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1、1不同来源的粉葛中总黄酮和葛根素的含量测定作者：王春怡 杨方明 李卫民 高英【摘要 】 目的考察不同来源粉葛中总黄酮、葛根素的含量。方法采用紫外分光光度法（UV）测定总黄酮含量；采用高效液相色谱法（HPLC）测定葛根素含量，kromasil C18 色谱柱(4.6 mm250 nm， 5m)，流动相为甲醇水（ 33：67） ，流速为 1.0 mlmin-1，柱温 30，检测波长为 250 n m。结果总黄酮含量为0.53%1.03%，回收率为 99.69%，RSD2% (n = 6)；葛根素含量为 0.21%0.49%，回收率为 96.11%，RSD2% (n = 6)。结论不同来源的粉葛药材
2、中总黄酮和葛根素含量间变异较大，其中广东产粉葛，其总黄酮和葛根素含量均较高，平均质量优于广西产粉葛。 【关键词】 粉葛 总黄酮 葛根素 高效液相色谱粉葛为豆科植物甘葛藤 Pueraria thomsonii Benth 的干燥根，自古与野葛同作中药葛根用，具有解肌退热，生津，透疹，升阳止泻之功效1 ，临床应用广泛。 2005 年版中国药典首次将粉葛作为分列中药材记载。粉葛中的主要生物活性成分有葛根素等异黄酮类化合物2 ，具有降血压、扩张冠状动脉等多种生物活性，2同时粉葛又富含淀粉，因此具有较高的医用和食用价值，现已开发出粉葛淀粉系列多种保健食品。目前，粉葛的栽培面积不断扩大，并出现了许多栽培品
3、种，因此不同来源药材之间有效生物活性成分的含量会有较显著的差异，从而影响药材质量。广东、广西为粉葛药材的主要产地，药源丰富，本文采用比色法及高效液相色谱法对广东、广西所产的不同来源的粉葛中总黄酮及葛根素的含量进行了比较，为粉葛药材质量控制提供实验依据。1 仪器与材料1.1 仪器 P680 高效液相色谱仪(戴安公司 )； satorius BS 110S 精密天平；unic uv-2100 紫外分光光度计（尤尼柯上海仪器有限公司） 。1.2 药材粉葛，产地：广东、广西，经广州中医药大学中药鉴定教研室鉴定，均为豆科植物甘葛藤的干燥根。 （来源见表 1）1.3 试药葛根素标准品（中国药品生物碱制品检
4、定所，批号110752-200511） 。甲醇（色谱纯，德国 Merck 公司） ，乙醇（分析纯，天津大茂化学试剂厂） ，水为高纯水。2 方法与结果32.1 UV 法测定不同来源粉葛中总黄酮的含量2.1.1 溶液的制备对照品溶液的制备：精密称取 80干燥至恒重的葛根素对照品5.0 mg，置 25 ml 容量瓶中，用 95乙醇溶解并稀释至刻度。供试品溶液的制备：取不同来源粉葛粉末（过三号筛）约 1.0 g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入 30乙醇 100 ml，称定重量，加热回流 30 min，放冷，再称定重量，用 30乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液 1ml 置 10 ml 容量瓶中，
5、用 30乙醇定容，即得。检测波长的选择：取对照品溶液 1.0 ml 置 10 ml 的容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀，在 200800 nm 波长范围内测定葛根素的紫外吸收光谱，结果显示在 250 nm 处有最大吸收。另取供试品溶液在 200800 nm 波长范围内测定紫外吸收光谱，结果也显示250 nm 处有最大吸收，所以选择 250 nm 为检测波长。2.1.2 线性关系考察精密量取对照品溶液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 ml，分别置 10 ml 容量瓶中，并各加495乙醇至 1 ml，再加蒸馏水至 10 ml，摇匀，以 1.0 ml 95的乙醇加蒸馏水至 10 ml 的溶液为空
6、白对照，于 250 nm 测定吸光度。以葛根素含量为横坐标（X） ，吸光度为纵坐标(Y)，绘制标准曲线，得回归方程 Y=75.45X0.01，r=0.999 9。结果显示，葛根素对照品在 0.040.2mg 内线性关系良好。2.1.3 精密度试验取同一浓度的葛根素对照品溶液，重复测定 5次，吸光度平均值为 0.592，RSD 为 0.09，表明仪器精密度良好。2.1.4 稳定性试验取同一样品溶液，在 0，2，4 ，12 ，24 h 测定，吸光度平均值为 0.690， RSD 为 0.22，表明本品 24 h 内具有良好的稳定性。2.1.5 重复性试验取同一批次的粉葛药材 6 份，按供试品溶液制
7、备方法制成样品测定，测得样品葛根素含量平均值为 0.93，RSD为 0.49%，表明本法具有良好的重复性。2.1.6 准确度试验称取 6 份已知葛根素含量的粉葛药材粉末 1.00 g，加入对照品约 1.0mg，按供试品溶液制备方法制成样品，测得平均回收率为 99.69%，RSD 为 1.8%，表明总黄酮回收率良好。2.1.7 样品总黄酮含量测定取各来源的粉葛药材 3 份，精密称定51.0 g，按供试品溶液制备方法制成样品，依法测定。结果表明，广州市清平药材市场所售广东产粉葛总黄酮含量均较高，可达1.03，平均质量优于广西产粉葛。见表 1。2.2 HPLC 法测定不同来源粉葛中葛根素的含量2.2
8、.1 色谱条件色谱柱为 kromasil C18 色谱柱(4.6 mm250 mm，5 m)；柱温：30；流动相：甲醇水 (33：67) ；检测波长 250 nm；流速：1.0 mlmin-1；理论板数按葛根素计算不低于4 000。见图 1,2。图 1 葛根素对照品溶液 HPLC 色谱图图 2 粉葛药材溶液 HPLC 色谱图2.2.2 溶液的制备对照品溶液的制备：精密称取葛根素对照品5.0 mg，置 25 ml 容量瓶中，加 30%乙醇至刻度，摇匀，即得 0.2 mg/ml 对照品储备液。供试品溶液的制备：取不同来源粉葛粉末（过 3 号筛）约 0.8 g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入 30乙
9、醇 50 ml，称定重量，加热回流 30 min，放冷，再称定重量，用 30乙醇补足减失的重6量，摇匀，滤过，取续滤液，过 0.45m 微孔滤膜，即得。2.2.3 线性关系考察精密量取对照品溶液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 ，3.0 ，4.0 ml，置 10 ml 容量瓶中，加30%乙醇定容，摇匀，分别吸取上述各浓度对照品溶液 20l，依次注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，以葛根素含量为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)，绘制标准曲线，得回归方程：Y=1464.5X-0.678 6，r=0.999 9。结果表明葛根素在 0.21.6g 内呈良好的线性关系。2.2.4 精密度试验精密
10、吸取同一对照品溶液 20l，重复进样 5 次，测定峰面积平均值为 57.69，RSD 为 0.61，表明仪器精密度良好。2.2.5 稳定性试验精密吸取同一样品溶液 20 l，分别于0，2 ，4 ， 24，36 h 测定，结果显示各时段峰面积平均值为57.07，RSD 为 1.40，表明本品 36h 内稳定性良好。2.2.6 重复性试验取同一来源的粉葛 6 份，分别独立按供试品溶液制备方法制成样品溶液，在上述色谱条件下测定，测得的平均含量为 0.23，RSD 为 1.40，表明本法重复性良好。2.2.7 准确度试验精密称取 6 份已知葛根素含量的同一样品粉末约 0.8g，并加入一定量的对照品，按
11、供试品溶液制备方法制成样品7溶液，精密吸取 20l，在上述色谱条件下测定，计算回收率。结果显示平均回收率为 96.11，RSD 为 1.09%，表明葛根素回收率良好。2.2.8 样品含量测定取不同来源的粉葛，精密称定 0.8g，按供试品溶液制备的方法处理，在上述色谱条件下测定。结果显示，广州市清平药材市场所售广东产粉葛，除个别不符合药典要求，其余药材葛根素的含量均较高，可达 0.49，平均质量优于广西产粉葛。见表 1。表 1 不同来源粉葛中总黄酮和葛根素含量测定结果3 讨论文献报道了多种提取葛根总黄酮的方法，如索氏提取、超声提取和加热回流等35 ，本研究对不同提取方法及不同醇浓度提取总黄酮进行
12、比较，结果以 30乙醇加热回流提取所得总黄酮含量最高，故选用该法作为总黄酮的提取方法。曾选用 2005 版中国药典规定的甲醇水(25:75)为流动相，结果保留时间较长，可达 20min，通过优化选择，以流动相甲醇水(33:67)的分离效果较好，样品主峰达到良好的基线分离，峰形良好，且保留时间大大缩短。经方法学考察，表明该方法具有较好的精密度、稳定性、重现性和准确性，可用于粉葛药材的质量控制。8上述 7 种不同来源的粉葛药材中总黄酮和葛根素含量参差不齐，但两者变化是同向的，其中广州市清平药材市场所售广东产粉葛，其总黄酮和葛根素含量均较高，平均质量优于广西产粉葛。【参考文献】 1 国家药典委员会中国药典，部S.北京：人民卫生出版社，2005：203.2 田宏哲,王 华, 关亚风. 液质联用分析葛根提取物及中药片剂中异黄酮类化合物J.色谱, 2005, 23 (5) : 477.3 李青坡，王永圣，游 剑，等. 葛根总异黄酮提取工艺的研究J. 中国药业，2004，13（5）：46.4 周文斌 . 葛根总黄酮提取工艺条件的研究J . 渝州大学学报（自然科学版） ，2002，19（4）：9.5 安伟建，夏光成，郭 瑞. 不同产地葛根总黄酮含量的比较J. 中国中药杂志，1999，24（6）：339.
