用流式细胞仪、划痕实验、T r a f l s w e l l 趋化、侵袭实验等方法分别检测细胞c x c R 4 受体的表达及细胞的运动、侵袭、趋化的变化，揭示外源性c x C L l 2 及其特异性受体拮抗剂A M D 3 】o o 对L O v o 细胞侵袭性、趋化性的影响。( 3 ) 建立大肠癌肝转移动物模型，利用免疫组织化学
3、、流式细胞仪技术、E L I s A 技术、半定量R T P C R 技术检测相应组织细胞受体的表达、配体蛋白含量及配受体m R N A 水平的表达变化，观察外源性c x C L l 2 及A M D 3 1 0 0 对大肠癌肝定向转移的在体影响。结果1 大肠癌活检标本高、中、低分化组C X C R 4 、M M P 一9 着色指数均较正常组明显升高函 是爨篱已矮e X e L l 2 唯一豹受髂，二褰豹穗互作用为C x c L l 2 一c x c R 4 生物信号高效定向传递奠定基础。c X c R 4 属于c x C受体家族，基因位予2 q 2 l ，檄R N A 约1 ? k b ，编
4、辑3 5 2 个氨罄酸，正鬻表达予静止、激活的淋巴细胞，粒纲胞，单核细胞及部分组织、问质细胞等，另外在红细胞的袭恧存在一嵇与c x c 乙1 2 相互结合的特殊形式受体，也被媸做丑I u 玲抗原i l i j 。从结构来讲，它应翔属于七次踌膜受体翘家族( S W ts u p e 墒m i l y ) 中的G 蛋白偶联受体。其七次跨膜均属于螺旋，N 端位于细胞膜外，c 端位于细藏膜痰，在T 麓D 疆、V 、疆c 【撩旋内具露保守静膀氮酸翘结，同对在细胞外与胞浆中存在3 个环链结构( L o ) 。与本组其它受体相比，c x c R 4 蛋鑫链是最爱戆，主要表理为N 螨、c 端、i 3 拜较麓。
5、i 3 区蜜含碱蛙鬣蘩酸荠磐有大量的正电荷，丽N 端明懿偏酸，带大量负电荷。另外在细胞的胞浆区有多个丝、苏氨羧磷酸亿潺节整点，目靖其表较多貔骧蕊缝合斑点l l ，受体分为鸯离亲合力、低亲合力受体。另外c x c R 4 具有较商的保守性，与小鼠c x C R 4耀跑具有7 2 的同源性。在众多的趋化缀予当中，基质来源趋纯因子e x c L l 2( S D F ) 与其受体C X c R 4 形成的生物轴系统是除B C A 1 与c X c R 5 、C x c L l 6与c x c R 6 外少数几个具有点对点定向傣号转导的趋化因子系统。C X C L l 2 e X c R 4 生物轴阻
6、嘲的发现为癌细胞定囱转移研究掇出了新的思路。萄前的研究主要集中在乳腺癌、前列腺癌、恶性黑色索癯等方顾【1 5 】。肝脏作为大l ?丕望堕赶盔堂垫主堑塞生堂垡适塞 肠癌定向转移的靶器官，具有很强的功能储备、应激反应性及器官问质可塑性。C x c L l 2 一C X C R 4 生物轴系统在大肠癌中如何发挥作用，以及作用的机制目前尚不十分清楚。因此本实验拟定从大肠癌肝转移角度来对其器官特异性转移进行初步的探讨。参考文献 1 】L i o t 七aL a n c e A A na n r a c t i V ef o r c ei nm e t a s t a s i s N a t u r e
7、，2 0 0 1 ，4 1 0 ( 6 8 2 4 ) ：2 4 2 5 2 】V i n c e n tT D e V i t a 主编徐从高杨兴季等主译癌一肿瘤学原理和实践第五版人民卫生出版社2 0 0 1 ：1 4 2 1 5 4 3 】金伯泉主编细胞和分子免疫学第二版北京：科学出版社2 0 0 1 ：1 8 7 一1 9 7 【4 】W r E 保罗著，吴玉章译基础免疫学第四版北京：科学出版社2 0 0 3 ：8 7 1 8 8 3 5 】余传霖主编分子免疫学第版上海医科大学出版社2 0 0 1 ：3 8 5 4 2 0 【6 】S a l c c i0 ，Y a oL ，v i l
8、l a l b aS ，e ta l ，R e g u l a t i o no fe n d o m e l i a lc e l lb 砌c h i n gm o r p h o g e n e s i sb ye n d o g e n o u sc h 锄o l 【i n es t m m a l d e r i v e df a c t o r - 1 B l o o d 2 0 0 2 ，9 9 ( 8 ) ：2 7 0 3 2 7 1 1 【7 K u l b eH ，L e V i n s o nN R ，B a l k w i l lF ，c ta 1 T h ec h e
9、m o k i n en e t w o r ki nc a n c e rm u c hm o r et h a nd i r e c t i n gc e l lm o v e m e n t I mJD e vB i 0 1 2 0 0 4 ，4 8 ( 5 6 ) ：4 8 9 4 8 】J u 唧zJ ，B e n d a l lL ，B r a d s t o c kK C h 锄o k i n e sa 1 1 dm e i rr e c e p t o r Sa st l l e r a p e u t i ct a r g P t s ：m er 0 1 eo ft h eS
10、 D F l C X C R 4a x i s C u f rP h a m lD e s 2 0 0 4 ，1 0 ( 1 1 ) ：1 2 4 5 一1 2 5 9 9 】w E 保罗著，吴玉章译基础免疫学第四版北京：科学出版社2 0 0 3 ：盯1 - 8 8 3 【1O 】B u s s oN ，w a 毋m 釉N ，H e r l i n gC ，e la 1 C i r c u l a t i n gc D 2 6i sn e g a t i v e l ya s s o c i a t e dw i t hi n n 锄m a t i o ni nh u m a I la n d
11、e x p e r i m e n t a la n t i s A mJP a m 0 1 2 0 0 5 ，16 6 ( 2 ) ：4 3 3 - 4 4 2 11 N i b b sR ，G r a l l 锄GR o tA c h e m o k i n e so nt 1 1 em o v e ：c o n h D lb ym ec h e m o k i n e】8霆堡医赘点堂堡：是竺塞生堂堡堡塞 “i 珏 e 托e p 鼢s ”糯鸷b l 删鲫翠a n t i g e na n d潞。s e m i nI m m 瑚1 0 1 2 0 0 3 ，1 5 ( 5 ) ：2 8 7
12、2 9 4 【1 2 】R o s s iD ，z l o t n j kA eb i o l o g yo f c h e m o k i n e sa n dt h e i rr e c e p t o r s A n n u R e l 搬m 黼o l t 2 0 0 0 ：，1 8 ：2 1 7 2 4 2 ， 1 3 】夔山趋化因子与肿瘸生长翔转移，临床肿瘤学杂志2 0 0 4 ，9 ( J ) ：】0 5 【1 4 】李彩霞s D F 一1 c X c R 4 的研究进展国外医学分子生物学分翡2 0 游，2 5 f 婶：3 6 7 0 6 争fl5 】c 捌t o nR 。c o
13、o p e r ，C 城s t o 沸e rH c ha y S 咖m a 王氐t o f s n v o l v e d 址n r o s l a t ec a r c l n o m am e t a s t a s i st ob o n e c a r c e r ( s u p p I ) 2 0 0 3 ，9 7 ( 3 ) ：7 3 9 7 4 7 ：一一蹇鎏蒌墅壅兰蓬圭塑塞兰笺燕篷壅第一部分C 船斛与_ P - 9 在大晒癌组织巾分搽及表达的特点疆豹：研究C X C R 4 譬M M P - 9 在太弱瘸缀织中的分布、表达特点，初步探讨C X c L l 2 一e X C R
14、4 生物辍系绞在大躲癌筑织中瓣佟嗣，鸯螽续髂豁、秘甥实验深入研究c x c L l 2 一C x c R 4 生物轴系统在大肠癌脏定向转移中的传用提供依掇。1 耪辩与方法1 1 稿藤及病理资料：由西省入民派院2 0 0 1 2 0 0 4 年8 6 蒯术后大肠瘸患者的临床及瘸理资瓣。鳃织分燮均菇繇辍貘上发来滚豫癌，其中罄状躲癌5 5 镶，嚣头状腺癌1 2 例，粘液腺瘀9 例，印戒细胞癌6 例，来分化癌4 例。舅女 E 例为1 2 6 ：1 ，最大年龄8 2 岁，晟小年龄2 6 岁，年龄中位数6 3 2 岁。病理组织分级：商分化2 5 例，中分化4 3 例，低分化1 8 例。1 2 实验方法：免
15、疫组织仡学方法染色：c x C R 4 与M M p 9 免液组纸化学试帮均购是媾士德生黪科按公司。1 3 判断标准：c x c R 4 与M M P - 9 在细胞膜或细胞浆中呈现棕黄色惹染颗粒作为阳性标准，部分瘤细胞c x c R 4 有胞核着色。着甑强度按着色深度分为阴性( ) 、弱阳性( + ) 、中赓阳谯( 十十) 、强阳性( + 十+ ) 。着色指数部日性百分数蓑色强度+ 拶】l 。4 数摄处遴积绞计分援：( 1 ) 4 0 l O 穆褪鹭下照糗选取5 个援鹭诗数着夔强度和着色百分数，利用公式：羞色指数= 阻性百分数染饿强度+ 1 ，姆着色指数作为免疫组织化学统计分析的综合指标。(
16、 2 ) 统计方法：利用S P S S l l O 统计软件包，通过方羞分析进行数据处理，P o 0 5 作为检验是否有统计学意义的界整。必津医科大学瞎士研究生学位论盅2 结莱免疫魏织他学维果：C x c R 4 和A M P - 9 阳性指征均为细胞浆中出现棕黄色 颗粒。正常臁道上皮组织中c x C R 4 、脚9 无表达。太粒癌组绞唾= lc x e R 4 、M M P * 9 的袭达均明显升离。随着大肠癌组织病理分级的降低，二者的表达均明显的增强，与对照组福眈及各分组闯有显著统计学潦义。结果见阐1 2 与表l ：陶l C X c 装4 奁大瑟癌绥胞中表达缮商，胞浆中见大量棕黄饿颗粒圈2 氧弧融9 在大粒癌缨藤孛表这瓒嘉，胞浆中见大凝棕黄色颗粒遘望堕熬杰堂竖：是望塞生登堡煎
