《嗜水气单胞菌非质粒依赖性菌蜕疫苗的研制及评价》由会员分享，可在线阅读，更多相关《嗜水气单胞菌非质粒依赖性菌蜕疫苗的研制及评价（134页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、Y 嬲磐嬲2 3 6 0 2 9 0B yL i x i aFUIXlauS u p e r v i s o r ：P r o f D r C h e n g p i n gL u一-Ad i s s e r t a t m nS u b m i t t e dt oN a n ji n gA g r i c u l t u r a lU n i v e r s i t yI np a r t i a lf u l f d l m e n to f t h er e q u i r e m e n t sf o rT h eD e g r e eo fD o c t o ro ft h eS
2、c i e n c e( H y d r o b i o l o g y )C o m p l e t e di nS e p t e m b e r2 012C o m m e n c e m e n ti nN o v e m b e r2 01 2原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者c 需亲笔，虢寸乡霞勿蛑，7 日学位论文版权使用
3、授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南京农业大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编学位论文。， 保密口，在年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密囡。( 请在以上方框内打“”)学位论文作者( 需亲导师( 需亲笔) 签名：加tZ ，年fl 具2 - o l 乙年ff 其z7E tf力7E t目录目录摘要IA B ；T R A C T I I I第一篇文献综述第一章嗜水气单胞菌的生物学特性、流行病学及主要毒力因子研究
4、进展11 嗜水气单胞菌的生物学特性11 1 菌名与分类地位11 2 形态特征21 3 生理生化特征22 嗜水气单胞菌的流行病学32 1嗜水气单胞菌的分布及宿主范围32 2 嗜水气单胞菌的传播及感染方式32 3 嗜水气单包菌的血清型42 4 嗜水气单胞菌所致疾病的病理特征53 嗜水气单胞菌的致病机理63 1 粘附因子63 2 胞外产物( E x t r a c e l l u l a rP r o d u c t s ，E C P ) 73 3I I I 型分泌系统( t y p eI I Is e c r e t i o ns y s t e m ，T T S S ) 1 0第二：章细菌菌蜕研
5、究进展2 11菌蜕形成的过程和机制2 12 菌蜕的基本结构2 23 菌蜕的制备2 24 菌蜕的应用2 44 1 菌蜕疫苗2 44 2 抗原载体2 64 3 核酸载体2 84 4 药物载体2 94 5 免疫佐剂3 0嗜水气单胞菌非质粒依赖性茵蜕疫苗的研制及评价5 展望31第二篇试验研究第三章嗜水气单胞菌疫苗候选菌株的验证3 9材料和方法3 91 1菌株3 91 2 选择性培养基筛选3 91 3 生理生化鉴定3 91 41 6 Sr D N A 序列分析4 01 5g y r B 序列分析。411 61 6 Sr R N A 和g y r B 基因序列系统进化树构建4 11 7 对异育银鲫半数致死
6、浓度( L D 5 0 ) 的测定4 22结果4 22 1J l 株的形态特征4 22 2 生理生化鉴定4 32 31 6 Sr R N A 和g y r B 鉴定结果4 43讨论4 6第四章基于p R p L 分别启动裂解基因E 和核酸酶A 基因共表达载体的构建5 11 材料和方法5 21 1 菌株、质粒和培养基5 21 2 质粒p B V 2 2 0 E 的构建5 31 3 质粒p B V 2 2 0 S N A 的构建5 41 4 质粒p K F 3 9 6 M 的构建5 51 5 质粒p K F 3 9 6 M 2 的构建5 61 6 质粒p K F 3 9 6 M 一3 的构建5 6
7、1 7 质粒p K F 3 9 6 M 一4 的构建5 61 8 质粒p K F 3 9 6 M - 5 的构建5 71 9 质粒p K F 3 9 6 M - 2 一G F P 和p K F 3 9 6 M 3 G F P 的构建5 71 1 0 基因E 和S N A 基因的诱导表达5 71 11G F P 的诱导与观察5 81 1 2 细菌基因组和质粒的制备和检测5 82结果5 8目录2 1p B V 2 2 0 系列衍生质粒的构建5 82 2p K F l6 c 系列衍生质粒的构建5 92 3金黄色葡萄球菌核酸酶在大肠杆菌内的表达6 12 4E S D 对基因表达的影响6 22 5 裂解
8、基因E 和金黄色葡萄球菌核酸酶的共表达6 33讨论6 5第五章嗜水气单胞菌a r o A 无标记缺失突变株的构建及其特性7 l1 材料和方法7 21 1 质粒与菌株7 21 2 主要试剂与培养基7 21 3 主要仪器7 21 4 大肠杆菌D H 5 a 和S M l 0k p i r 感受态细胞的制备7 21 5a r o A 基因及其上下游序列的克隆7 31 6p D S l 3 3 载体的构建7 31 7 重组自杀性质粒p D S l 3 3 L R ( a r o A ) 的构建7 41 。8 结合转移及缺失株的筛选鉴定7 71 9J 1 A a r o A 株的特性7 92结果7 92
9、 1a r o A 基因及其上下游序列的克隆7 92 2p D S l 3 3 鉴定8 l2 3p D S1 3 3 L R 的构建及鉴定8 22 4 缺失株的筛选和鉴定一8 22 5J 1 A a r o A 株的生物学特性一8 33讨论8 73 1J 1a r o A 非抗性缺失突变株的构建及筛选8 73 2J 1a r o A 非标记缺失突变株的特性8 8第六章基于染色体裂解基因E 介导的嗜水气单胞菌菌蜕疫苗的制备。9 31 材料和方法9 41 1 质粒与菌株9 41 2 主要试剂与培养基9 41 3 主要仪器9 41 4 重组自杀性质粒p D S l 3 3 L L C R 的构建9 41 5 大肠杆菌S M l 0Z , p i r ( p D S l 3 3 L L C R ) 的溶菌动力学9 4嗜水气单胞菌非质粒依赖性菌蜕疫苗的研制及评价1 6 结合转移及突变株的筛选鉴定9 61 7 嗜水气单胞菌
