《甜菜夜蛾和斜纹夜蛾触角酯酶及褐飞虱气味结合蛋白的基因克隆及功能研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《甜菜夜蛾和斜纹夜蛾触角酯酶及褐飞虱气味结合蛋白的基因克隆及功能研究（174页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、学号一2 0 0 9 2 0 2 0 19南京蔑黄戈学博士学位论1 文甜菜夜蛾和斜纹夜蛾触角酯酶及褐飞虱气味结合蛋白的基因克隆及功能研究贺鹏M O L E C U L A RA N DF U N C T I O N A L C H A R A C T E R I Z A T I o NO FA N T E N N A LE S T E R A S E S 磷S P o D o P T E R AE G U A 人N DS P o D o P T E R A L r Z l U R 4A N Do D o R A N TB I N D I N GP R O T E I N S 玳旭醐刚欠嘲黝三删
2、b yH eP e n gAD i s s e r t a t i o nS u b m i t t e dt oN a n ji n gA g r i c u l t u r a lU n i v e r s i t y I nP a r t i a lF u l f i l l m e n to ft h eR e q u i r e m e n t s F o rt h eD o c t o rD e g r e eo fA g r i c u l t u r eS c i e n c eS u p e r v i s e db y P r o f e s s o rD o n gS h
3、 u a n g l i nD e p a r t m e n to fE n t o m o l o g y C o l l e g eo fP l a n tP r o t e c t i o nN a n ji n gA g r i c u l t u r a lU n i v e r s i t y , N a n j i n g21 0 0 9 5 ，P lR C h i n aJ u n e2 0 1 2原创性声明本人巅重声瞬：所呈交的学位论文，是本人往导师煎指导下，独立进行研究工作黟i 取得的成采s 除文中已经注明弓- ，疆的内容分，本论文不包含任何其他个人或集体曼经发表或撰写过
4、的作品成果。对本文的研究徽也重要贞献的个人帮集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声埂的法律结果出本人承担。学位论文作者( 需亲笔) 签名：锄矿年r 月如日学位论文版权使用授权书本学谯论文作者完令了勰举校有关保留、佳媸学位论文的规定，同意学校镰留并淘嗣家有关部门或机构送交论文的复印件和电了版，兔许论文被查嘲秉J 信翅。本人援梗南京农业大学可以将本学位论文的全部或都分内窖编入有关数甥席：一”进行检索，可以采甩影印、缩印或扫撼等复制手段保存和汇编学使论文。僳寄目；蠢，年解密后遗用本授权书。本学位论文属于不保密瞄。傅孝塔 ：密捶内打打)学位论文作者( 需象笔) 签名：鸯羽弓如，年，月扣同导
5、师需采仕多知心年”r 月妒目录目录摘要IA B S T R A C T V英文缩略语j X I第1 章文献综述11 1昆虫气味信号传导过程11 1 1周缘神经过程11 1 2中枢神经过程31 2昆虫气味结合蛋白的研究进展41 2 1气味结合蛋白的数量和分类41 2 2气味结合蛋白分子特征及其对气味分子的结合和释放机制61 2 3气味结合蛋白体外配体结合实验及体内功能研究1 31 2 4气味结合蛋白生理功能1 51 3昆虫气味降解酶的研究进展一1 61 3 1气味降解酶的分类1 71 3 2触角淋巴液中可溶性酶1 71 3 3触角淋巴液中膜结合酶。2 01 3 4胞内酶2 01 3 5表皮酶2
6、21 4昆虫酯酶分类及羧酸，胆碱酯酶作用机理2 31 4 1分类2 31 4 2羧酸胆碱酯酶作用机理2 41 5本研究目的与意义2 5第2 章甜菜夜蛾触角酯酶基因的克隆、序列分析和表达谱研究。2 72 1材料与方法2 82 1 1供试材料及材料收集2 82 1 2主要试剂和仪器设备2 82 1 3昆虫核酸提取2 92 1 4D N A 第一链的合成一2 92 1 5甜菜夜蛾转录组C X E 同源搜索及引物设计3 02 1 6P C R 扩增3 32 1 7R A C E 技术扩增C X E 基因的c D N A 全序列3 42 1 8P C R 产物纯化、克隆和测序3 42 1 9甜菜夜蛾C
7、X E 基因的定量分析3 52 2结果与分析一3 62 ，2 1甜菜夜蛾C X E 基因c D N A 片段的获得3 62 2 2甜菜夜蛾C X E 基因e D N A 全长及基因组D N A 的克隆与分析3 72 2 3荧光定量P C R 产物熔解曲线分析4 2甜菜夜蛾和斜纹夜蛾触角酯酶及褐飞虱气味结合蛋白的基因克隆及功能研究2 2 4甜菜夜蛾C X E 基因的组织表达谱4 42 2 5甜菜夜蛾C X E 基因表达的日动态4 52 3 寸论一4 6第3 章斜纹夜蛾触角醑酶基因的克隆、序列分析和表达谱研究4 93 1材料与方法5 03 1 1供试材料及材料收集5 03 1 2主要试剂和仪器设备
8、5 03 1 3昆虫核酸提取5 03 1 4D N A 第一链的合成5 03 1 5P C R 引物设计5 03 1 6P C R 扩增5 03 1 7R A C E 技术扩增C X E 基因的e D N A 全序列5 03 1 8P C R 产物纯化、克隆和测序5 23 1 9斜纹夜蛾C X E 基因系统发育分析5 23 1 1 0斜纹夜蛾C X E 基因的定量分析5 33 2结果与分析一5 33 2 1斜纹夜蛾C X E 基因e D N A 片段的克隆与分析5 33 2 2斜纹夜蛾C X E 基因e D N A 全长及基因组D N A 的克隆与分析5 43 2 3斜纹夜蛾和甜菜夜蛾C X
9、E 系统发育分析5 83 2 4荧光定量P C R 产物熔解曲线分析5 93 2 5斜纹夜蛾C X E 基因的组织表达谱5 93 2 6斜纹夜蛾C X E 基因表达的日动态6 13 3讨论6 2第4 章甜菜夜蛾和斜纹夜蛾触角醑酶的体外表达及蛋白纯化一6 54 1材料与方法一6 64 1 1主要试剂和仪器设备6 64 2甜菜夜蛾和斜纹夜蛾C X E 基因真核表达供体质粒构建6 74 2 1引物设计6 74 2 2P C R 扩增：6 94 2 3P C R 纯化产物纯化、克隆、测序6 94 2 4双酶切、连接、转化测序6 94 2 5重组杆状病毒质粒的构建6 94 2 6昆虫细胞的培养。7 04 2 7重组病毒B a e m i dD N A 对昆虫细胞的的转染及感染7 04 2 8S D S P A G E 及W e s t e r n 杂交一7 l4 ，2 9重组酯酶的N a t i v e P A G E 鉴定7 24 2 1 0酯酶亲和纯化及超滤浓缩7 34 3结果与分析一7 44 3 I重组杆状病毒B a c m i d 的获得7 44 。3 2H i g h - F i v e 细胞被重组B a e m i d 感染后症状
