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1、第军医大学 士学位论文温敏性壳聚糖凝胶预防兔屈肌腱粘连的实验研究E x p e r i m e n t a lS t u d yo nP r e v e n t i n gF l e x o rT e n d o nA d h e s i o no fT h e r m o s e n s i t i v eC h i t o s a nH y d r o g e li nR a b b i t研究生：导师：司婷婷宋建星专业名称：外科学( 整形外科)培养单位：第二军医大学长海医院第二军医大学长海医院整形外科二O 一三年五月二硕本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作。除了文中
2、特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本人承担本声明的法律责任。学位论文作者签名日期：1 9 乡年盱月；D 日学位论文版权使用授权声明本人完全了解第二军医大学有关保留、使用学位论文的规定，第二军医大学有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权第二军医大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。( 保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名： p 挈跨导师签名：
3、JJJ日期：少侈年垮月如日日期：年月目录摘要1A b s t r a c t 3缩略词表( A b b r e v i a t i o n ) 6前言一7刖舌，材料与方法9一、实验材料9二、实验方法1 0结果1 6一、大体观察1 6二、生物力学测量1 9三、组织学检查2 1讨论2 6一、肌腱的结构和愈合机制2 6二、肌腱修复和粘连的病理基础2 8三、温敏性壳聚糖的结构2 8四、温敏性壳聚糖预防肌腱粘连的机制3 0结论3 4综述3 5参考文献4 6硕士在读期间发表的文章4 9致谢5 0温敏性壳聚糖凝胶预防兔屈肌腱粘连的实验研究摘要研究背景随着国家工业、制造业的发展，劳动密集型产业较多，部分地区治
4、安低下等原因导致手外伤发生率一直较高，而手外伤中肌腱损伤比例较大。肌腱修复的过程中伴随着肌腱与腱周组织粘连，而肌腱粘连的形成严重影响着手功能康复。肌腱粘连作为手外科的棘手问题之一，越来越引起临床工作者的重视。研究目的通过动物实验探讨温敏性壳聚糖凝胶预防肌腱粘连的效果。研究方法选取健康新西兰大白兔3 0 只( 6 0 侧) ，标签编号后，随机分成A 、B 、C 三组，三组中再根据术后观察时间3 周、6 周各分为2 个小组，每组5 只大白兔。在大白兔的双侧后足底第2 趾的近节趾骨做一线形切口，长约2 c m ，切开皮肤及皮下组织，逐层分离至腱鞘，切开腱鞘，于腱鞘切口处挑出1 条趾深屈肌腱及2 条趾
5、浅屈肌腱，用尖刀横行完全切断趾深屈肌腱和趾浅屈肌腱。用5 - 0 肌腱缝合线采用K e s s l e r 法缝合趾深屈肌断端，2 条趾浅屈肌断端不予处理，形成趾深屈肌腱切割断裂损伤模型。A组于伤口内注入温敏性壳聚糖凝胶0 2 m l ，B 组于伤口内注入医用几丁糖凝胶0 2 m l ，C 组于伤口内注入生理盐水0 2 m l ，缝合腱鞘和皮肤，石膏固定。术后3 周、6 周分别行大体解剖观察、行组织学检查和生物力学测定。研究结果1 、大体解剖观察结果：各组实验白兔双足伤口均已I 期愈合，术后3 、6 周A 组肌腱粘连程度均轻于B 、C 组，差异有统计学意义( P 0 0 5 ) ；术后6 周，
6、A 、B 组中分别有3 条肌腱吻合口抗拉力强度大于2 0 N ，C 组中分别有4 条肌腱吻合口抗拉力强度大于2 0 N ，C 组肌腱吻合口抗拉力强度优于A 组、B 组，而差异无统计学意义( P 0 0 5 ) 。3 、组织学检查：术后3 周，各组肌腱的桥接处有大量成纤维细胞增生，断端由新生的胶原纤维相连接，C 组相对A 、B 组排列紊乱，组织之间无明显炎症细胞浸润，肌腱与周围组织有所粘连。术后3 周A 组肌腱成纤维细胞数明显少于B 组和C 组，差异有统计学意义( P O 0 5 ) ，A 、B 组间比较P 0 0 5 ) 6w e e k sa f t e rs u r g e r y ，t
7、h eu l t i m a t et e n s i l es t r e n g t ho f t h r e e t e n d o n si ng r o u pA ，Ba n df o u rt e n d o n so fg r o u pCw e r eg r e a t e rt h a n2 0 N T h e r ew a sn os i g n i f i c a n td i f f e r e n c ei nt h eu l t i m a t et e n s i l es t r e n g t ho ft h et e n d o na m o n g3g r
8、 o u p s ( P 0 0 5 ) 3 H i s t o l o g ye v a l u a t i o n ：3w e e k sp o s t o p e r a t i v e l y , f i b r o b l a s ta c t i v e l yp r o l i f e r a t e da n dm i g r a t e dt ot e n d o na n a s t o m o s i s ，n e w b o r nc o l l a g e nf b e r sc o n n e c t e db r o k e ne n do ft e n d o
9、n F i b r o b l a s ta n dc o l l a g e nf i b e r sw e r ed i s o r d e r e de s p e c i a l l yi ng r o u pC T h en u m b e ro ff i b r o b l a s tc e l l si nt h et e n d o no fg r o u pAw e r el e s st h a nt h a ti ng r o u pBa n dg r o u pC t h ed i f f e r e n c ew a ss t a t i s t i c a l l
10、ys i g n i f i c a n t ( P O 0 5 ) ；术后6 周，A 、B 组中分别有3 条肌腱吻合口抗拉力强度大于2 0 N ，C 组中分别有4 条肌腱吻合口抗拉力强度大于2 0 N ，C 组肌腱吻合口抗拉力强度虽优于A 组、B 组，差异无统计学意义( P O 0 5 ) ，具体结果见表5 。表4 三组术后3 周肌腱吻合口抗拉力强度( i s ，N )温敏性壳聚糖凝胶预防兔屈肌睫粘连的实验研究表5 三组术后6 周肌腱吻合口抗拉力强度( i s ，N )三、组织学检查术后3 周，各组肌腱的桥接处有大量成纤维细胞增生，断端由新生的胶原纤维相连接，C 组相对h 、B 组排列紊乱，
11、组织之间无明显炎症细胞浸润，肌腱与周围组织有所粘连( 图1 3 - 1 5 ，1 9 ) 。术后3 周A 和B 组肌腱边缘成纤维细胞数明显少于C 组，差异有统计学意义( e O 0 5 ) 考虑肌腱滑动距离不仅受到粘连的影响，而且和肌腱本身的生物力学特征如长度、肌纤维数量以及肌腱营养保存密切相关，而这些特征是存在个体差异的，因此拉伸长度的指标有待改进，也许可采用拉伸率比较来减少其受本身长度的影响。术后3 周，3 组的肌腱吻合口抗拉力强度无明显差异，而术后6 周，A 、B 组中分别有3 条肌腱吻合口抗拉力强度大于2 0 N ，C 组中分别有4 条肌腱吻合口抗拉力强度大于2 0 N ，并且3 组间
12、3 组的肌腱吻合口抗拉力强度无明显差异，这表明了说明温敏性壳聚糖和几丁糖虽然抑制了肌腱的外源性愈合，但没有影响肌腱的内源性愈合，肌腱愈合的牢固程度无明显变化，说明温敏性壳聚糖和几丁糖不影响肌腱愈合质量。组织学检查，术后3 周、6 周温敏性壳聚糖组和几丁糖组肌腱边缘成纤维细胞数明显少于空白组，且温敏性壳聚糖组的成纤维细胞数较几丁糖组少；温敏性壳聚糖组肌腱边缘的胶原含量明显少于几丁糖组和空白组。这些结果表明在温敏性壳聚糖较几丁糖更能有效的抑制成纤维细胞增生和胶原沉积，从而抑制外源性愈合，促进内源性愈合。但本实验中并没有明确比较各时间段三组肌腱的腱鞘、腱外膜及腱实质的成纤维细胞数和胶原含量，并没有明
13、确温敏性壳聚糖对腱鞘、腱外膜及腱实质细胞的影响。术后3 、6 周三组的大体观察的肌腱粘连程度和近、远节趾间关节屈曲角度和结果及滑动距离均表示温敏性壳聚糖和几丁糖可有效的预防肌腱的粘连，并且温敏性壳聚糖预防肌腱粘连的效果优于几丁糖。第二军医大学硕士学位论文结论肌腱粘连作为手外科的棘手问题之一，越来越引起临床工作者的重视。但目前临床工作中并没有十分有效的抑制肌腱粘连的方法。目前认为，促进内源性愈合，抑制外源性愈合是预防肌腱粘连关键。本实验中建立兔屈肌腱断裂损伤模型，局部应用温敏性壳聚糖凝胶于肌腱吻合处，通过大体观察、生物力学检测、组织学观察等方法与医用几丁糖凝胶相比较，主要结论如下：1 、温敏性壳
14、聚糖凝胶在人体的生理温度时，由液体转化成具有一定机械强度的凝胶状，发挥其生物屏障作用、抑制成纤维细胞的生长和降低胶原纤维的产生，有效的抑制肌腱外源性愈合而促进其内源性愈合，预防肌腱粘连，与医用几丁糖相比较，预防肌腱粘连的效果更明显。2 、温敏性壳聚糖凝胶在机内能完全被降解吸收，并且无明显过敏反应及毒副作用。温敏性壳聚糖凝胶预防兔屈肌腱粘连的实验研究综述预防肌腱粘连的研究进展肌腱损伤在手外伤中很常见。肌腱修复的过程也是肌腱与腱周组织粘连形成的过程，而肌腱粘连的形成严重影响着手功能康复。肌腱粘连作为手外科的棘手问题之一，越来越引起临床工作者的重视。经过多年来大量的实验和临床研究，预防肌腱粘连方面得
15、以较好的改善，现综诉如下：1 、肌腱的结构和营养1 1 、肌腱的结构和生物力学肌腱是连接骨与肌肉之间的致密结缔组织，对力的传输和关节的运动起着至关重要的作用。胶原在肌腱排列具有多样性，纵形排列、横向和水平的排列同时存在，并且形成螺旋结构n 棚，I 型胶原在肌腱组织内紧密而平行的排列，这决定了肌腱的生物力学特性，在纤维走形的方向上具有较高的弹性和抗拉强度口1 。肌腱和韧带的组织结构是是逐层分布的，从分子到组织H 3 。三螺旋的I 型胶原蛋白分子包绕在一起，形成长为3 0 0 n m ，直径为1 5n l T l 的微纤维旧。微纤维相互交错形成原纤维( 直径约为5 0 2 0 0 n t o ) 。原纤维紧密排列构成胶原，直径为3 7 1 a m 晦- 7 1 。胶原形成纤维束，纤维束之间主要借少量无定行排列基质相连接，纤维柬外有束状膜包绕。肌腱主要由胶原
