《接枝MPC钛板联合外周使用青霉素对菌膜形成的动物实验研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《接枝MPC钛板联合外周使用青霉素对菌膜形成的动物实验研究（63页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、个人简介王鹏飞1 9 8 5 年1 1 月出生科学学位研究生2 0 1 0 年7 月毕业于滨州医学院临床医学系2 0 1 0 年9 月考入徐州医学院，攻读骨科学硕士学位三年内完成了科学学位硕士研究生要求的所有学习内容共修学分3 2 5 分完成了学位课题研究圆满完成了1 2 个月的临床培训撰写学术论文及综述文章共4 篇，己发表1 篇目录缩略词表1中文摘要2英文摘要4前言6材料和方法1 01 材料1 02 方法1 4结果1 9讨论3 3结论3 9参考文献4 l综述4 5攻读硕士学位期间发表学术论文题目5 6临床培训小结5 7致谢5 9论文声明6 0论文审阅认定书6 1缩略词B B FC L S M
2、C F UD M S O徐州医学院硕士学位论文b a c t e r i a lb i o f i l m缩略词表A b b r e v i a t i o n中文全称细菌生物膜c o n f o c a ll a s e rs c a n n i n gm i c r o s c o p e激光共聚焦显微镜C o l o n yf o r m i n gu n i t sD i m e t h y ls u l f o x i d e菌落形成单位二甲基亚砜F I T C C o m aC o n c a n a v a l i nA m a r k e dw i t hL u r e s c
3、 e i n异硫氰酸荧光素标记的刀豆蛋白AK H 5 5 0Mm MM P CP B SP IT S BS a u r e u sUlUMG a m i n op r o p y l yt r i e t h o x ys i l a n em o l 1 i t e rm i l i m o l l i t e r2 - M e t h a c r y l o y l o x y e t h y lP h o s p h o r y l c h o l i np h o s p h a t eb u f f e r e ds a l i n ep r o p i d i u m i o d
4、i d et y p t o n es o y ab r o t hS t a p h y l o c o c c u sa u r e u sm i c r o l i t e rm i c r o m o l l i t e rg 一氨基丙基- - - 7 , 氧基硅烷摩尔浓度毫摩尔浓度2 甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱磷酸盐缓冲液碘化丙啶胰蛋白胨大豆培养肉汤金黄色葡萄球菌微升微摩尔浓度徐州医学院硕士学位论文接枝M P C 钛板联合外周使用青霉素对菌膜形成的动物实验研究中文摘要目的通过动物实验来验证在体内环境中接枝M P C 的钛板联合外周使用青霉素是否具有进一步增强M P C 对细菌生物膜形成
5、的抑制作用及M P C 抗细菌黏附的程度。方法取直径为l c m 厚度为0 8 m m 的圆形医用钛板8 6 枚随机分成两组，每组4 3枚，其中一组经一系列化学接枝方法将M P C 接枝到医用钛板表面，另外一组4 3枚钛板不接枝，将这8 6 枚医用钛板分别置入随机分配好的四组每组7 只的健康成年S D 级大鼠( 雌雄不限) 的背部肌肉组织中，A 组接枝M P C 的钛板联合使用青霉素、B 组接枝M P C 的钛板未使用青霉素、C 组未接枝M P C 的钛板使用青霉素、D 组未接枝M P C 的钛板未使用青霉素组四个组，每只大鼠体内放置相应的3 枚钛板；同时将事先培养好的标准金黄色葡萄球菌配成1
6、 0 7C F U m l 数量级悬浊液在手术过程中分别注入医用钛板周围软组织中，使其塑造一个局部感染模型，按时注射青霉素或生理盐水，由于生物膜形成时间为1 2 天，手术后2 4 小时在每组中随机处死一只大鼠取出医用钛板一枚用扫描电子显微镜( S E M ) 观察细菌粘附数量及生物膜形态，一枚用通过刀豆球蛋白碘化丙啶( F I T C C o n A P I ) 进行胞外多糖及细胞核双染色激光共聚焦显微镜( C L S M ) 观察生物膜形态；4 8 小时后将剩余的大鼠全部处死，取出的每只大鼠体内的3 枚钛板1 枚用C L S M 观察生物膜生长情况；1 枚用S E M 观察生物膜形态，1 枚
7、超声洗涤浮游菌，培养2 4 小时后测其活菌数量行统计学分析。结果l 、在S E M 下接枝M P C 后的钛板表面较未接枝者更光滑、平坦；在相同的时间段相同的高倍视野下细菌粘附数量变化为A 组 0 0 5 ) ，其余各组间均有统计学意义( p I 0 0 5 与C 组比较。于O 0 5分蠢t氍链举o 毒c图8各组4 8 小时细菌生物膜内活菌数比较( 1 0 7 c f u m I )经方差分析结认为总体间存在差异P 0 0 5 外，其他各组比较P 值均小于0 0 5 ，也就是说，B 与C 间差异无统计学意义，其他各组间均有统计学意义，即B 组与C 组无差异( 尸 0 0 5 ) ，其他各组均存
8、在明显差异( 尸 O 0 5 ) ，其余各组间均有统计学意义( P 0 0 5 ) ，从而说明M P C 在动物体内具有较好的抗细菌黏附、抗细菌生物膜形成的作用，而B 、C 两组间无差异，说明M P C 的抗菌能力可以达到单纯使用青霉素的水准，也就是说在临床中手术使用接枝M P C 的材料术后不使用青霉素与现阶段手术中使用普通内置物材料术后使用青霉素效果基本上是一致的，可见M P C 发挥着强大的抗菌黏附能力。徐州医学院硕士学位论文M P C 抗细菌黏附的机制可能是细菌在黏附过程中需向胞外分泌大量的粘多糖，有利于其黏附于物体的表面，而M P C 具有磷脂双分子层类似于细胞的细胞膜结构，能够有效
9、地防止细菌胞外多糖的黏附，使得大量的细菌在没有形成有益于自身生存的生物膜之前被动物自身的免疫系统及体内的青霉素所杀灭，仅有一少部分黏附在物体表面形成生物膜的细菌存活下来。由于生物膜内营养条件、生存空间的限制及有害代谢产物的堆积，使得膜内细菌处于低代谢状态，一些耐受性差的细菌缓慢移动最终离开生物膜，使得生物膜不断向膜外释放细菌变成浮游菌，进一步黏附物体的表面形成新的生物膜，最终导致慢性感染长期不能彻底治愈。综上所述，M P C 具有较强的抗细菌黏附及抗生物膜形成的能力，大量的实验证实M P C 对机体存在良好的组织相容性，不会引起机体的免疫排斥反应，无明显细胞毒作用，可有效的阻止细菌的黏附及延缓
10、细菌生物膜的形成，降低内置物手术术后的感染率，是良好的内置物表面涂层材料，可用于临床进一步研究。徐州医学院硕士学位论文结论本实验选用2 甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱为涂层，通过化学接枝法将M P C 接枝到骨科内置物钛板表面，并与应用有效抗生素进行比较分析得到的结论如下：l 、接枝M P C 后的钛板具有较强的抗细菌及生物膜黏附的作用。2 、外周肌肉注射青霉素可有效减少或延缓钛板表面B B F 的形成。3 、接枝M P C 的钛板联合使用青霉素后防止或延缓B B F 形成的效果更佳。3 9徐州医学院硕士学位论文研究展望细菌生物膜是引起慢性感染、骨科内固定术后感染长期抗生素治疗不能痊愈的主要原因，在
11、细菌生物膜形成之前使用有效抗生素杀灭内置物材料周围游离细菌，使机体内彻底不存在任何细菌就不会有生物膜形成，但是抗生素发挥作用也需用一定的时间，细菌生物膜的形成时间约为2 天，2 天内不能有效杀灭细菌就会导致生物膜的形成引起长期慢性感染，使用M P C 涂层后，能有效的阻止细菌的黏附、延长细菌生物膜形成时间，在细菌生物膜形成之前将所有游离菌及刚要黏附在内固定物表面的细菌使用有效地抗生素将其杀灭，减少术后的感染率；所有的研究均在人体外进行，即使是动物实验也不能完全模拟人体环境，下一步可以转移到人体内进行临床研究，并测试出M P C 延缓生物膜形成的时间及其单位时间内的降解率，指导临床应用，对进一步
12、降低放置内置物的手术术后的感染率，提高手术成功率，有着较高的研究价值。徐州医学院硕士学位论文参考文献1 M o o n sP ，M i c h i e l sCW ，A e r t s e nA B a c t e r i a li nt e r a c t i o n si nb i o f i l m s C r i tR e vM i c r o b i 0 1 2 0 0 9 ，3 5 ：1 5 7 - 1 6 8 2 V uB ，C h e nM ，C r a w f o r dRJ e ta 1 B a c t e r i a le x t r a c e l l u l a rp
13、 o l y s a c c h a r i d e si n v o l v e di nb i o f i l mf o r m a t i o n M o l e c u l e s ，2 0 0 9 ，1 4 ：1 5 3 5 - 1 5 5 4 3 D a r o u i c h eR O T r e a t m e n to fi n f e c t i o n sa s s o c i a t e dw i t hs u r g i c a li m p l a n t s J NE n g lJ M e d , 2 0 0 4 ，3 5 0 ( 1 4 ) 1 4 2 2 1
14、4 2 9 4 B e u l e A G , H o s e m a n n W B a c t e r i a l b i o f i l m s J L a r y n g o r h i n o t o l o g i e ，2 0 0 7 ，8 6 ：8 8 6 - 8 9 55 S c h i e r h o l z 蹦，B e u t hJ 1 m p l a n ti n f e c t i o n s ：ah a v e nf o ro p p o r t u n i s t i cb a c t e r i a 【J ，H o s pI n f e c t , 2 0 0 1 ；4 9 ：8 7 6 K o n gKF ，V u o n gC ，O t t oM S t a p h y l o c o c c u sq u o r u ms e n s i n gi nb i o f i l mf o r m a t i o na n di n f e c t i o n J I n tJM e dM i c r o b i o l ，2 0 0 6 ，2 9 6 ( 2 3 ) ：1 3 3 - 9 7 H a l l
