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1、蛋白电泳技术的临床应用蛋白电泳技术和多发性骨髓瘤简介使用范围n电泳技术就是利用 在电场作用下，由 于待分离样本中各 种分子带电性质以 及分子的大小，形 状等性质的差异， 使带电分子产生不 同的迁移速度，从 而对样本进行分离 、鉴定和提纯的技 术。n在生化检测中常用于 分离各种蛋白质！*市中心医院检验科生化室发展历史和常用 类型n滤纸电泳n醋酸纤维膜电泳n凝胶电泳1、琼脂糖凝胶电泳2、聚丙烯酰胺凝胶 电泳n毛细血管电泳*市中心医院检验科生化室 1809年俄国科学家列伊斯 发现电泳现象 1937年瑞典Tiselius建立 界面电泳技术，首次证明 血清是由白带白和球蛋白 组成，1948年获得诺贝尔
2、化学奖 1950年后，区带电泳发展 到成熟 1980年以来，毛细管电泳 逐渐被重视电泳技术 在临床中应用n急、慢性疾病n造血系统疾病：多 发性骨髓瘤、巨球 蛋白血症n肝脏疾病n肾脏疾病n中枢神经系统疾病 ：多发性硬化症n遗传性疾病：地中海 贫血n代谢性疾病：糖尿病n心血管疾病：心梗、 动脉硬化n恶性肿瘤n。*市中心医院检验科生化室1.什么情况下必须进行电泳检测？n总蛋白异常升高或异常下降nA/G比例变化n血液沉降速度发生异常变化n出现恶性疾病征兆n在免疫球蛋白定量检测中发现 某一种免疫球蛋 白出现大量异常增加*市中心医院检验科生化室操作步骤-仪器和电泳胶片准备*市中心医院检验科生化室操作步骤-
3、挂缓冲条和电泳胶片*市中心医院检验科生化室操作步骤-点样*市中心医院检验科生化室操作步骤-选择电泳类型*市中心医院检验科生化室操作步骤-烘干染色*市中心医院检验科生化室操作步骤-扫描*市中心医院检验科生化室电泳结果*市中心医院检验科生化室2.血清蛋白电泳看的是什么？n含量的变化 : 条带中蛋白含量增或减n 基于蛋白含量的变化, 有助于我们对以下疾病的筛 查 :炎症 、营养不良、肺气肿等n性质的变化 :异常条带的出现n对异常条带的筛查,有助于我们检测下列疾病:骨髓 瘤、巨球蛋白血症、细菌和病毒感染等n*在这些情况下, 必须要做其他辅助测试, 比如说免 疫固定, 使用不同类型的抗血清对异常蛋白进行
4、检 测. (对于后期治疗有很重要的指导意义)*市中心医院检验科生化室血清蛋白电泳简介n血清蛋白电泳可以对血清 或其他体液中的异常蛋白 质进行筛选 。n血清蛋白质在碱性条件下 主要根据其所带电荷数将 其分离成五种片段：白蛋 白,1球蛋白、2球蛋白、 球蛋白、球蛋白、每一区 带含有一种或多种血清蛋 白质。*市中心医院检验科生化室血清蛋白电泳简介*市中心医院检验科生化室血清蛋白成分简介白蛋白n白蛋白（Alb）由肝实质细 胞合成，分子量6.64万，等 电点45.8，半寿期（15 19天，占血浆总蛋白的40% 60。血浆白蛋白浓度可以 受饮食中蛋白质摄入的影响 ，在一定程度上可以作为个 体营养状态的评价
5、指标，有 较广泛的载体功能。正常参 考值：3550g/L。n血浆白蛋白增高较少见，在 严重失水时，对监测血浓缩 有诊断意义。n低白蛋白血症，可见于：n合成减低：急、慢性肝病。n营养不良或吸收不良。n遗传性缺陷：无白蛋白血症。n组织损伤（手术或创伤）或炎 症（感染性疾病）引起的白蛋 白分解增加。n异常丢失：如肾病综合征、慢 性肾小球肾炎、糖尿病、系统 性红斑狼疮、溃疡性结肠炎、 肿瘤、烧伤所致渗出性皮炎。n分布异常：如门脉高压时，大 量蛋白质从血管内渗入腹腔。*市中心医院检验科生化室血清蛋白成分简介 1区n1-抗胰蛋白酶（AAT）是具有蛋白酶抑制作用的一种急性时相反 应蛋白，分子量为5.5万，等
6、电点4.8，半寿期4天，电泳中位与1 区带，是这一区带的主要组分。低血浆AAT可以发现于胎儿呼吸窘 迫综合症，AAT先天缺陷易导致肺气肿和肝硬化。n1-酸性糖蛋白（AAG）早期称之为乳清类粘蛋白，分子量4万，等 电点2.73.5，半寿期5天，电泳位于1区带。AAG是主要的急性 时相反应蛋白，在急性炎症时增高，在风湿病、恶性肿瘤及心肌梗 死患者亦常增高，在营养不良、严重肝损害等情况下降低。n1-脂蛋白 分子量20万。在严重肝病如肝硬化时明显降低，妊娠 及高雌激素血症时可轻度增加。n甲胎蛋白（AFP）主要在胎儿肝脏中合成，分子量6.9万，电泳位于 1区带。在成人AFP可以在大约80%的肝癌患者血清
7、中升高，在生 殖细胞肿瘤出现AFP阳性率为50%，在其他肠胃管肿瘤如胰腺癌或肺 癌及肝硬化等患者亦可出现不同程度的升高。*市中心医院检验科生化室血清蛋白成分简介 1区n此区显色的条带主要是： 1- 抗胰蛋白酶n在一些肺病是情况下，1-抗 胰蛋白酶下降，有的时候缺如n在某些严重创伤后，此区可出 现明显高峰，同时1-抗胰蛋 白酶也增高n注意：1. 1-抗胰蛋白酶偶尔出现双 峰，它预示着既有单克隆抗体 成分又有1-抗胰蛋白酶的改 变。2.一些罕见的病例中，此区带 会出现另一个较宽的峰，它其 实可能有甲胎蛋白的出现*市中心医院检验科生化室血清蛋白成分简介 2区n结合珠蛋白（HP）在血浆中与游离的血红蛋
8、白结合，是一种急性时 相反应蛋白，分子量8.540万，等电点4.1，半寿期2天，电泳位 于2区带。急性时相反应中血浆HP增加，当烧伤和肾病综合症引 起大量白蛋白丢失的情况下亦可见增加。血管内溶血和溶血性贫血 、输血反应、疟疾时HP含量明显下降。此外，严重肝病患者HP的合 成降低。n2-巨球蛋白（AMG）是血浆中分子量最大的蛋白质，是由肝细胞 与单核吞噬细胞系统中合成，分子量为62.580万，等电点5.4， 半寿期5天，但当与蛋白水解酶结合为复合物后其清除率加速。在 低蛋白血症时2MG含量可增高，可能系一种代偿机制以保持血浆 胶体渗透压。妊娠及口服避孕药时血浓度增高，机制不明。n铜蓝蛋白（CER
9、）是一种含铜的2糖蛋白，分子量1216万，等电 点4.4，半寿期4.5天，CER也属于一种急性时相反应蛋白。在感染 、创伤和肿瘤时血浆CER增加，在营养不良、严重肝病及肾病综合 症时CER往往下降。妊娠期、口服避孕药时其含量有明显增加。该 蛋白最特殊作用在于协助Wilson病的诊断，既患者血浆CER含量明 显下降，而拌有血浆可透析的铜含量增加。*市中心医院检验科生化室血清蛋白成分简介 2区n此区主要是2-巨球 蛋白和结合珠蛋白n2-巨球蛋白增高见 于肾病综合征和急性 炎症，减低见于肝病 导致的丢失、类风湿 性关节炎和骨髓瘤n结合珠蛋白增高见于 急慢性炎症、外科手 术、心肌梗死。减低 见于溶血性
10、贫血和肝 病等*市中心医院检验科生化室血清蛋白成分简介 1区n转铁蛋白（TRF）是血浆中主要的含铁蛋白质，分子量7.7万，等电 点5.7，半寿期7天，点泳位于1区带。血浆中TRF水平可用于贫血 的诊断和对治疗的监测。TRF在急性时相反应中往往降低。因此在 炎症恶性病变时常随着白蛋白和前白蛋白同时下降，在慢性肝病及 营养不良时亦下降，可作为营养状态的一项指标。妊娠及口服避孕 药或雌激素注射可使血浆TRF升高。n血红素结合蛋白（Hpx）分子量为5.7万。和游离血红素有特异结合 能力，可配合结合珠蛋白对血红蛋白进行处理。当广泛溶血时，血 浆结合珠蛋白耗竭，循环中游离的血红可降解为珠蛋白和血红素两 部
11、分，Hp可与血红素可逆结合，而在血循环中反复利用，这是机体 有效地保存铁的又一种方式。n-脂蛋白：分子量300万。主要功能脂类的运输。肾病患者或某些 肠道疾病患者，常见导致血浆蛋白丢失，由于肝细胞补偿性的合成 增加，-脂蛋白可有增加。n C4：补体成分，分子量20.6，属急性时相反应蛋白之一，在炎症、创伤、心肌梗死、感染、肿瘤等情况下可见升高。 *市中心医院检验科生化室血清蛋白成分简介 2区n 纤维蛋白原：分子量34万，半寿期2.5天，等 电点5.5，。纤维蛋白的前身参与凝血。也是急 性时相蛋白之一，当机体处于炎症或损伤状态 时纤维蛋白原可见增加。n C3：补体系统，属急性时相蛋白。分子量18
12、 万。急性炎症时可见上升，肝脏疾病时由于肝 细胞损害而偏低。n 2-微球蛋白（BMG）分子量1.18万。在肾功 能衰竭、炎症及肿瘤时，血浆中浓度可升高。 在白血病和淋巴瘤有神经系统浸润时，脑脊液 中BMG可增高。 *市中心医院检验科生化室血清蛋白成分简介区 nIgG:抗体组分之一，分子量16万，等电点67.3，半寿 期24天。 肝硬化时IgG弥散性增高，风湿病IgG可见增高 ，而选择性蛋白质丢失和妊娠期及高雌激素血症时IgG略 有降低。nIgA：抗体组分之一，分子量17万，半寿期6天。肝硬化 和风湿病时表IgA明显升高。nIgM:抗体组分之一，分子量90万，半寿期5天。选择性蛋 白丢失时IgM
13、增加，风湿病及肝病初期IgM可增加nC-反应蛋白（CRP）：分子量12万，等电点6.2。是急性 时反应蛋白的敏感指标，血浆中CRP浓度在急性心肌梗死 、创伤、感染、炎症、外科手术、肿瘤浸润时迅速显著 增高，可达正常水平的2000倍。结合临床病史，有助于 随访病程。特别在炎症过程中，随访风湿病、系统性红 斑狼疮、白血病等。*市中心医院检验科生化室血清蛋白异常成分简介M蛋白nM蛋白疾病是由于 单一克隆浆细胞 无线增值产生的 均一单克隆蛋白 （Monoclonal- peoteins）所导 致的一种疾病。nM蛋白疾病的M的意 义是Myeloma、 Macroglobulinemia、 Maligna
14、t Lymphoma、 Monoclonal Gammapathies均以 ”M”开头。nM蛋白在电泳上表现 的为高而狭窄的峰。*市中心医院检验科生化室血清蛋白电泳图谱*市中心医院检验科生化室白蛋白11球蛋白区球蛋白区22球蛋白区球蛋白区球蛋白区球蛋白区血清蛋白电泳图谱正常sebia质控*市中心医院检验科生化室异常血清蛋白电泳图谱-双白蛋白n特点是出现双的白带白的区带，一般认为是遗传因素（ 现已经发现若干个家族显性遗传）和大剂量抗生素 *市中心医院检验科生化室异常血清蛋白电泳图谱-无白蛋白n特点是白带白的区带明显减少，血清含量低于1%，一 般患者无症状 *市中心医院检验科生化室异常血清蛋白电泳
15、-急性炎症或应激n主要特征 ：Alb减少 或正常， 1、2-球 蛋白增高 ，-球蛋白 增高不明 显，当炎 症转为慢 性时，可 明显增加 。*市中心医院检验科生化室异常血清蛋白电泳-肾病型n主要特征： Alb明显降低，1-球蛋白轻度增加，2-球蛋白明 显增加，-球蛋白降低、正常或增高。n小儿类脂样肾病时，-球蛋白可降低，有时可降低至零；n成人肾病综合症时，-球蛋白通常增加，特别是狼疮性肾病。*市中心医院检验科生化室异常血清蛋白电泳-弥漫性肝损伤型n主要特征： Alb明显降低, 1-球蛋白在轻度时可略增加，但肝细胞 破坏严重时，则1、2和球蛋白通常均降低，在胆汁郁积性肝炎 时，2和球蛋白可增高，-
16、球蛋白轻度或中度增高。*市中心医院检验科生化室异常血清蛋白电泳-肝硬化型主要特征： Alb均有不同程度的降低，1、2和球蛋白 正常或降低，-G明显增高且宽度增加，可见-桥。*市中心医院检验科生化室异常血清蛋白电泳-原发性肝癌n主要特征： 在Alb 与1-球蛋 白之间出 现一小的 区带，称 为甲胎蛋 白带。n本项目试 验精确地 的限制这个AFP区 带很难分 清，需要 用高分辨 染色*市中心医院检验科生化室异常血清蛋白电泳宽幅球蛋白血症n主要特征： -G的宽度明显增加，呈宽幅高峰。*市中心医院检验科生化室异常血清蛋白电泳-M蛋白n主要特征：M蛋白又叫异常免疫球蛋白，其区带宽度与 Alb带大致相等或较其狭窄，常分布在2至慢-G部位*市中心医院检验科生化室血清蛋白电泳影响因素-溶血*市中心医院检验科生化室血清蛋白电泳影响因素-血
