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1、发酵液中效价检测方法优化课题 发表QC小组名称： 质量检验部104质检组QC小组 发酵液中效价检测方法优化 课题发表w课题名称： w w发酵液中效价检测方法的优化 中润公司发酵液中效价检测 方法优化课题发表wQC小组简介： w1、小组介绍： w本组成立于2008年1月15日，注册编 号为ZJ-08-01-01 ，课题活动起始时 间2008年2月到2008年8月。 w2、小组成员介绍：中润公司发酵液中效价检测 方法优化课题发表成员姓名性别年龄 文化程度组内职务1齐雁红女33本科技术指导2张敏然女37本科组长3谭彦静女36专科组员 4解晓炎女43专科组员5翟玉慧女32专科组员6韩金春女25专科组员
2、中润公司发酵液中效价检测 方法优化课题发表w一、立题背景： w我们现检测发酵液中青霉素效价的方 法，是化学滴定法（碘量法）。检测 间隔为每四小时检测一批，每批检测 14-18个罐，每罐要做空白校正，每 批检测时间在3个小时左右，涉及使 用试剂五种，检测单个样品需45分钟 左右。为此成立课题小组，对发酵液 中青霉素效价检测的方法进行优化。中润公司发酵液中效价检测 方法优化课题发表w二、现状调查： w1、检测需要的时间（一批按10罐 计算）：步骤稀释取样加溶液反应时间滴定计算 所需时间 15min10min10min40min30min5min共计时间110min中润公司发酵液中效价检测 方法优化
3、课题发表w 2、检验准确度：在检测过程中要加入四 种试液，最后用标准滴定液滴定，各环节 都会存在某些误差，从而降低了检测结果 的准确度。中润公司发酵液中效价检测 方法优化课题发表w 三、实现目标： w 利用液相替代碘量法检测发酵液中效价， 缩短检测时间，提高检验准确度，降低人 力成本。 中润公司发酵液中效价检测 方法优化课题发表w 四、原因分析： w 1、完整的青霉素分子是不能与碘起作用 的，加入碱破坏青霉素分子的内酰胺环使 之生成青霉噻唑酸，反应时间需要20分钟 ；青霉噻唑酸与碘密封避光反应时间需要 20分钟,这两个反应的用时占整个检测过程 用时的1/3。中润公司发酵液中效价检测 方法优化课
4、题发表w 2、检验中人员的操作、读数等环节存在 误差中润公司发酵液中效价检测 方法优化课题发表w 五、方法优化的思路： w 1、将检测青霉素效价的化学滴定法改用HPLC法。 w 2、 HPLC法检测一个样品只需9分钟左右，而且样品中 的其它相关杂质也能在图谱中看到，更能进一步对发酵 液中相关杂质进行研究分析。 w 3、在仪器已经确认，校正并在有效期内的情况下，进 行系统性试验和分析方法的验证，确保分析结果的准确 性。 w 4、对10批放罐效价进行检测,积累检测数据，并对图谱 进行分析。中润公司发酵液中效价检测 方法优化课题发表w 六、方法优化的实施： w 1、系统性试验 w 1.1、重复性实验
5、测定 w 1.1.1、对照品1五针重复性实验（见附表1 ） w 称取标准品 33.40mg,连续进样五次，所得色谱信息见 表中润公司发酵液中效价检测 方法优化课题发表进样次数保留时间峰面积面积平均值RSDRSD标准 16.9754978.654934.970.89% 2%26.9784959.9536.9724900.1246.9774877.1756.9784958.98中润公司发酵液中效价检测 方法优化课题发表w 1.1.2、对照品2两针重复性实验（见附表2 ） w 称取标准品34.00mg 溶于250ml容量瓶中，摇匀后连续进样五次，结 果见附表2 w 附表2进样次数保留时间峰面积面积平
6、均值RSDRSD标准16.9775003.47 5014.080.30% 2%26.9775024.69中润公司发酵液中效价检测 方法优化课题发表w 1.2、各分离参数的测定 w 向对照品1中加入0.2mg的2-苯乙酰胺混匀 后进样，结果见附表3 w 附表3 参数名称理论塔板数分离度拖尾因子 结果153123.670.995 标准1600 2.01.5 判断合格合格合格中润公司发酵液中效价检测 方法优化课题发表w 通过检测根据表中的结果显示，系统适用 性试验合格 w 2、分析方法验证 w 2.1、方法验证方案的依据 w 采用2005版中国药典中所载方法进行 检验，对现行的方法进行验证。中润公司
7、发酵液中效价检测 方法优化课题发表w 2.2、按照分析方法验证方案实施验证 w 2.2.1、专属性 w 将0.506（mg/ml)浓度青霉素G的对照品溶 液分别注入HPLC中，进行样品定性工作取 0.506（mg/ml)青霉素G 1ml于同一100ml容量 瓶中用纯化水稀释至刻度摇匀，取20ul注入 HPLC中取滤后发酵液样品1ml于100ml容量瓶 中用纯化水稀释至刻度摇匀，取20ul注入HPLC 中，测定各组分能否完全分离。分离度R1.5.结 果见表一中润公司发酵液中效价检测 方法优化课题发表w 表一标准溶液 样品溶液 保留时间 （min）分离度 （R） 保留时间（ min）分离度 （R）
8、青霉素8.668 3.028.531 2.98标准 R1.5 中润公司发酵液中效价检测 方法优化课题发表w 2.2.2、线性 w 1、取50mg青霉素G对照品于 100 ml容量瓶中， 用纯化水定容至刻度摇匀为A；2、分别吸取 0.1ml、0.3ml、0.5ml、0.7ml、0.9ml、1.0ml、 1.2ml、1.4ml储备液A置于100ml容量瓶中，用纯 化水定容至刻度摇匀。即得浓度分别为0.0005、 0.0015、0.0025、0.0035、0.0045、0.005、0.006 、0.007mg/ml 的溶液，取20ul注入HPLC中记录 峰面积。中润公司发酵液中效价检测 方法优化课题
9、发表w 表二：青霉素G欲配制浓度(mg/mL) 实际浓度 (mg/mL) 峰面积0.0005 0.0005065832 0.00150.001518 11232 0.00250.00253 16632 0.00350.003542 22035 0.00450.004554 27418 中润公司发酵液中效价检测 方法优化课题发表0.005 0.00506 32814 0.006 0.006078238214 0.007 0.007098443625 线性方程Y = 1.31007E+007 * X + 3135.25 相关系数r= 1 标准r 0.99 中润公司发酵液中效价检测 方法优化课题发表
10、w 2.2.3、准确度 w 称取青霉素G 对照品50mg，于100ml容量瓶中 ，加纯化水定容至刻度摇匀，作为对照品储备 液A。吸取对照品储备液A 1ml于100ml容量瓶 中，加纯化水溶解并稀释到刻度摇匀，取20ul注 入HPLC中。取样品1ml三份，分别于100ml容 量瓶中，加纯化水溶解并定容至刻度摇匀。 取样品1ml九份三组（C1、C2、C3为第一组； C4、C5、C6为第二组；C7、C8、C9为第三组 ），于中润公司发酵液中效价检测 方法优化课题发表w 100ml容量瓶中，加纯化水定容至刻度 摇匀。再吸取对照品储备液A溶液0.8 ml 于第一组溶液、1.0 ml于第二组溶液、1.2
11、ml于第三组溶液中，最后，加纯化水定容 至刻度摇匀。分别将上述十二个样品溶液及 对照品溶液经0.45um的滤膜过滤，注入高效液 相色谱仪中，计算回收率。结果见表四中润公司发酵液中效价检测 方法优化课题发表w 表四实际加入量(mg) 名称 样品中已知量 (mg)回收量 (mg) 回收率 (%) 40.48C12.0373 2.4834 101.69 C22.0517 2.4909 101.40 C32.0519 2.0636 84.00 中润公司发酵液中效价检测 方法优化课题发表50.6 C40.5062.6280 102.75 C50.5062.6334 102.96C60.5062.6272
12、 102.7150.6C70.60722.7271 102.56C80.60722.7267 102.55C90.60722.7778 104.47中润公司发酵液中效价检测 方法优化课题发表RSD8.00%平均回收率100.57标准80%-120%中润公司发酵液中效价检测 方法优化课题发表w 2.2.4、精密度 w 2.2.4.1、系统精密度:称取50mg青霉素G对照 品于100ml容量瓶中加纯化水定容至刻度摇匀为 A；精密吸取A溶液1ml于100ml容量瓶中加纯 化水稀释至刻度摇匀；重复进样六次,测定峰 面积,结果峰面积平行性 较好 ,青霉素G峰面积 RSD为 1.27 验证仪器性能是否良好
13、,结 果见表五 中润公司发酵液中效价检测 方法优化课题发表进样次数峰面积147790247417348948448165548289中润公司发酵液中效价检测 方法优化课题发表647293RSD1.27%标准RSD 10%中润公司发酵液中效价检测 方法优化课题发表w 2.2.4.2、方法精密度：重复性：取同一罐号样 品6份(样品罐号为405/192），取滤后样品1ml于 100ml容量瓶中加纯化水定容至刻度摇匀；平 行测定6次, 计算结果的RSD，青霉素G的RSD值 %验证方法重复性是否良好。验证方法重复性是否 良好。结果见表七。中润公司发酵液中效价检测 方法优化课题发表编号取样量（ml）面积1
14、1726072172100317250741716935170585中润公司发酵液中效价检测 方法优化课题发表6169776平均值-71544.67RSD-1.59%标准RSD 10%中润公司发酵液中效价检测方法 优化课题发表w 2.2.5、耐用性：w 制备同一罐号（412/193）的样品溶液,取1ml滤后样品 溶液于100ml容量瓶中加纯化水定容至刻度摇匀。每 隔1小时测定一次，连续测定5次。 结果青霉素G的峰 面积的RSD为 , 验证溶液的稳定性是否良好, 结果如表八中润公司发酵液中效价检测方法 优化课题发表时间峰面积14865508 24665744 34484700 中润公司发酵液中效价检测方法 优化课题发表44146635 54161725 RSD 7.03% 标准 RSD10% 中润公司发酵液中效价检测方法 优化课题发表w 七、结论： w 通过以上分析方法验证，结果表明此方法 适用发酵液中青霉素效价的测定w汇报完毕谢谢大家
