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1、O P T I M I Z A T I o NF O RT H ET E C H N I C A LO FI S O L A T E DM I C R o S P O R EC U L T U R EO FK O M A T S U N AB yY uW e n - j i a S u p e r v i s e db yP r o f e s s o rH o uX i - l i nT h eD i s s e r t a t i o nS u b m i t t e dt oN a n j i n gA g r i c u l t u r a lU n i v e r s i t yI
2、nP a r t i a lF u l f i l l m e n to ft h eR e q u i r e m e n t sF o rM a s t e rD e g r e eo fA g r i c u l t u r a lS c i e n c e sC o l l e g eo fH o r t i c u l t u r e ，N a n ji n gA g r i c u l t u r a lU n i v e r s i t y ，N a n j i n g2 1 0 0 9 5 ，P R C h i n aM a y ，2 0 1 2原创性声明本人郑重声明：所呈交的
3、学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。一( 一) 签0 弓1 见川咖夕学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南京农业大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编学位论文。保密口，在年解密后适用本
4、授权书。本学位论文属于不保密彩( 请在以上方框内打“”)学位论文作者( 需亲笔) 签导师( 需亲笔) 签名：参1 免I很，勿样 l洲年r 月7 日训，蛑朋7 日目录目录摘要IA B S T R A C T I I I缩略词表V第一部分文献综述第一章芸薹属植物游离小孢子培养研究进展11 1 植物单倍体育种的研究进展11 1 1 单倍体育种的意义及产生途径11 1 2 花药和游离小孢子培养21 2 芸薹属蔬菜小孢子培养研究概况31 2 1 影响游离小孢子胚胎发生因素研究进展41 2 2 影响小孢子植株再生因素的研究1 11 2 3 小孢子再生植株的倍性鉴定1 21 2 4 游离小孢子培养存在的问题
5、1 3第二部分研究报告第一章小菘菜游离小孢子胚胎诱导率影响因素的研究1 5第一节花蕾生理状态、培养基、温度对小菘菜小孢子胚胎发生率的研究1 52 1 材料与方法152 1 1 材料1 52 1 2 试验方法1 52 2 结果与分析1 82 2 1 不同基因型对小菘菜小孢子胚胎发生率的影响1 82 2 2 花蕾长度及瓣药比与小孢子发育时期的关系1 92 2 3 不同开花时期对小孢子胚胎发生率的影响2 02 2 4 低温与高温热激时间组合对小菘菜小孢子胚胎发生率的影响2 12 2 5 植物生长调节剂对小菘菜小孢子胚胎发生率的影响2 1小菘菜游离小孢子培养技术的优化2 2 6 更换培养液对小菘菜小孢
6、子胚胎发生率的影响2 22 2 7 秋水仙碱对小菘菜小孢子胚胎发生率的影响2 32 3 讨论2 42 3 1 基因型对小菘菜小孢子胚胎发生率的影响2 42 3 2 花蕾长度及瓣药比与小孢子发育时期的关系2 42 3 3 不同开花时期对小孢子胚胎发生率的影响2 52 3 4 温度对小菘菜小孢子胚胎发生率的影响2 52 3 5 植物生长调节剂对小菘菜小孢子胚胎发生率的影响2 62 3 6 更换培养液对小菘菜小孢子胚胎发生率的影响2 62 3 7 秋水仙碱对小菘菜小孢子胚胎发生率的影响2 7第二节提取培养基对小菘菜小孢子胚胎发生率的影响2 72 4 材料与方法2 72 4 1 试验材料2 72 4
7、2 试验方法2 72 5 结果与分析2 82 5 1 提取培养基中的蔗糖对小孢子活力和胚胎发生率的影响2 82 5 2 高浓度蔗糖的提取液对小孢子胚胎发生率的影响2 92 5 3 提取培养基中的甘露醇对小孢子胚胎发生率的影响3 02 6 讨论3 0第二章影响小菘菜小孢子胚成苗的因素研究3 33 1 材料与方法3 33 1 1 试验材料3 33 1 2 试验方法3 33 2 结果与分析3 43 2 1 子叶型胚在液体培养基中滞留时间对胚成苗率的影响3 43 2 2 小孢子胚的发育时期对成苗率的影响3 53 2 3 冷处理对小孢子胚成苗率的影响3 53 2 4B 5 固体培养基中琼脂浓度对小菘菜胚
8、成苗的影响3 63 2 5B 5 固体培养基中的A g N 0 3 含量对小菘菜胚芽诱导的影响3 73 3 讨论3 83 3 1 培养基中的水分对小菘菜胚成苗的影响3 83 3 2 不同类型的胚对成苗率的影响3 93 3 3B 5 固体培养基中的A g N 0 3 含量对小菘菜胚芽诱导的影响3 9目录第三章小菘菜小孢子再生植株的倍性鉴定4 l4 1 材料与方法4 14 1 1 试验材料4 14 1 2 试验方法4 14 2 结果与分析4 14 3 讨论4 2全文结论4 3参考文献。4 5附录! ；1论文发表情况5 7致谢5 9摘要小菘菜游离小孢子培养技术的优化摘要小菘菜 B r a s s i
9、 c ac a m p e s t r i sL s s p c h i n e n s i s ( L ) M a k i n ov a t c o m m u n i sT s e ne tL e e 是十字花科( C r u c i f e r a e ) 芸薹属芸薹种不结球白菜亚种的一个变种。由于小菘菜为异花授粉植物，用常规方法进行田间育种，一般需要6 8 代才能选育出理想的材料。但通过游离小孢子培养( I s o l a t e dM i c r o s p o r eC u l t u r e ，I M C ) 这一技术不仅可以快速获得纯合的育种材料系统，缩短育种年限，提高育种效率
10、，而且对新品种的选育和种质资源的开发起到非常大的作用。目前我国游离小孢子培养虽已取得了较大的进展，但是小孢子基因型间产胚率差异大及植株再生率低仍然是实际应用中的一大难题。本论文通过对选取的9 份不同基因型的小菘菜为试材，对影响小孢子出胚率和植株再生率的因素以及小孢子再生植株染色体倍性的鉴定进行了研究，旨在建立高频稳定的小菘菜小孢子培养体系。主要研究结果如下：1 在影响小菘菜游离小孢子胚胎诱导率的因素方面：( 1 ) 基因型对小菘菜小孢子的胚胎发生能力起着决定性的作用；( 2 ) 不同基因型材料最适的花蕾长度有着一定的差异，小菘菜的花蕾长度在2 o o 2 9 9m l T l 时，小孢子单核靠
11、边期的比例最大，获得的胚状体最多；( 3 ) 小菘菜游离小孢子培养最适的取材时期是在盛花期，初花期和末花期的小孢子胚胎诱导率低；( 4 ) 小菘菜最适的温度预处理组合为40 C 低温处理l d + 3 3 高温热激处理1 d 。( 5 ) 不同的基因型对植物生长调节剂的反应不同。对于易出胚材料N H C C 秋6 3 3 而言，在不添加任何激素的培养基中胚胎发生率最高；在1 2 N L N 培养基中添加0 0 5m g L 。16 - B A 和0 2m g L 以N A A - j - 以促进不能出胚的材料出胚。对于中出胚和难出胚的基因型，添加0 。0 5m g L 。16 - B A 和0 1 m g L 。1N A A h 丕胎诱导率最高。( 6 ) 前期用1 7 的高糖培养基处理小孢子1 d 后更换新鲜的1 3 的蔗糖培养基对小孢子的出胚率有促进作用。( 7 ) 用0 8 m g L 1
